總糖和還原糖的測定改2

實驗一:總糖和還原糖的測定

——3,5二硝基水楊酸(DNS)法1目的

掌握還原糖和總糖的測定原理

掌握分光光度計的使用2原理還原糖：指含有自由醛基或酮基的糖類單糖:不能被水解成更小分子的糖,單糖都是還原糖

Glc,Fru

寡糖:最重要的是雙糖：Maltose,Sucrose,Lactose

但Sucrose不是還原糖多糖:能水解成多個單糖分子,如淀粉,糖原和纖維素

3酸水解法使沒有還原性的雙糖與多糖,徹底水解成具有還原性的單糖,再進行測定,這樣就可以求樣品中總糖的含量。4測定方法－比色法黃色棕紅色5

首先要制作葡萄糖標準曲線，以標準葡萄糖為樣品進行測定，以葡萄糖含量（㎎）為橫坐標，OD540讀數(shù)為縱坐標，繪制標準曲線。然后待測樣品的OD540平均值在標準曲線上查出相應的糖含量6朗伯－比爾（Lambert-Beer）定律

朗伯－比爾定律是比色分析的基本原理，這個定律是有色溶液對單色光的吸收程度與溶液及液層厚度間的定量關系。此定律是由朗伯定律和比爾定律歸納而得。

A或D=㏒I0/I

A或D＝光吸收或光密度I0＝入射光強度I＝透射光強度7試劑和器材試劑：3,5－二硝基水楊酸（DNS）試劑；葡萄糖標準溶液；6MHCl；碘－碘化鉀溶液；6MNaOH；0.1%酚酞指示劑。

器材

容量瓶,試管,移液管，量筒，50℃水浴,沸水浴，漏斗，膠頭滴管,分光光度計等。

材料

藕粉，玉米淀粉。8操作步驟：

1.葡萄糖標準曲線制作2.樣品中還原糖的提?。?/p>

藕粉測還原糖,50℃水浴20min浸出；水浴鍋中進行3.樣品總糖的水解及提取

玉米淀粉測總糖,沸水浴30min酸水解；電磁爐中進行4.樣品中含糖量的測定9注意事項1.實驗安全:強酸,強堿2.藕粉改為稱1.0克3.總糖的水解及提取兩次定容,中和至微紅色4.先把樣品用封口膜混勻后測定OD540值,5.標準曲線制作與樣品含糖量測定應同時進行，一起顯色和比色10移液槍的使用方法移液器量程的調節(jié)1112移液器的使用手法，兩檔位吸液放液13去槍頭的方法14分光光度計的使用

1.機器電源打開，用波長設置鍵，設置所需的分析波長，預熱20分鐘；2.比色皿有光面和毛面，手接觸毛面；3.待測液倒至比色皿3/4高度，切忌太滿！4.空白對照放在比色皿槽的第一槽位；測定時濃度由低到高；5.將空白對照推（拉)入光路中，按<100%T>鍵，此時顯示器顯示的“BLA—”直至顯示“100.0”為止。6.將被測樣品推（拉）入光路，這時便可從顯示器上得到被測樣品的透射比或吸光度值。樣品讀數(shù)三遍，取平均值。7.使用分光光度計時帶測定樣品、洗瓶、廢液杯、筆和本。15

實驗用水是教室后面的純凈水

值日生:每間教室1、2組16比色時為什么要設計空白管？比較費林試劑比色法與3,5-二硝基水楊酸比色法測定可溶性淀粉中還原糖和總糖的結果，這兩種方法各有何優(yōu)點？思考題17通知下一次實驗“維生素C的定量測定”，本次