腫瘤學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技能培訓(xùn)

腫瘤學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技能培訓(xùn)2015年7月13日1可編輯課件PPT一、常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及選擇——品系選擇

名稱毛色免疫特性適合實(shí)驗(yàn)BALB/c白色野生型同基因型腫瘤實(shí)驗(yàn)C57BL黑色野生型同基因型腫瘤實(shí)驗(yàn)NudeBALB/c,裸鼠無(wú)毛胸腺缺陷，T細(xì)胞缺陷人移植瘤實(shí)驗(yàn)SCID白色T、B細(xì)胞減少，細(xì)胞免疫和體液免疫缺陷，巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞正常免疫功能重建，腫瘤學(xué)NOD/SCID白色與SCID相比，NK細(xì)胞減少免疫功能重建，腫瘤學(xué)NOG/NSG白色I(xiàn)L-2受體缺陷，與NOD/SCID相比，天然和獲得性免疫缺陷更高免疫功能重建，腫瘤細(xì)胞治療BALB/cC57BL裸鼠SCIDNOD/SCIDNOG/NSG2可編輯課件PPT

成年動(dòng)物的年齡、體重和壽命比較

小鼠大鼠豚鼠兔狗成年日齡（天）65～9085～11090～120120～180250～360成年體重（g）20～28200～280350～6002000～35008000～15000平均壽命（年）1～22～3＞25～613～17最高壽命（年）＞3＞4＞6＞1334一、常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及選擇——年齡選擇

一般購(gòu)買6-8周小鼠，用于實(shí)驗(yàn)3可編輯課件PPT二、小鼠的飼養(yǎng)——環(huán)境

微生物控制等級(jí)選擇

普通級(jí)動(dòng)物：示教、預(yù)實(shí)驗(yàn)清潔級(jí)動(dòng)物：適用大多數(shù)科研。無(wú)特定病原體動(dòng)物（SPF）：為理想的健康動(dòng)物，適用于所有科研、檢定。無(wú)菌動(dòng)物（GF）：適用于特殊研究。4可編輯課件PPT動(dòng)物室環(huán)境控制要求值項(xiàng)目控制要求值備注溫度21～27℃按動(dòng)物品種而有若干差別濕度45～55%氣流速度10～25cm/秒避免直吹風(fēng)換氣次數(shù)8～15次/小時(shí)100%新鮮空氣（如使用循環(huán)空氣，不應(yīng)超過(guò)總空氣量的1/3）照明75～300lux定時(shí)人工照明（分置小瓦數(shù)日光燈）氨濃度20ppm以下噪音50分貝以下無(wú)動(dòng)物時(shí)（有動(dòng)物時(shí)，除狗居外，不高于65分貝）

二、小鼠的飼養(yǎng)——環(huán)境

5可編輯課件PPT動(dòng)物飼養(yǎng)密度動(dòng)物飼養(yǎng)密度應(yīng)符合衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，有一定的活動(dòng)面積，不能過(guò)分擁擠。各種動(dòng)物所需籠具的面積和體積因飼養(yǎng)目的而異，哺乳期所需面積較大，一般小鼠4-6只/籠。二、小鼠的飼養(yǎng)——密度

6可編輯課件PPT二、小鼠的飼養(yǎng)——墊料、飼料、水

墊料、飼料均需經(jīng)過(guò)輻照并密封包裝。水，自來(lái)水121度高壓滅菌20min。飼料選擇營(yíng)養(yǎng)均衡的配方飼料即可，特殊情況才選擇高蛋白，高脂肪飼料。7可編輯課件PPT三、腫瘤建模

腫瘤模型類型：皮下移植瘤、肺轉(zhuǎn)移模型、原位移植瘤；

查閱文獻(xiàn)確定細(xì)胞接種濃度：一般1*106

個(gè)細(xì)胞左右；

預(yù)實(shí)驗(yàn)：以2倍比例選擇三個(gè)細(xì)胞濃度開(kāi)展預(yù)實(shí)驗(yàn)；

準(zhǔn)備細(xì)胞：細(xì)胞重懸于PBS、生理鹽水或基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，定量；

接種：皮下接種可選擇乙醚麻醉，100ul/位點(diǎn)；肺轉(zhuǎn)移尾靜脈注射，用小鼠固定器，200ul/只；對(duì)于皮下移植瘤，如需細(xì)胞數(shù)量較大，可以接種組織塊兒；皮下接種部位：Flank，背頸部，腋窩。8可編輯課件PPT四、標(biāo)記與分組編號(hào)與標(biāo)記方法染色法剪耳法穿耳孔法標(biāo)牌法烙印法剪毛法9可編輯課件PPT在每組動(dòng)物不超過(guò)l0只或一個(gè)實(shí)驗(yàn)不超過(guò)40只的情況下適用染色劑：3-5％苦味酸溶液，可染成黃色染色法：?jiǎn)紊咳痉ㄋ?、?biāo)記及分組——單色染色法10可編輯課件PPT涂染原則：從左到右、從上到下左前肢為1號(hào)、左側(cè)腹部2號(hào)、左后肢3號(hào)，兩耳后部4號(hào)、背部5號(hào)、后肢背部6號(hào)，右前肢7號(hào)、右側(cè)腹部8號(hào)、右后肢9號(hào)頭部為40號(hào)、尾巴根為10號(hào)。方法步驟四、標(biāo)記及分組——單色染色法11可編輯課件PPT在每組動(dòng)物不超過(guò)100只的情況下適用常用染色劑：3-5％苦味酸溶液，可染成黃色，作為“個(gè)”位數(shù)常用染色劑：0.5%中性紅或品紅溶液，可染成紅色，作為“十”位數(shù)四、標(biāo)記及分組——雙色染色法12可編輯課件PPT用兩種顏色同時(shí)進(jìn)行染色標(biāo)記用苦味酸(黃色)染色標(biāo)記作為個(gè)位數(shù)，個(gè)位數(shù)的染色標(biāo)記方法同單色涂染法用品紅(紅色)染色標(biāo)記作為十位數(shù)四、標(biāo)記及分組——雙色染色法方法步驟13可編輯課件PPT左前肢為10號(hào)、左側(cè)腹部20號(hào)、左后肢30號(hào)兩耳后部40號(hào)、背部50號(hào)、后肢背部60號(hào)右前肢70號(hào)、右側(cè)腹部80號(hào)、右后肢90號(hào)第100號(hào)不作染色標(biāo)記方法步驟14可編輯課件PPT穿耳孔法：用專用耳空器在動(dòng)物耳朵不同部位打一小孔或缺口表示一定號(hào)碼的方法。原則是：左耳代表十位，右耳代表個(gè)位。標(biāo)牌法：一般掛在動(dòng)物的頸部、耳朵、腳上。烙印法剪毛法四、標(biāo)記及分組——其他方法15可編輯課件PPT四、標(biāo)記及分組——分組一致性原則差異是絕對(duì)的，一致是相對(duì)的利用隨機(jī)數(shù)字表進(jìn)行隨機(jī)分組，最大限度避免人為因素16可編輯課件PPT五、治療、給藥

治療起點(diǎn)和途經(jīng)根據(jù)不同的腫瘤和治療藥物不同而定；皮下移植瘤，尾靜脈給藥：50mm3,100mm3；皮下移植瘤，瘤內(nèi)給藥：200-300mm3；腹腔給藥。17可編輯課件PPT六、腫瘤的測(cè)量

皮下移植瘤：游標(biāo)卡尺測(cè)量，稱重，小動(dòng)物活體成像；

肺轉(zhuǎn)移瘤：肺表面結(jié)節(jié)數(shù)，小動(dòng)物活體成像；18可編輯課件PPT皮下移植瘤實(shí)驗(yàn)：生存期較長(zhǎng)，有如下情況者處死小鼠，記為死亡：腫瘤長(zhǎng)徑達(dá)到2cm，或體積大于1cm3；蜷縮不動(dòng)；毛發(fā)蓬松臟亂無(wú)光；對(duì)外界刺激無(wú)反應(yīng)；體重明顯下降的（24h內(nèi)下降2-3g）。七、小鼠生存期統(tǒng)計(jì)——治療終點(diǎn)轉(zhuǎn)移瘤實(shí)驗(yàn)：一般生存期較短；19可編輯課件PPT八、動(dòng)物組織標(biāo)本采集

收集心、肝、脾、肺、腎等主要臟器，福爾馬林固定，

HE染色觀察治療毒性；

治療實(shí)驗(yàn)：收集腫瘤組織，福爾馬林固定，觀察腫瘤指標(biāo)；免疫熒光實(shí)驗(yàn)：收集新鮮組織，做冰凍切片；20可編輯課件PPT九、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理

悉心照料動(dòng)物，保證正常生存條件；皮下移植瘤體積最大長(zhǎng)至長(zhǎng)徑2cm或體積1cm3；實(shí)驗(yàn)結(jié)束對(duì)小鼠進(jìn)行安樂(lè)死，拖頸或CO2處死；21可編輯課件PPT十、