植病研究法思考題

柯赫氏法則的內(nèi)容有哪些？某種病害經(jīng)常與特定的微生物有關(guān)，通過(guò)對(duì)感病組織的鏡檢往往可看到這種微生物的存在；

從病組織上可以分離得到這種微生物并獲得純培養(yǎng)；用分離所得的純菌種接在健康的寄主植物上，能引致相同的病害；從接種后發(fā)病的植株上，能再分離到原來(lái)的微生物。簡(jiǎn)述植物病原真菌組織分離法和稀釋?zhuān)ūё樱┓蛛x法的適用材料及優(yōu)缺點(diǎn)。組織分離法材料：斑點(diǎn)病病原真菌的分離、維管束組織內(nèi)病原真菌的分離、根腐的分離、肉質(zhì)組織中病

菌的分離、種子內(nèi)病菌的分離。優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便，后代不易變異，能保持原菌種優(yōu)良特性缺點(diǎn)：如果菌絲含量少，則往往用此方法不成功稀釋分離法材料：主要用于分離細(xì)菌和酵母菌，或有些產(chǎn)生大量弛子的病原真菌優(yōu)點(diǎn)：生活力強(qiáng)，容易取得缺點(diǎn)：個(gè)體小，數(shù)量大，計(jì)數(shù)不方便，容易產(chǎn)生變異當(dāng)你在田間發(fā)現(xiàn)--種你不熟悉的病害時(shí)，將根據(jù)田間觀察到的那些情況初步判斷它可能

是生理性病害、真菌性病害、細(xì)菌性病害或者是病毒病？看癥狀類(lèi)型：通常我們把生病植物變化分為五大類(lèi)型，即腐爛、壞死、變色、萎篇、畸形。

由于真菌的種類(lèi)很多，不同真菌能夠造成以上五類(lèi)病害，其中最常見(jiàn)的是壞死和腐爛，如玉

米大小斑病、小麥葉枯病等各種形狀的葉斑病，壞死發(fā)生在根部或莖稈上就形成枯萎病、根

腐病，真菌造成的腐爛有的較干有的濕潤(rùn)且沒(méi)有臭味，有衣服發(fā)霉或發(fā)酵的香味，常常長(zhǎng)出

各種顏色的霉層或小黑點(diǎn)、小黑粒；細(xì)菌通常破壞細(xì)胞壁，讓細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)外滲或阻塞水和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在植物體內(nèi)運(yùn)輸，所以主要

造成腐爛、萎蒿癥狀，腐爛后往往出水很多，爛成一灘泥旦發(fā)出臭味，病斑很像水浸或油浸

狀，邊緣有點(diǎn)透明濕潤(rùn)條件下，能夠在發(fā)病部位看到亮黃色小珠子的菌膿，細(xì)菌病害的分布

常與流水、淹水、雨滴飛濺有關(guān)；而病毒病害常和傳毒昆蟲(chóng)的活動(dòng)有關(guān)，觀察病害田間分布情況，也可間接推測(cè)植物病毒對(duì)寄

主的危害，病毒侵入植物一般不會(huì)立刻殺死植物，主要改變生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程，引起植株顏色或

形狀的改變，我們叫它變色或畸形；生理病害由于管理不當(dāng)和不良環(huán)境影響而使植物生長(zhǎng)不正常，表現(xiàn)出來(lái)的癥狀稱(chēng)為生理病害,

是非生物病害，不具有侵染性，生理病害共同特征是病株表面或內(nèi)部沒(méi)有任何病征。這類(lèi)病

害明顯特點(diǎn)是一般在田間大面積同時(shí)發(fā)生，同一時(shí)間、植株相同部位和器官出現(xiàn)基本相同癥

狀，常見(jiàn)有低溫障礙、缺素癥、激素中毒、肥害及藥害所造成的生理性障礙。在田間應(yīng)如何區(qū)分植物病毒病與其他侵染性病害？怎樣判斷植物病毒病和非侵染性病

害？侵染：（1）病毒病害在植物表面絕對(duì)沒(méi)有病征，而區(qū)別于線(xiàn)蟲(chóng)蟲(chóng)體、細(xì)菌菌膿、真菌的子實(shí)

體等病征的出現(xiàn)（2）系統(tǒng)侵染病毒病的癥狀在新展幼葉上更重，而其他病害則大多在老葉

上癥狀更明顯。非侵染：（1）病毒病有發(fā)病中心或中心病株，病情有輕有重，早期病株點(diǎn)片分布，而非侵染

性病害大多同時(shí)大面積發(fā)生，病情較一致；（2）發(fā)生病毒病的植株多為系統(tǒng)感染，癥狀分布

不均一，新葉新梢上癥狀最明顯，而生理性病害大多比較均一，老葉、老枝更為明顯（3）

病毒病有傳染性，非傳染性病害沒(méi)有傳染擴(kuò)散的過(guò)程；（4）病毒病害癥狀往往表現(xiàn)為花葉、

黃化、矮縮、叢生等，少數(shù)有脈帶、環(huán)斑、耳突、斑駁等特征性癥狀。此外，隨著氣溫的變

化，特別是在高溫條件下，植物病毒病時(shí)常發(fā)生隱癥現(xiàn)象；（5）生理性病害不具全株性、再

現(xiàn)性，環(huán)境改善?？梢钥祻?fù)；病毒病害分枝發(fā)病，全株相同，新芽、新葉再現(xiàn)病癥，環(huán)境改

善不可再恢復(fù)。某地稻田發(fā)生大面積黃化，有人說(shuō)病毒引起，有人說(shuō)是生理現(xiàn)象，你應(yīng)根據(jù)哪些原則加

以判斷？（見(jiàn)書(shū)）可以根據(jù)“五性”原則加以判斷a.分散性有一定的涌中心.時(shí)有.有一定的涌中心.時(shí)有.b?系統(tǒng)性牛!?b?系統(tǒng)性牛!?不具全株住、再現(xiàn)性

?外W可以―病鴦病?分枝發(fā)肩.全株相同

?斯芽、iwt再現(xiàn)瓠

?環(huán)唳善不可再恢覆C.傳染性病4痛病4痛從房點(diǎn)發(fā)生有明康的擴(kuò)JK莫盆近程4WR15株分布均勻.劌房時(shí)間一致d.鮮明性卷枝、卷枝、e.特征性rm?。ゲ.特征性rm?。ゲ』ㄈ~、斑駁、耳突、環(huán)垃、條紋等現(xiàn)有黃瓜花葉病毒和煙草花葉病毒兩種病毒同時(shí)侵染的煙草葉片，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)方案，

將這兩種病毒分離，分別獲得單一的黃瓜花葉病毒和煙草花葉病毒。原理:病毒有一定的寄主范圍，寄主范圍廣的病毒可侵染許多分類(lèi)上相近或極不相近的植物。

通過(guò)寄主范圍測(cè)定，可發(fā)現(xiàn)對(duì)待測(cè)病毒有特殊反應(yīng)的寄主。利用這些寄主反應(yīng)可以將待測(cè)病

毒區(qū)分開(kāi)來(lái)。黃瓜花葉病毒侵染心葉煙可得到系統(tǒng)花葉，侵染普通煙可得到系統(tǒng)花葉：煙草

花葉病毒侵染心葉煙可得到局部枯斑，侵染普通煙可得到系統(tǒng)花葉。從復(fù)合侵染煙草花葉病毒、黃瓜花葉病毒的煙草病株上，通過(guò)下列步驟分離獲得單的黃瓜花

葉病毒和煙草花葉病毒毒源。①取復(fù)合感染煙草花葉病毒和黃瓜花葉病毒的煙草葉片少許，

加人10倍量（m/V）的0.01mol/L、pH7.0的磷酸緩沖液，在研缽內(nèi)研碎，病汁液供接種用。②采用常規(guī)摩擦接種法，接種兩株心葉煙，每株接2~4片葉，接種葉用手掌托住，用無(wú)菌棉

簽蘸取病毒汁液，在接種葉面單向輕輕涂抹2-3次，置于有防蟲(chóng)網(wǎng)的溫室內(nèi)培養(yǎng)觀察。③取

1片表現(xiàn)枯斑癥狀的心葉煙（3~5d后），用剪刀將單-枯斑取下，置毛玻璃片上，滴1~2滴緩

沖液，用玻棒研磨勻漿，供接種用。分離4~5個(gè)單斑，用同樣的方法獲得勻漿供接種用。④

取1片表現(xiàn)系統(tǒng)癥狀的心葉煙上部葉片，在研缽內(nèi)研磨，供接種用。⑤將上述③、④步所得

的毒源分別接種心葉煙，其中枯斑分離的每-單斑接種1株。⑥待心葉煙出現(xiàn)枯斑癥狀或系

統(tǒng)癥狀后，重復(fù)接種3~5次。⑦最后將心葉煙上的枯斑（煙草花葉病毒）和系統(tǒng)花葉葉片（黃瓜

花葉病毒）分別接種它們的系統(tǒng)寄主普通煙，則分別得到煙草花葉病毒和黃瓜花葉病毒的純

毒株，可以用于下一步的保存和擴(kuò)大繁殖。有些真菌和細(xì)菌病害的人工接種發(fā)病，需要在寄主上創(chuàng)造傷口才容易接種成功；為什么

病毒病的汁液摩擦接種，一般要強(qiáng)調(diào)創(chuàng)造微傷口才有利于接種成功？病毒侵入植物時(shí)，必須從植物表面輕微的傷口侵入.這種傷口既能造成細(xì)胞壁的破壞，為病毒

的侵入打開(kāi)門(mén)戶(hù)，又不導(dǎo)致細(xì)胞死亡，這樣病毒侵入時(shí)才能在細(xì)胞中繁殖。接種環(huán)采用酒精燈火焰滅菌的方法，按照無(wú)菌操作的方法，用接種環(huán)從純培養(yǎng)的試管中

轉(zhuǎn)接了9支斜面試管，結(jié)果其中3支不長(zhǎng)任何菌，3支污染了雜菌，3支長(zhǎng)純菌，試分析造

成這些差異的原因。不長(zhǎng)菌的可能接種環(huán)滅菌后未等其冷卻就挑取菌種導(dǎo)致菌種死亡.污染雜菌的可能是接種環(huán)

滅菌不徹底，如伸入試管中的部分未燒灼等.長(zhǎng)純菌的就是所有操作都規(guī)范.枯斑寄主、指示寄主、鑒別寄主的主要區(qū)別是什么？枯斑寄主:有些病毒侵染寄主植物后，會(huì)誘導(dǎo)寄主產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)，出現(xiàn)局部枯斑而不擴(kuò)展成

系統(tǒng)侵染。指示寄主:指的是對(duì)那些潛育期特長(zhǎng)，癥狀出現(xiàn)很慢的病毒（如果樹(shù)中的病毒），為了及時(shí)做出

診斷，將其轉(zhuǎn)移（接種）到癥狀出現(xiàn)很快的寄主上，這種寄主就成指示植物，故其性質(zhì)與鑒別

寄主不同，主要是用來(lái)檢測(cè)病原生物的存在。鑒別寄主:指用來(lái)鑒定對(duì)某一病毒或株系具有特定反應(yīng)的植物。凡是病毒侵染后能產(chǎn)生快而

穩(wěn)定、并具有特征性癥狀等的植物都可以作為鑒別寄主。鑒別寄主包括單一鑒別寄主和鑒別

寄主譜。高溫高壓蒸汽滅菌培養(yǎng)基到達(dá)時(shí)間后，排放蒸汽時(shí)需要緩慢排放，為什么？緩慢放出蒸汽，應(yīng)注意不要使壓力降低太快，以致引起激烈的減壓沸騰，使容器中的液體四

溢。（滅菌完畢，應(yīng)緩慢減壓，若減壓過(guò)猛，瓶（袋）內(nèi)外壓力差增大，會(huì)使棉塞沖出瓶口，

塑料袋脹袋液體培養(yǎng)基會(huì)突然沸騰從容器內(nèi)噴出或噴濕棉塞，導(dǎo)致雜菌污染。）培養(yǎng)基經(jīng)過(guò)過(guò)濾滅菌后，怎樣檢測(cè)已經(jīng)符合滅菌要求？一般滅完菌后將培養(yǎng)基放在30-37度的環(huán)境中培養(yǎng)一天，看其有沒(méi)有長(zhǎng)菌（液體看是否變渾

濁，固體看是否長(zhǎng)菌落），即可知是否滅菌后為無(wú)菌。對(duì)于一個(gè)可能的細(xì)菌性病害，你如何去判斷并進(jìn)而確診它？（1） 首先根據(jù)癥狀來(lái)看，細(xì)菌性病害癥狀包括壞死，萎篇，腐爛和畸形，濕度較高時(shí)多數(shù)

細(xì)菌病害有菌膿溢出，或切取一塊病組織，觀察有無(wú)噴菌現(xiàn)象。此外細(xì)菌性病害引起的腐爛

氣味比較臭。（2） 分離培養(yǎng)：從病組織上可以分離得到這種微生物并獲得純培養(yǎng)（3） 接種證?。河梅蛛x所得的純菌種接在健康的寄主植物上，能引致相同的病害（4） 采用血清學(xué)：細(xì)菌血清學(xué)鑒定是指利用免疫學(xué)試驗(yàn)的方法和原理，用LA知菌抗體檢測(cè)

未知菌抗原，或用已知菌抗原檢測(cè)未知菌抗體的方法。采用組織塊法分離病原真菌，往往在消毒并洗滌干凈后的病組織塊上滴入少許3%乳酸,

這有什么作用？一般細(xì)菌生長(zhǎng)的最適PH是6.5-7.5,真菌生長(zhǎng)的最適PH是5.0-6.0,加入少量乳酸，適當(dāng)降

低PH,從而抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)，減少細(xì)菌污染。在病害接種試驗(yàn)中，設(shè)置空白對(duì)照有什么作用？確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的差異由實(shí)驗(yàn)因素引起，排除無(wú)關(guān)變量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力菌種保存常用哪幾種保存方法？真菌（63.64頁(yè)）：1.室溫保存2.低溫保存3.石蠟油保存4.滅菌蒸館水保存5.土壤中保存6.

干燥保存細(xì)菌（91頁(yè)）：1.植物材料保存2.斜面保存3.滅菌蒸餡水中保存4.加甘油保存5.凍干保存6.

干燥保存你知道有哪些真菌性植物病原物不同進(jìn)行人工培養(yǎng)？舉例說(shuō)明真菌類(lèi)在合成培養(yǎng)基上無(wú)法培養(yǎng)時(shí)，大體上可把這種真菌視為專(zhuān)性寄生菌。白粉菌：大豆白粉菌（近豆白粉?。P菌：?jiǎn)伪тP菌（為害皿豆）、根腫菌：蕓苔根腫菌侵

染十字花科植物、白銹菌：十字花科白銹菌（十字花科植物）你知道的國(guó)內(nèi)和國(guó)外有關(guān)植物病理學(xué)方面的期刊有哪些？我國(guó)有關(guān)植物病理學(xué)方面的期刊有哪些？植物病理學(xué)報(bào)，植物保護(hù)學(xué)報(bào)，微生物學(xué)報(bào)，真菌學(xué)報(bào)，病毒學(xué)報(bào)，線(xiàn)蟲(chóng)學(xué)報(bào)，植物生理學(xué)

報(bào)，真菌學(xué)報(bào)，農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)、農(nóng)藥、中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)。國(guó)外有關(guān)植物病理學(xué)方面的期刊有哪些？（1） 美國(guó)：植物病理學(xué)Phytopathology：植物病害PlantDisease；分子植物病理學(xué)Molecular

Plant-MicrobeInteractiono（2） 英國(guó)：應(yīng)用生物學(xué)記錄AnnalsofAppliedBiology：生理植物病理學(xué)PhysiologicalPlant

pathology；植物病理學(xué)Plantpathology（3） 法國(guó)：植物病理學(xué)記錄AnnalsdePhytopathologie（4） 日本:日本植物病理學(xué)會(huì)記錄AnnalsofthePhytopathologicalSocietyofJapan（5） 印度： 印度植物病理學(xué)IndianPhytopathology（6） 加拿大:植物病理學(xué)雜志CanadianJournalofPlantpathology

問(wèn)：哪些因素會(huì)影響番茄植株發(fā)??？答：植株品種、高溫高濕的環(huán)境、土壤肥力和酸度及種植、輪作方式。問(wèn)1:使用未經(jīng)加熱處理的病毒汁液分別接種普通煙和心葉煙，各自的作用是什么？答：普通煙：對(duì)比判斷植株在病毒侵染下的受害程度。心葉煙：判斷該病狀產(chǎn)生與哪種病毒有關(guān)。問(wèn)2：為何要用緩沖液作為空白對(duì)照接種健康植株？答：與A、B處理作對(duì)比，判斷病狀產(chǎn)生是否為除病毒外的其他因素導(dǎo)致的，控制變量。1、 怎樣檢驗(yàn)超凈工作臺(tái)的效果己達(dá)到潔凈無(wú)菌狀態(tài)？答：將平板放入工作臺(tái)并打開(kāi)平板蓋，暴露一段時(shí)間或用專(zhuān)門(mén)的采樣器采樣后再用培養(yǎng)基進(jìn)

行培養(yǎng)，觀察是否有菌落生長(zhǎng)。2、 鋪制培養(yǎng)基平板時(shí)需要注意哪些實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)，以保證無(wú)菌操作。答：倒培養(yǎng)基前不能過(guò)早打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋，防止雜菌進(jìn)入：倒培養(yǎng)基前需對(duì)三角瓶瓶口進(jìn)行灼

燒。向：對(duì)某種病原菌進(jìn)行分離培養(yǎng)時(shí)，可能出現(xiàn)雜菌污染或培養(yǎng)基上不長(zhǎng)菌的情況，試分析其

原因。答：1.雜菌污染：滅菌不徹底：制備培養(yǎng)基時(shí)培養(yǎng)基己被污染。2.不長(zhǎng)菌：實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中操作不當(dāng)導(dǎo)致菌種被殺死，如接種環(huán)未完全冷卻就使用；該培養(yǎng)

基成分或PH不適宜該菌落生長(zhǎng)；培養(yǎng)基表面未接種上菌。問(wèn)：簡(jiǎn)述免疫膠體金快速檢測(cè)方法的原理答：樣品中的煙草花葉病毒在吸水材料的牽引下，在試條上向上走，先與膠體金標(biāo)記的特異

性抗體結(jié)合，再與NC膜檢測(cè)線(xiàn)的特異性抗體結(jié)合，在檢測(cè)線(xiàn)處形成抗體-待測(cè)抗原-金標(biāo)抗

體復(fù)合物，在對(duì)照線(xiàn)處形成抗金標(biāo)抗體-金標(biāo)抗體復(fù)合物。測(cè)試條上面的質(zhì)控線(xiàn)不管有無(wú)病

毒都顯紅色，而當(dāng)樣品中的病毒含量超過(guò)試劑條上的檢測(cè)下線(xiàn)時(shí)，則檢測(cè)線(xiàn)呈紅色，結(jié)果為

陽(yáng)性，待測(cè)樣品中含有目標(biāo)病毒；反之，檢測(cè)線(xiàn)不呈紅色，結(jié)果為陰性，待測(cè)樣品中無(wú)目標(biāo)

病毒。問(wèn)：為什么分離病原細(xì)菌不采用如同真菌那樣的組織塊直接分離？答：因?yàn)樵诓〗M織中病原細(xì)菌數(shù)量巨大，直接分離組織塊不能使病原細(xì)菌與雜菌分開(kāi)，雜菌

生長(zhǎng)迅速會(huì)移植病原細(xì)菌的生長(zhǎng)，對(duì)菌落進(jìn)行分離培養(yǎng)較為困難，不易于觀察。問(wèn)：怎樣知道保存的菌種