高級(jí)組織學(xué)生殖輔助技術(shù)(級(jí)碩士研究生)read1

生殖輔助技術(shù)人體解剖學(xué)與組織胚胎學(xué)系生育是人類的根本生理功能，是人類的一種天性。一、男性生育才干明顯下降

國家方案生育委員會(huì)科學(xué)技術(shù)研討所張樹成等人在論文中指出，男性精液質(zhì)量隨不同年代呈明顯降低，而中國男性精液質(zhì)量也呈明顯下降趨勢(shì)。張樹成等人得出了觸目驚心的結(jié)論：男性精液質(zhì)量明顯下降。其中以精子數(shù)目的降低最為明顯，降低40%以上，精子活動(dòng)率降低8.4%；精子正常形狀降低了7.3%；精液量降低了4.9%。為什么男性的生育力竟下降得這么厲害？張樹成等人以為主要是環(huán)境要素所致，即環(huán)境對(duì)生育力的影響，男性比女性更敏感。生殖輔助技術(shù)：人工授精體外授精與胚胎移植顯微授精技術(shù)配子輸卵管移植供卵供胚胎種植前遺傳學(xué)診斷人工授精定義：由醫(yī)師將精子注入到女性生殖道內(nèi)，包括陰道內(nèi)、宮頸內(nèi)、宮腔內(nèi)、輸卵管內(nèi)甚至卵泡內(nèi)的精子注射。分類：1、按精子來源：夫精人工授精〔AIH〕：artificialinseminationwithhusband’ssperm供精人工授精〔AID〕：2、按精子的注射部位：人工授精的順應(yīng)癥一、男方要素存在妨礙正常性交時(shí)精子進(jìn)入陰道的解剖異常要素：精神、神經(jīng)要素：中度精液異常：二、女方要素：存在妨礙精子在女性生殖道運(yùn)轉(zhuǎn)的要素：陰道與宮頸狹窄等宮頸要素：如宮頸粘液人工授精實(shí)施要素：足夠數(shù)量和活力的正常形狀精子正常的排卵至少有一條輸卵管通暢并且功能正常人工授精的方法：一、女性的預(yù)備自然周期人工授精：將精子在最接近排卵的時(shí)間段注入女性生殖道內(nèi)〔根底體溫丈量、B超檢測(cè)、尿LH測(cè)試和宮頸粘液評(píng)分〕控制性誘導(dǎo)排卵：FSH、hCG和黃體酮其他預(yù)備：陰道清潔度、盆腔檢查和B超、輸卵管通水、輸卵管造影等二、男性精子的預(yù)備新穎精液：凍存精子的預(yù)備：精子的洗滌方法：早期的不清洗后穹隆注射法宮頸周圍或?qū)m頸管內(nèi)人工授精：0.5-1ml宮頸管，其他在陰道前穹隆加用宮帽人工授精宮腔內(nèi)人工授精：常用、勝利率較高供精人工授精AID的順應(yīng)癥不可逆的無精子癥，嚴(yán)重的少精癥、弱精癥和畸精癥；男方因輸精管結(jié)扎后復(fù)通失??；射精妨礙男方和〔或〕家族有不宜生育的嚴(yán)重遺傳性疾病。對(duì)1-4,要解釋贊同后，行AID；〔一〕女方條件年齡在生育期身體安康，完全能接受妊娠卵巢功能正常和盆腔檢查正常輸卵管通暢〔二〕供精者條件年齡、身高、五官等無全身急慢性病內(nèi)外生殖器正常無性傳播性疾病無各型肝炎本人和直系血親無遺傳病ABO及RH血型檢查精液檢查〔三〕供精者的挑選程序1、最初評(píng)價(jià)：

供精者的年齡必需是在22－45歲之間，能真實(shí)提供本人及家族成員的普通病史和遺傳病史，回答醫(yī)師提出的其它相關(guān)問題，按要求提供精液標(biāo)本以供檢查。精子庫人員將與供精者面談。供精者不應(yīng)屬于AIDS的高危人群，沒有性傳播性疾病史，沒有全身性疾病和嚴(yán)重器質(zhì)性疾病，無長期接觸放射線和有毒物質(zhì)，無吸毒、酗酒、同性戀等行為。2、精液分析：

每次精液標(biāo)本都必需用世界衛(wèi)生組織規(guī)范方法進(jìn)展分析，包括精子密度、活動(dòng)率、形狀學(xué)等目的，這些標(biāo)本在冷凍前后均要進(jìn)展分析比較，解凍后的精子活動(dòng)率要到達(dá)40%以上。3、感染性疾病檢測(cè)：

一切的供精者都要進(jìn)展血清HIV抗體、乙肝兩對(duì)半、丙肝抗體、梅毒、巨細(xì)胞病毒抗體等檢測(cè)。對(duì)精液進(jìn)展淋病、支原體、衣原體檢查和細(xì)菌培育。4、醫(yī)學(xué)和遺傳評(píng)價(jià)：

每個(gè)供精者都將進(jìn)展一次體檢，進(jìn)展血型以及RH檢測(cè)，還要進(jìn)展血細(xì)胞染色體檢查。他們的醫(yī)療和遺傳史將被遺傳醫(yī)生進(jìn)展評(píng)價(jià)，廣東省方案生育專科醫(yī)院人類精子庫還根據(jù)廣東省遺傳病的發(fā)病特點(diǎn)，添加對(duì)供精者進(jìn)展地中海貧血和葡萄糖－6－磷酸脫氫酶缺乏癥的篩查。必要時(shí)還進(jìn)展供精者的心思學(xué)評(píng)價(jià)。5、精液凍融復(fù)蘇檢查：

成為供精者后，每次精液標(biāo)本在冷凍前后均要進(jìn)展評(píng)價(jià)，一切沒有到達(dá)供精最低規(guī)范的標(biāo)本都將被棄去。一切的標(biāo)本都要存放足夠的時(shí)間〔180天的檢疫期〕，供精者要反復(fù)作感染性疾病的檢測(cè)?！菜摹硨?shí)驗(yàn)室檢查1、染色體檢查：供精者必需染色體常規(guī)核型分析正常。2、傳染性疾病的檢查

①供精者乙肝抗原抗體及丙肝抗體檢查正常。

②供精者梅毒、淋病、艾滋病檢查陰性。

③供精者衣原體、支原體、巨細(xì)胞病毒檢查陰性。3、精液常規(guī)分析及供精的質(zhì)量要求

對(duì)供精者精液要做常規(guī)檢查。取精前要禁欲一周。精液質(zhì)量要求高于世界衛(wèi)生組織的規(guī)范：精液液化時(shí)間10-60分鐘，容積為2-6毫升，密度大于60x106/毫升，成活率大于60%，畸形率不大于30%。

精液進(jìn)展常規(guī)細(xì)菌培育，以排除致病菌感染。4、ABO血型及Rh血型〔五〕供精者知情贊同書1、提供精液的目的是為了治療不育癥，好像獻(xiàn)血一樣，是一種人道主義行為；2、提供精液應(yīng)完全出于自愿，是無償?shù)?，只能獲得誤工、誤餐及交通補(bǔ)貼等，不能以經(jīng)濟(jì)利益而為之；3、精液只能提供應(yīng)國家衛(wèi)生部同意的人類精子庫，而不能提供應(yīng)其他單位或個(gè)人；4、在提供精液前要經(jīng)過嚴(yán)厲的安康檢查，供精者要照實(shí)提供病史配合體格檢查，提供血液、精液等標(biāo)本進(jìn)展檢測(cè)。安康檢查不合格的不能作為供精者，安康檢查體格者與人類精子庫簽署<供精協(xié)議書>后，才干作為供精者；5、供精者的一切資料都由人類精子庫專人嚴(yán)密保管，不會(huì)向受精者泄露，更不會(huì)向其他人泄露；6、供精者至少提供30份精液標(biāo)本；7、供精者的精液，假設(shè)已有5位受精者受孕，該供精者的精液標(biāo)本全部廢除，今后亦不再作為供精者；8、供精者不能詰問受精者及出生后代的任何情況，對(duì)出生后代沒有任何權(quán)益，也不承當(dāng)任何義務(wù)。〔六〕捐精流程1.首先進(jìn)展捐精咨詢。2.引導(dǎo)排精，作精液檢查。3.合格后抽血化驗(yàn)，約7～10天出報(bào)告。

4.精液與化驗(yàn)正常者開場(chǎng)捐精，捐精前簽署知情贊同書。5.每3－5天前來捐精一次，每次均給予相應(yīng)的交通、營養(yǎng)等補(bǔ)貼。6.六個(gè)月后再次復(fù)查，給予交通、營養(yǎng)等補(bǔ)貼?！财摺矨ID方法女方預(yù)備：檢查正常有關(guān)文件的簽署精液預(yù)備授精方法：1ml〔陰道部宮頸處或?qū)m頸管內(nèi)〕隨訪體外授精和胚胎移植

〔invitrofertilizationandembryotransfer〕原理：將女方卵巢內(nèi)的成熟卵母細(xì)胞取出，在體外與來自配偶的精子共同培育，發(fā)生授精過程。受精卵發(fā)育到胚胎階段后，再將其種植到子宮腔中繼續(xù)發(fā)育生長成胎兒?！惨弧稠槕?yīng)癥女方各種要素導(dǎo)致的配子運(yùn)輸妨礙子宮內(nèi)膜異位癥男方要素：少、弱、畸精癥等緣由不明性不孕癥頑固性多囊卵巢綜合征1、控制性超排卵在實(shí)施IVF-ET手術(shù)中，利用促排卵藥物來加強(qiáng)與改善現(xiàn)存卵巢功能，企圖到達(dá)不受自然周期所限制，獲取多個(gè)安康卵子提供受精后胚胎移植并盡能夠使黃體與內(nèi)膜功能同時(shí)能對(duì)妊娠發(fā)生與妊娠維持想順應(yīng)?！捕掣静襟E2、取卵在陰道B超引導(dǎo)下用穿刺針抽取卵泡。3、找卵在顯微鏡下將抽取的卵泡液置于器皿中迅速尋覓卵冠丘復(fù)合體〔OCCCS〕。4、受精〔精液處置同人工授精〕卵冠丘復(fù)合體經(jīng)孵育4~6h后參與適當(dāng)數(shù)量的獲能精子進(jìn)展授精。5、察看16h后剝除顆粒細(xì)胞，鏡下察看見兩原核者為受精。繼續(xù)培育36~42小時(shí)察看胚胎分裂到4~8細(xì)胞可思索行胚胎移植。需求者也可培育到第5~6天，做囊胚移植。5、種植將胚胎吸入移植管中，經(jīng)宮頸管將胚胎送入宮腔臥床1~3h。6、黃體支持移植后注射黃體酮，14天后行血β-hCG測(cè)定確定能否妊娠。IVF胚胎的宮內(nèi)移植移植時(shí)間：體外受精后的42-45h?，F(xiàn)多在體外受精后3天，有時(shí)培育到5天至囊胚。移植方法：檢查能否移植進(jìn)去。代孕母親〔衛(wèi)生部暫禁〕先天性子宮缺如；因病行子宮切除術(shù)；女方有妊娠或分娩忌諱癥；胚胎冷凍1983年人類第一次冷凍胚胎勝利順應(yīng)癥IVF或ICSI治療中的多余胚胎；胚胎移植發(fā)生困難；胚胎種植前診斷等待結(jié)果；人工贈(zèng)卵等待受者子宮內(nèi)膜同步；建立胚胎庫；顯微操作技術(shù)顯微受精技術(shù)：透明帶部分切割、透明帶下受精法及單精子卵胞漿顯微注射極體與卵裂球活檢卵漿置換、細(xì)胞核移植輔助孵出嵌合體技術(shù)機(jī)械法PZD顯微操作輔助受精I(xiàn)CSI受精的生物學(xué)特點(diǎn)：正常受精：產(chǎn)生頂體反響的精子與卵膜的交融，卵子激活以及女性、男性原核構(gòu)成。ICSI：注射時(shí)精子的頂體形狀不明，而卵與精子質(zhì)膜的交融也不存在。單精子卵漿內(nèi)注射順應(yīng)癥嚴(yán)重少精癥弱畸精癥少弱畸精癥無精癥〔阻塞性及非阻塞性〕以往IVF時(shí)卵母細(xì)胞均不受精或受精率低下其他：ICSI的忌諱癥染色體異常嚴(yán)重先天畸形ICSI的技術(shù)操作精子來源及處置手淫法取精。附睪取精:適用于阻塞性無精癥。近期有人用經(jīng)皮精子抽吸法。PESA法附睪取精MESA及附睪精子睪丸取精：主要適用于非阻塞性無精癥，切取一小塊睪丸組織的方法獲取精子或精子細(xì)胞〔開放式活檢〕。也可用細(xì)針組織抽吸睪丸活檢法?；顧z槍及抽吸法睪丸取精卵子的來源與處置卵子普通在促超排卵后,經(jīng)陰道B超介導(dǎo),用16G或17G穿刺針經(jīng)陰道獲取。取卵后4小時(shí)，進(jìn)展去卵丘構(gòu)造處置。設(shè)備；顯微操作皿的預(yù)備；顯微注射；精子制動(dòng)與獲?。还潭炎优c注射；顯微注射設(shè)備ICSI表示圖ICSI操作過程ICSI過程(A)ICSI過程(B)注射15-18小時(shí)后，檢查能否受精〔ICSI后精卵結(jié)合過程普通較正常為快，6小時(shí)內(nèi)33%可出現(xiàn)原核，8-20小時(shí)89%-91%出現(xiàn)原核〕。受精卵繼續(xù)培育24小時(shí)，察看有無卵裂,然后經(jīng)陰道移植3-4個(gè)質(zhì)量優(yōu)良的胚胎。剩余胚胎冷凍保管。ICSI妊娠的后代隨訪對(duì)ICSI平安性的憂慮：ICSI操作對(duì)卵子是具創(chuàng)傷性的；ICSI在全面的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)之前就廣泛運(yùn)用于人類；選用的精子原是屬于被自然淘汰的；睪丸采集的精子能夠未發(fā)育成熟，基因印跡尚未發(fā)育完成；少弱及無精子的缺陷能否會(huì)殃及后代。輔助“破殼〞輔助孵出(AH)8細(xì)胞期AH晚期囊胚AH種植前遺傳學(xué)診斷1.PGD的指征:不孕夫婦中女方年齡較大(如>35歲,也有人以為年齡更大者)；不孕夫婦患X-伴性遺傳病或?yàn)閄-伴性遺傳病的攜帶者，有X-伴性遺傳病家族史;胚胎質(zhì)量差，反復(fù)IVF失敗；胚胎分裂過快；嚴(yán)重男性要素不育；夫婦中任何一方或雙方有染色體核型異常(數(shù)目及構(gòu)造異常)；習(xí)慣性流產(chǎn)患者；不孕夫婦中一方或雙方患有已明確為基因突變所致疾病(單基因遺傳病)，或?yàn)閿y帶者，或有家族史者，如染色體顯性遺傳病；染色體微缺失綜合征；與精子發(fā)生相關(guān)的染色體微缺失。2.PGD的方法取材:內(nèi)徑為5~40m的活檢針。極體、2-10細(xì)胞(或更多)胚胎的卵裂球細(xì)胞、胚囊的壁滋養(yǎng)外胚層細(xì)胞。取卵裂球過程卵裂球活檢聚合酶鏈反響(PCR)：單細(xì)胞PCR、巢式PCR、半巢式PCR，結(jié)合(linkage)PCR，熒光PCR等。PCR的擴(kuò)增勝利率在90%以上，個(gè)別71%，極體66.1%左右。PCR的優(yōu)點(diǎn)：需求樣本量少，快速。熒光原位雜交(Fluorescenceinsituhybridization，F(xiàn)ISH)固定，特異探針(已標(biāo)上熒光素)去雜交標(biāo)志物，熒光顯微鏡下察看有無發(fā)出不同顏色熒光的亮點(diǎn)及數(shù)目以了解該極體/細(xì)胞能否正常。人類22種常染色體及X，Y染色體的探針均已商品化針對(duì)許多致病基因，基因突變位點(diǎn)的探針也已商品化。自行制備針對(duì)某一患者的特異探針。一次最多可雜交5-7種探針(不同顏色)。反復(fù)FISH的方法，常檢測(cè)X,Y,1,5,7,8,11,13,16,18,21,22號(hào)等較常發(fā)生異常的染色體。4.PGD開展評(píng)價(jià)及展望PGD產(chǎn)生之前的遺傳性疾病的診斷、問題；PGD優(yōu)勢(shì)：可以防止終止妊娠的苦楚和品德上的問題。提高了在高危夫婦中挑選出正常胚胎的效率。累積妊娠率優(yōu)于自然周期。目前結(jié)果：不影響種植前胚胎的發(fā)育；提高種植率，降低