臨床輸血與檢驗(yàn)課件

臨床輸血與檢驗(yàn)第一章緒論一、輸血學(xué)定義二、輸血發(fā)展史三、現(xiàn)代輸血的主要領(lǐng)域四、輸血發(fā)展的趨勢(shì)和面臨的挑戰(zhàn)目標(biāo)

要點(diǎn)熟悉現(xiàn)代輸血涉及的主要領(lǐng)域掌握輸血的概念了解輸血發(fā)展史、發(fā)展趨勢(shì)以及所面臨的挑戰(zhàn)

輸血作為一種特殊的臨床治療手段已有近百年的歷史，近年來(lái)，隨著臨床醫(yī)學(xué)、病毒學(xué)、免疫遺傳學(xué)、分子生物學(xué)和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)管理學(xué)等學(xué)科的發(fā)展與交叉，輸血已經(jīng)不僅僅是一種臨床治療的輔助手段，而是發(fā)展為一門獨(dú)立的學(xué)科——輸血學(xué)。

一、輸血學(xué)定義輸血：將全血或血液制品進(jìn)行臨床輸注的過程。*1492年人血--口服羅馬教皇血液治療*1900年，ABO血型的發(fā)現(xiàn)--臨床輸血開始。奧地利維也納病理研究所病理學(xué)家Landsteiner首先發(fā)現(xiàn)ABO血型，于1930年獲得諾貝爾獎(jiǎng)。

二、輸血發(fā)展史*1914年，枸櫞酸鈉發(fā)現(xiàn)--解決血液凝固問題。*1937年，世界第一個(gè)血庫(kù)成立--美國(guó)芝加哥。*1943年，ACD的發(fā)現(xiàn)--血液的體外保存開始。*1960年代，塑料采血袋的應(yīng)用--成分血的分離開始

中國(guó)輸血發(fā)展史*1925年，開始臨床輸血。*1944年在昆明建立了我國(guó)第一個(gè)血庫(kù)。*1948年華東地區(qū)醫(yī)院血庫(kù)的建立標(biāo)志者新中國(guó)輸血事業(yè)的啟動(dòng)。*1998年10月《中華人民共和國(guó)獻(xiàn)血法》無(wú)償獻(xiàn)血開始，10月《血站管理辦法》1999年《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床用血辦法》2000年《臨床技術(shù)輸血技術(shù)規(guī)范》(一)免疫血液學(xué)*ABO紅細(xì)胞血型系統(tǒng)的發(fā)現(xiàn)啟動(dòng)現(xiàn)代輸血發(fā)展；*白細(xì)胞的HLA(humanleukoeyfeanttgerls)系統(tǒng)、血小板抗原系統(tǒng)、血清蛋白型、紅細(xì)胞酶型的研究和理解也越來(lái)越全面。三、現(xiàn)代輸血的主要領(lǐng)域1．輸血相關(guān)傳染病乙肝、丙肝、艾滋病病毒HⅣ、梅毒、瘧疾等可經(jīng)血傳播的傳染病。(二)輸血安全2．免疫性輸血反應(yīng)

血型配合性輸血是輸血安全的重要課題。白細(xì)胞，特別是淋巴細(xì)胞相關(guān)輸血反應(yīng)包括非溶血性發(fā)熱性輸血反應(yīng)，輸血相關(guān)移植物抗宿主反應(yīng)，血小板輸血無(wú)效等。3．其他輸血反應(yīng)包括因血漿蛋白引起的過敏反應(yīng),大劑量輸血引起的相關(guān)不良反應(yīng)．循環(huán)過載等。1．血液成分的分離和輸注；2．血漿蛋白制品的制備和應(yīng)用；3．新一代血液成分制品。

(三)血液成分輸血*強(qiáng)化輸血的質(zhì)量管理：包括GMP，IS0-9000，全面質(zhì)量管理等，這成為輸血學(xué)的顯著特點(diǎn)之一。*輸血質(zhì)量管理形式不同，目標(biāo)是一致：即保證每單位輸給病人的血液制品都符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的要求，從而保證輸血的療效和安全性。(四)輸血的質(zhì)量管理第五節(jié)臨床生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)標(biāo)本主要內(nèi)容●標(biāo)本的分類●標(biāo)本的采集●標(biāo)本的運(yùn)送與保存●影響標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果的因素15●標(biāo)本的分類血液尿液腦脊液胸腹腔積液16

（一）血標(biāo)本的類型和選擇●血液標(biāo)本的采集血漿血清全血纖維蛋白原含水量葡萄糖尿素17

（二）血標(biāo)本的采集動(dòng)脈采血毛細(xì)血管靜脈采血血?dú)夥治鲎畛Ｓ?8

（三）血標(biāo)本采集的注意事項(xiàng)密閉，及時(shí)送檢靜脈采血血?dú)夥治銎髅蟾稍?、清潔正確操作及時(shí)處理？19（四）血標(biāo)本的處理抗凝抗凝劑分離血清正確保存及時(shí)檢驗(yàn)20二、影響血標(biāo)本成分變化的因素生理因素飲食因素運(yùn)動(dòng)因素情緒因素藥物因素21標(biāo)本(sample)血紅蛋白可干擾膽固醇的酶法測(cè)定，抑制膽紅素的重氮反應(yīng)等；溶血也干擾某些光譜分析。溶血和儲(chǔ)存的影響22紅細(xì)胞內(nèi)外液中某些物質(zhì)的濃度（單位：酶用U/L，其他為mmol／Ｌ）細(xì)胞內(nèi)液細(xì)胞外液內(nèi)／外比值物質(zhì)Ｃa２＋Ｎa＋Ｃl－ＵＡＵreaＣrＴＣＧluＰ３

＋Ｍg２

＋ＨＣＯ３

－Ｋ＋ＡＬＴＡＳＴＡＣＰＬＤＨ０.５１６.０５２.００.１９２.３０.１６３.５９４.１０.８１５.５１９.０１００.０１６０.０９８８.０２００５８０００.０５.０１４０.０１０４.００.３５２.８０.１０５.０２５.０１.０３２.２２６.０４.４２４.０２５.０３.０３６０.００.１００.１１０.５００.５４０.８２１.６０.７２０.８２０.７９２.４０.７３２２.７６.７４０.０６７.０１６０.０23三、其他標(biāo)本的采集與管理腦脊液羊水24第六節(jié)實(shí)驗(yàn)方法的選擇與評(píng)價(jià)一、實(shí)驗(yàn)方法的選擇實(shí)驗(yàn)標(biāo)本方法選擇常規(guī)分析室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果報(bào)告室間質(zhì)控評(píng)價(jià)方法評(píng)價(jià)方法發(fā)展目的和意義25決定性方法參考方法常規(guī)方法實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)方法分級(jí)26概念：是指準(zhǔn)確度最高，系統(tǒng)誤差最小。其結(jié)果為“確定值”，與“真值”最接近用途：評(píng)價(jià)參考方法和一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品決定性方法（definitivemethod）27概念：是指準(zhǔn)確度和精密度已經(jīng)充分證實(shí)的分析方法，干擾因素少，系統(tǒng)誤差小，有適當(dāng)?shù)撵`敏度、特異性、直線性及較寬的分析范圍。用途：用于鑒定常規(guī)方法和二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品。參考方法（referencemethod）28概念：指性能指標(biāo)符合臨床或其他目的的需要，有足夠的靈敏度和準(zhǔn)確度，有適當(dāng)?shù)姆治龇秶?，而且?jīng)濟(jì)實(shí)用用途：常規(guī)檢測(cè)。常規(guī)方法（routinemethod）29應(yīng)用范圍增加準(zhǔn)確度增加實(shí)驗(yàn)方法之間的關(guān)系常規(guī)方法參考方法決定性方法30一級(jí)（原級(jí)參考物）二級(jí)（次級(jí)參考物）三級(jí)（控制物）標(biāo)準(zhǔn)品（參考物）標(biāo)準(zhǔn)品的分級(jí)31

特性：是已經(jīng)確立為穩(wěn)定而均一的物質(zhì)，它的數(shù)值已由決定性方法確定，或由高度準(zhǔn)確的若干方法確定，所含雜質(zhì)也已經(jīng)定量，且有證書

用途：用于校正決定性方法，評(píng)價(jià)及校正參考方法及為“二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品”一級(jí)（原級(jí)參考物）32特性：也叫次級(jí)參考物，是已經(jīng)確立為穩(wěn)定而均一的物質(zhì)，它的數(shù)值已由參考方法確定，或由一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品確定

用途：用于常規(guī)方法的標(biāo)化和質(zhì)控物定值。

二級(jí)（次級(jí)參考物）33特性：控制物有凍干的或溶液，以參考方法用一級(jí)或二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品定值

用途：用于質(zhì)量控制，一般不用于標(biāo)化。三級(jí)（控制物）34實(shí)用性（微量快速）可行性（條件和費(fèi)用）可靠性（準(zhǔn)確特異安全）基本要求方法選擇要求和步驟35廣泛查閱文獻(xiàn)選定候選方法進(jìn)行初步實(shí)驗(yàn)基本步驟36方法學(xué)評(píng)價(jià)是通過實(shí)驗(yàn)途徑，測(cè)定并評(píng)價(jià)方法的精密度與準(zhǔn)確度，強(qiáng)調(diào)的都是誤差，評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)的過程就是對(duì)誤差的測(cè)定。二、實(shí)驗(yàn)方法評(píng)價(jià)目的和意義37準(zhǔn)確度與偏差系數(shù)精密度與變異系數(shù)靈敏度與特異性評(píng)價(jià)指標(biāo)方法評(píng)價(jià)指標(biāo)干擾值與干擾率線性范圍實(shí)驗(yàn)誤差381.準(zhǔn)確度與偏差系數(shù)（CB）

測(cè)定值與真值的符合程度，常用不準(zhǔn)確度表示。

偏差系數(shù)（CB）=(真值-x／真值)×100%血糖（5.5mmol/L）5.4mmol/L5.0mmol/L例：392.精密度與變異系數(shù)（CV）

同一標(biāo)本多次測(cè)定值的差異，常用標(biāo)準(zhǔn)差(S)或變異系數(shù)表示。N1=5.4mmol/LN2=5.6mmol/LN3=5.2mmol/LN4=5.3mmol/LN5=5.5mmol/LN6=5.1mmol/LN7=5.4mmol/L血糖（5.5mmol/L）403.靈敏度：指化學(xué)反應(yīng)中能檢出的最小值。常用最小檢出量或摩爾消光系數(shù)來(lái)表示。血清總蛋白（75g/L）雙縮脲法（0.2-1.7g/L）溴甲酚綠（0.01g/L）紫外法（0.001g/L）免疫熒光法（0.01mg/L）摩爾消光系數(shù)越大,靈敏度越高41

4.特異性：指分析測(cè)定中只與某一成分發(fā)生反應(yīng)的特性強(qiáng)弱。

血清蛋白（７５g/L）特異性與非特異干擾的區(qū)別酶聯(lián)免疫法（酶與底物,抗原與抗體的特異性結(jié)合）雙縮脲法（肽鍵）42

5.線性范圍：指實(shí)驗(yàn)方法所能檢測(cè)標(biāo)本中某物質(zhì)的濃度范圍。A=k·C·L雙縮脲法（0-140g/L

）溴甲酚綠（10-60g/L）血清蛋白（７５g/L）436.實(shí)驗(yàn)誤差（error）：測(cè)定值與真值的差異。誤差系統(tǒng)誤差隨機(jī)誤差恒定系統(tǒng)誤差比例系統(tǒng)誤差偶然誤差過失誤差44重復(fù)性試驗(yàn)回收試驗(yàn)干擾試驗(yàn)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)方法評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)方法比較試驗(yàn)45評(píng)價(jià)試驗(yàn)與分析誤差類型的關(guān)系分析誤差類型評(píng)價(jià)試驗(yàn)初步試驗(yàn)最后試驗(yàn)偶然誤差恒定誤差比例誤差批內(nèi)重復(fù)試驗(yàn)干擾試驗(yàn)回收試驗(yàn)天間重復(fù)試驗(yàn)方法比較試驗(yàn)方法比較試驗(yàn)46目的：考察隨機(jī)誤差，評(píng)價(jià)精密度形式與方法：批內(nèi)重復(fù)實(shí)驗(yàn)；天內(nèi)重復(fù)試驗(yàn)；天間重復(fù)試驗(yàn)分析樣品：采用標(biāo)準(zhǔn)液、控制物溶液、病人標(biāo)本或混合血清均可分析物濃度：在具有決定性意義的濃度重復(fù)次數(shù)：20次以上重復(fù)性試驗(yàn)47目的：分析比例系統(tǒng)誤差方法:基礎(chǔ)管回收管XX+b結(jié)果:回收量=回收管量-基礎(chǔ)管量回收率=（回收濃度/加入濃度）

100%回收試驗(yàn)48回收試驗(yàn)舉例：偶氮法測(cè)定血清鈣的回收試驗(yàn)樣品制備：1號(hào)：基礎(chǔ)樣品血清2.0ml+蒸餾水0.1ml2號(hào)：低濃度回收管血清2.0ml+4mmol/L鈣標(biāo)準(zhǔn)液0.1ml3號(hào)：高濃度回收管血清2.0ml+25mmol/L鈣標(biāo)準(zhǔn)液0.1ml結(jié)果與計(jì)算：

2號(hào)管加入濃度：40.1/（2.0+0.1）=0.19mmol/L3號(hào)管加入濃度：250.1/（2.0+0.1）=1.19mmol/L基礎(chǔ)樣品低濃度高濃度49鈣回收試驗(yàn)結(jié)果(單位mmol/L)樣品管測(cè)定濃度加入濃度回收濃度回收率1號(hào)管2號(hào)管3號(hào)管平均1.701.882.850.191.190.181.1594.75%96.6%95.7%理想回收率為100%。該試驗(yàn)比例誤差為4.3%。50注意事項(xiàng)：①操作要規(guī)范,準(zhǔn)確吸量,儀器性能和試劑要好；②加入標(biāo)準(zhǔn)液后最好使試驗(yàn)樣品的被測(cè)濃度達(dá)到醫(yī)學(xué)決定水平濃度；③加入標(biāo)準(zhǔn)液體積要小，一般在10%以內(nèi)，濃度要高;④重復(fù)次數(shù)要適當(dāng),樣品中加入標(biāo)準(zhǔn)液后計(jì)算平均回收率。51目的:也是衡量候選方法的準(zhǔn)確度，在加入一定濃度的干擾物的條件下，形成的是恒定系統(tǒng)誤差干擾物:被試驗(yàn)的物質(zhì)具有臨床意義,常分析膽紅素、血脂、蛋白、防腐劑、抗凝劑等干擾物濃度:接近正常水平，具有臨床意義干擾試驗(yàn)52方法：似回收試驗(yàn)基礎(chǔ)管干擾管XX+b結(jié)果：計(jì)算干擾值和干擾率：干擾值=干擾管濃度-基礎(chǔ)管濃度干擾率=干擾值/基礎(chǔ)管濃度

100%53注意事項(xiàng)：①準(zhǔn)確吸量；②加入干擾物的濃度應(yīng)達(dá)到病理標(biāo)本最高濃度；③加入干擾物的體積要小，一般在10%以內(nèi)；④醫(yī)學(xué)決定水平濃度。54目的：檢測(cè)系統(tǒng)分析誤差，包括比例系統(tǒng)誤差和恒定系統(tǒng)誤差方法：侯選和比較法同時(shí)進(jìn)行，比較方法的選擇要科學(xué)注意事項(xiàng)：試驗(yàn)樣品數(shù)；重復(fù)分析；有時(shí)間間隔，每次測(cè)定2-5個(gè)樣品，約測(cè)定20天；統(tǒng)計(jì)處理：方法比較試驗(yàn)551、方法學(xué)性能標(biāo)準(zhǔn)及其制定（1）性能指標(biāo)：應(yīng)根據(jù)不同的應(yīng)用目的（篩選、診斷、預(yù)后、監(jiān)測(cè)）而異。由允許分析誤差EA和醫(yī)學(xué)決定水平Xc這兩項(xiàng)內(nèi)容決定。方法性能判斷56允許分析誤差（allowableanalyticalerrorEA

）：指95%樣品的允許誤差限度；醫(yī)學(xué)決定水平（medicaldecisionlevel）：用Xc表示，是臨床判斷結(jié)果具有意義的被分析物濃度。57（2）性能標(biāo)準(zhǔn)：制定的性能標(biāo)準(zhǔn)，既應(yīng)反映臨床應(yīng)用與解釋結(jié)果的要求[稱為醫(yī)學(xué)效用限度（medicalusefulnesslimits）]，又應(yīng)基本符合實(shí)驗(yàn)室所能達(dá)到的技能狀態(tài)（stateofart）。582、性能判定方法：（1）使用單值判斷指標(biāo)判斷單值判斷指標(biāo)較簡(jiǎn)單，在評(píng)價(jià)過程中用于初步估量。（2）使用可信區(qū)間判斷指標(biāo)判斷：按照衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行。59診斷試驗(yàn)是評(píng)價(jià)某種疾病診斷方法的臨床試驗(yàn)診斷試驗(yàn)評(píng)價(jià)的基本方法:

用待評(píng)價(jià)的診斷試驗(yàn)和金標(biāo)準(zhǔn)（goldstandard）檢測(cè)相同的受試對(duì)象，然后進(jìn)行對(duì)比.臨床常用的金標(biāo)準(zhǔn)包括病理學(xué)檢查（組織活檢和尸體解剖）、外科手術(shù)探查以及長(zhǎng)期隨訪臨床觀察所獲得的結(jié)論等。通過金標(biāo)準(zhǔn)的診斷結(jié)果將被檢驗(yàn)對(duì)象分為實(shí)際患某病與未患某病兩組。三、診斷實(shí)驗(yàn)的性能評(píng)價(jià)60診斷試驗(yàn)評(píng)價(jià)的可能結(jié)果三、診斷實(shí)驗(yàn)的性能評(píng)價(jià)61（一）診斷試驗(yàn)的選擇原則

用于診斷的任何試驗(yàn)必須具備靈敏度與特異度二個(gè)基本特性，兩者缺一不可。理想的診斷試驗(yàn)是具有絕對(duì)的敏感性和特異性。62631、臨床靈敏度（sensitivitySe)：指診斷試驗(yàn)檢出陽(yáng)性病人的百分率，即真陽(yáng)性率（truepositiveTP率），計(jì)算公式為：臨床靈敏度（%）=（檢測(cè)為陽(yáng)性得病人數(shù)/實(shí)際陽(yáng)性的病人數(shù)）

100%

患病人數(shù)正確診斷人數(shù)642、臨床特異度(specificitySp):指診斷實(shí)驗(yàn)檢查確定未患病者的陰性百分率，即真陰性率（truenegativeTN率），計(jì)算公式為：臨床特異度（%）=（結(jié)果為陰性的人數(shù)/全部受檢的未患本病的人數(shù)）

100%未患病人數(shù)正確診斷人數(shù)65（二）參考值與醫(yī)學(xué)決定水平的確定“參考值”與“參考范圍”的概念：在規(guī)定人群中抽樣進(jìn)行測(cè)定，由此得到的均數(shù)及分布范圍，只能作為它所代表人群的判斷參考。原來(lái)叫正常值。例如：血糖的參考值：5.55mmol/L

參考值范圍：3.89-6.11mmol/L66

參考值的確定：

參考個(gè)體的選擇原則：具有代表性；隨機(jī)選擇；樣本要達(dá)到要求，100例以上；測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。參考值范圍：均數(shù)-標(biāo)準(zhǔn)差法：X2S

可信區(qū)間法：95%可信限672、醫(yī)學(xué)決定水平的確定

概念：指導(dǎo)臨床處理病情的某一指標(biāo)的不同閾值，一般用Xc表示。一個(gè)診斷實(shí)驗(yàn)一般確定三個(gè)決定水平：Xc1：待診值，提示需進(jìn)一步檢查的閾值；Xc2：確診值，提示需要采取治療措施的界值；Xc3：提示預(yù)后或需要緊急處理的界值。另外，有些指標(biāo)還應(yīng)設(shè)置危急值。68010203040506070③20②35①52g/L血清白蛋白的醫(yī)學(xué)決定水平血清ALT的醫(yī)學(xué)決定水平206030069正常異常Xc1Xc2

參考值范圍與醫(yī)學(xué)決定水平的關(guān)系Xc37071臨床靈敏度臨床特異度陽(yáng)性似然比評(píng)價(jià)指標(biāo)診斷評(píng)價(jià)指標(biāo)陰性似然比72

似然比（likelihoodratio，LR）：反映預(yù)測(cè)值與患病率的符合程度和變化方向，是表示診斷試驗(yàn)特性的量化指標(biāo)。似然比不受患病率的影響，因而是比靈敏度和特異度更為穩(wěn)定的指標(biāo)。似然比73

陽(yáng)性似然比（positivelikelihoodratio，PLR）指診斷試驗(yàn)的真陽(yáng)性率與假陽(yáng)性率之比值，反映的是誤診率。陽(yáng)性似然比=靈敏度/（1-特異度）。陽(yáng)性似然比真陽(yáng)性真陰性假陽(yáng)性74

所謂陰性似然比（negativelikelihoodratio，NLR）指診斷試驗(yàn)的假陰性率與真陰性率之比值，反應(yīng)的是方法的漏診率。陰性似然比=1-靈敏度/特異度。陰性似然比真陽(yáng)性真陰性假陽(yáng)性75

陽(yáng)性預(yù)測(cè)值（positivepredictivevalue，PPV）指診斷試驗(yàn)的真陽(yáng)性數(shù)占總陽(yáng)性數(shù)的比率，反映的是確定診斷的可靠性。陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=TP/（TP+FP）。陽(yáng)性預(yù)測(cè)值真陽(yáng)性真陰性假陽(yáng)性

76

陰性預(yù)測(cè)值（negativepredictivevalue，NPV）指診斷試驗(yàn)的真陰性數(shù)占總陰性數(shù)的比率，反映的是排除診斷的可信度。陰性預(yù)測(cè)值=TN/（TN+FN）。陰性預(yù)測(cè)值真陽(yáng)性真陰性假陽(yáng)性77

總預(yù)告效率指診斷試驗(yàn)的真陽(yáng)性數(shù)和真陰性占受檢人數(shù)數(shù)的比率，反映的是實(shí)驗(yàn)總體的可信度。陰性預(yù)測(cè)值=TP+TN/（TP+FP+TN+FN）?？傤A(yù)測(cè)效率真陽(yáng)性真陰性假陽(yáng)性78診斷試驗(yàn)的評(píng)價(jià)指標(biāo)舉例人數(shù)陽(yáng)性結(jié)果人數(shù)陰性結(jié)果人數(shù)總計(jì)有病人數(shù)無(wú)病人數(shù)總計(jì)指標(biāo)TP（25）FP（75）100FN（15）TN（85）10040160200陽(yáng)性率（靈敏度）=TP/TP+FN=25/40陰性率（特異度）=TN/TN+FP=85/160陽(yáng)性預(yù)告值=TP/TP+FP=25/100陰性預(yù)告值=TN/TN+FN=85/100效率=TP+TN/TP+TN+FP+FN=110/200陽(yáng)性似然比=真陽(yáng)性率/假陽(yáng)性率=25/40/（1-85/160）陰性似然比=假陰性率/真陰性率=（1-25/40）/85/16079（四）受試者工作曲線

在診斷指標(biāo)中以真陽(yáng)性（TP率）對(duì)假陽(yáng)性率（FP率）作圖，并將相對(duì)的點(diǎn)連接起來(lái)所得到的曲線稱為受試者工作曲線（receiveroperatingcharacteristicROC曲線）,用于表示一個(gè)特定的檢查方法對(duì)區(qū)別特定的患病組和非患病組樣本的檢測(cè)性能。根據(jù)實(shí)際情況把試驗(yàn)結(jié)果分為多個(gè)等級(jí)，如正常、大致正常、可疑、大致異常、異常五個(gè)等級(jí)來(lái)對(duì)診斷試驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià).ROC曲線的作用主要是：選擇合適的診斷閾值；根據(jù)診斷試驗(yàn)的ROC曲線，可以比較兩種不同診斷試驗(yàn)對(duì)診斷同種疾病的可靠性。80假陽(yáng)性率陰性率陽(yáng)性率1.00.90.80.70.60.50.40.30.20.10

00.10.20.30.40.50.60.70.80.91.0

1.00.90.80.70.60.50.40.30.20.10

受試者工作曲線81血液標(biāo)本的采集和注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)方法的選擇實(shí)驗(yàn)方法的評(píng)價(jià)指標(biāo)和方法重點(diǎn)內(nèi)容小結(jié)臨床診斷試驗(yàn)的性能評(píng)價(jià)82ABO血型鑒定實(shí)驗(yàn)原理抗原抗體反應(yīng)——在ABO血型系統(tǒng)中，紅細(xì)胞膜上抗原分A和B兩種抗原，而血清抗體分抗A和抗B兩種抗體。A抗原加抗A抗體或B抗原加抗B抗體，則產(chǎn)生凝集現(xiàn)象→從而測(cè)知受試者紅細(xì)胞膜上有無(wú)A或/和B抗原→判斷血型抗體在相鄰的紅細(xì)胞表面抗原決定簇之間搭橋形成肉眼可見的顆粒狀凝集團(tuán)塊.見圖IgM抗體凝集紅細(xì)胞示意圖IgM抗體凝集紅細(xì)胞示意圖

IgGM在鹽水介質(zhì)中產(chǎn)生凝集試劑

抗A、抗B試劑血清5%的A型、B型及O型試劑紅細(xì)胞懸液受檢者血清5%的受檢者紅細(xì)胞懸液(從指尖或耳垂取血一滴，加入含1ml生理鹽水的小試管內(nèi)，混勻，即得約5％紅細(xì)胞懸液。采血時(shí)應(yīng)注意先用75％酒精消毒指尖或耳垂。)(取少量受檢者紅細(xì)胞（約0.2~0.5ml）用生理鹽水洗滌3次，然后加入適量生理鹽水調(diào)配成5%濃度。)四實(shí)驗(yàn)步驟.swf

1.玻片法（1）取雙凹玻片一塊，用干凈紗布輕拭使之潔凈，在玻片兩端用記號(hào)筆標(biāo)明A及B，并分別各滴入A及B標(biāo)準(zhǔn)血清一滴。（2）用滴管吸取紅細(xì)胞懸液，分別各滴一滴于玻片兩端的血清上，注意勿使滴管與血清相接觸。（3）竹簽兩頭分別混合，攪勻。用兩根分別用來(lái)混合A型和B型標(biāo)準(zhǔn)血清和紅細(xì)胞懸液（4）觀察結(jié)果。如有凝集反應(yīng)可見到呈紅色點(diǎn)狀或小片狀凝集塊浮起。先用肉眼看有無(wú)凝集現(xiàn)象，肉眼不易分辨時(shí)，則在低倍顯微鏡下觀察，如有凝集反應(yīng)，可見紅細(xì)胞聚集成團(tuán)。（5）判斷血型根據(jù)被試者紅細(xì)胞是否被A，B型標(biāo)準(zhǔn)血清所凝集，判斷其血型。

2.試管法(正定型)ABA標(biāo)準(zhǔn)血清2滴B標(biāo)準(zhǔn)血清2滴受試者的紅細(xì)胞懸液1滴1滴混勻后1000rpm離心1min或3000rpm離心15秒。。取出觀察結(jié)果。完全凝集的管底部有紅細(xì)胞的凝塊，管底細(xì)胞邊緣呈花邊狀，輕彈試管凝塊不散；完全不凝的試管，血細(xì)胞均勻的沉到管底，邊緣整齊，用手輕彈試管，紅細(xì)胞像一縷煙似的立即上升，隨即成為均勻的懸液;輕微凝集的，必須將液體轉(zhuǎn)到載玻片上鏡檢后判定凝集程度。

試管法(反定型)

AcBcOc

受檢者血清2滴2滴2滴5%的A型紅細(xì)胞懸液1滴5%的B型紅細(xì)胞懸液1滴5%的O型紅細(xì)胞懸液1滴立即以1000rpm離心1分鐘或3000rpm離心15秒。輕輕扣動(dòng)試管底部，觀察結(jié)果----同前血型判定swf正定型反定型

結(jié)果抗A抗BA型RBCB型RBCO型RBC--++-O+--+-A-++--B++---AB五注意事項(xiàng)玻片、試管都要標(biāo)記?。。。珹及B標(biāo)準(zhǔn)血清絕對(duì)不能相混,不要依靠用染料顏色標(biāo)記血清。工作中要形成自己的習(xí)慣！所用玻片、試管實(shí)驗(yàn)前必須清洗干凈，以免出現(xiàn)假凝集現(xiàn)象。紅細(xì)胞懸液滴管頭不能接觸標(biāo)準(zhǔn)血清液面，竹簽一端去混勻一側(cè)就不能去接觸另一側(cè)。一般先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，便于核實(shí)是否漏加血清。離心時(shí)間、速度嚴(yán)格要求，以防假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果。試驗(yàn)用血清和試劑紅細(xì)胞都應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化。要在光亮的背景下觀察凝集,可使用光鏡檢查小的凝集,同時(shí)應(yīng)注意觀察凝集強(qiáng)度，有助于A、B亞型的發(fā)現(xiàn)，觀察后立即記錄觀察結(jié)果。ＡＢＯ正反定型結(jié)果不一致的常見原因有哪些？（１）人為因素：①試劑不標(biāo)準(zhǔn)、失效或污染；③操作中加錯(cuò)樣本或試劑、離心速度不足或過度、細(xì)胞與血清比例不當(dāng)、結(jié)果判斷錯(cuò)誤等。（２）客觀因素：①因某些疾病導(dǎo)致抗原減弱如：白血病，MDS（骨髓增生異常綜合征）患者血型抗原減弱導(dǎo)致誤定血型。②受檢者抗體效價(jià)低（如嬰幼兒、老年人、大量輸液的患者，血漿蛋白低下等）③某些藥物干擾如輸注右旋糖酐后會(huì)干擾血型檢定。血樣本血標(biāo)本紅細(xì)胞懸液制備抗凝或不抗凝的血標(biāo)本→洗滌→壓積紅細(xì)胞→配制紅細(xì)胞懸液2-3%的紅細(xì)胞懸液試管法血型鑒定、效價(jià)滴定5%的紅細(xì)胞懸液玻片法血型鑒定、間接抗人球蛋白試驗(yàn)10%的紅細(xì)胞懸液抗體親和力測(cè)定血清標(biāo)本抗凝或不抗凝血標(biāo)本→37℃水浴箱→竹簽使血塊與試管壁分離→離心→將血清吸至干凈試管待用ABO血型鑒定原理：根據(jù)ABO血型的分型原則及其獨(dú)特的性質(zhì)，利用凝集試驗(yàn)技術(shù)通過正定型（紅細(xì)胞定型）和反定型（血清定型）兩組試驗(yàn)可準(zhǔn)確鑒定ABO血型。試劑：抗A、抗B試劑血清A型、B型和O型試劑紅細(xì)胞懸液2-3%受檢者紅細(xì)胞懸液和血清或全血ABO血型鑒定方法：玻片法不適于血清抗體鑒定試管法正定型、反定型結(jié)果解釋凝集為陽(yáng)性即被檢紅細(xì)胞膜上有與該試劑血清抗體相對(duì)應(yīng)的抗原；或被檢血清中有與該試劑紅細(xì)胞抗原相對(duì)應(yīng)的抗體。不凝集為陰性加試劑抗體血清加被檢紅細(xì)胞懸液離心相對(duì)應(yīng)的抗原抗體反應(yīng)觀察結(jié)果

ABO血型判斷

血正定型反定型型

抗-A抗-BACBCOC

A

+

——

+

—

B

—

+

+

——

O

——

+

+

—

AB

++

———

思考題ABO血型的分類原則是什么？

ABO

血型的分類原則是根據(jù)紅細(xì)胞膜上所存在的抗原，血清中所存在的抗體來(lái)進(jìn)行分類的。通常使用抗-A

和抗B

兩種血清及

A型、B

型和O

型三種試劑紅細(xì)胞來(lái)鑒別。如受檢者紅細(xì)胞被抗血清凝集，說(shuō)明紅細(xì)胞膜上存在相應(yīng)的抗原；如不發(fā)生凝集說(shuō)明不存在相應(yīng)抗原；如受檢者血清與試劑紅細(xì)胞發(fā)生凝集，說(shuō)明血清中存在相應(yīng)的抗體；如不發(fā)生凝集，說(shuō)明不存在相應(yīng)抗體。

為什么ABO血型鑒定應(yīng)采用“正反定型”兩種方法？因?yàn)锳BO

血型鑒定,主要依據(jù)受檢者紅細(xì)胞與抗A

、抗B

試劑血清反應(yīng)結(jié)果確定,此法稱正定型法；也可通過受檢者的血清與A型、B型和O型試劑紅細(xì)胞反應(yīng)結(jié)果確定,此法稱反定型法，同時(shí)采用正反定型法,并互相核對(duì)其結(jié)果是否一致是一個(gè)可靠的血型鑒定法。為什么在反定型中使用O型紅細(xì)胞？

因?yàn)橛行┦苎呋蚬┭哐逯写嬖谝蛎庖摺D女妊娠或不當(dāng)輸血而引起的抗A或抗B以外的抗體，這些抗體不是自然所期望存在的。血清反定型時(shí)，使用O型紅細(xì)胞可在ABO

血型鑒定試驗(yàn)過程中檢測(cè)出受檢血清中是否有“不規(guī)則”抗體的存在。

為什么紅細(xì)胞懸液過濃或過淡均可出現(xiàn)假陰性反應(yīng)結(jié)果？因?yàn)榭乖⒖贵w在適當(dāng)?shù)谋壤拢磻?yīng)最強(qiáng)。若紅細(xì)胞懸液過濃，則抗原過剩，抗體不足，每個(gè)紅細(xì)胞均只能吸收少量抗體，不足以形成凝集。若紅細(xì)胞懸液過淡，則紅細(xì)胞間距離較大，不易集聚在一起，不形成凝集。在實(shí)際血型鑒定時(shí)，玻片法用5%

紅細(xì)胞懸液敏感性較強(qiáng)，并應(yīng)在鑒定過程中不斷搖動(dòng)玻片以促使其相互接觸。試管法用2%

濃度的紅細(xì)胞懸液敏感性較好，容易觀察凝集。為什么玻片法血型鑒定要嚴(yán)格規(guī)定觀察結(jié)果的時(shí)間？凝集反應(yīng)出現(xiàn)的快慢與強(qiáng)弱是由抗原抗體的性質(zhì)決定的,如果抗原的抗原性強(qiáng)，抗體效價(jià)高，凝集反應(yīng)的第一，第二階段可以在數(shù)秒內(nèi)完成；如抗原的抗原性弱，抗體效價(jià)也低，則凝集反應(yīng)不明顯，反應(yīng)需要一段時(shí)間才能完成。因?yàn)檠逶诳罩斜┞稌r(shí)間過長(zhǎng)，發(fā)生濃縮，從而使紅細(xì)胞聚集，造成假陽(yáng)性結(jié)果；如果不等反應(yīng)完成便判定反應(yīng)結(jié)果，可使陽(yáng)性結(jié)果誤報(bào)成陰性結(jié)果，造成假陰性。所以玻片法血型鑒定要嚴(yán)格規(guī)定觀察結(jié)果的時(shí)間凝膠試驗(yàn)使用的試劑和器材凝膠技術(shù)凝膠法鑒定ABO血型優(yōu)點(diǎn)：敏感：在凝膠試驗(yàn)中常能發(fā)現(xiàn)其它試驗(yàn)不易發(fā)現(xiàn)的問題。結(jié)果可保存：凝膠試驗(yàn)的結(jié)果可在冰箱中保存數(shù)日，并且較容易被拍成照片。操作技術(shù)要求較低：凝膠試驗(yàn)的操作主要是簡(jiǎn)單的加樣和判讀，孵育、離心過程都有專門的設(shè)備。其中能被人為改變的因素較少。無(wú)需洗滌的抗球蛋白試驗(yàn)：缺點(diǎn)不能做反定型凝膠試驗(yàn)方法成本較高，需要特殊設(shè)備。高度敏感有時(shí)也會(huì)造成不便。MN血型鑒定試劑抗M、抗N試劑血清M型、N型、MN型紅細(xì)胞受檢者紅細(xì)胞懸液方法玻片法試管法一、人類白細(xì)胞抗原

人類白細(xì)胞抗原代表個(gè)體特異性與移植排斥有關(guān)的抗原稱為組織相容性抗原或移植抗原-MHS

編碼MHS的基因組稱為主要組織相容性復(fù)合物(MHC)

人類的MHC是首先在白細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)的，稱為人類白細(xì)胞抗原(humanleukocyteantigen，HLA)HLA的研究歷史最早發(fā)現(xiàn)人類白細(xì)胞抗原者為Dausset-1954年

HLA不僅僅是白細(xì)胞特異性同種抗原。它是分布廣泛的組織抗原。HLA的分型命名

血清學(xué)分型命名具有臨床意義的HLA基因有A、B、C、DR、DQ、DP等位點(diǎn)(Loci)，每個(gè)位點(diǎn)又有若干等位基因，這些基因的產(chǎn)物便是HLA抗原。

臨床意義比較大的HLA-A、B、C稱為Ⅰ類抗原

HLA-DR、DQ、DP稱為Ⅱ類抗原。HLA的遺傳

單體型遺傳存在基因重組多態(tài)性現(xiàn)象連鎖不平衡

HLA抗體及抗體檢測(cè)

臨床上HLA抗體多由妊娠、輸血或器官移植等免疫產(chǎn)生HLA在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用

一、HLA與輸血

HLA與非溶血性輸血反應(yīng)

HLA與血小板輸注二、HLA與器官移植

(一)腎移植

(二)骨髓移植三、HLA與親子鑒定二、血小板血型一類是與其他細(xì)胞表面或組織共有的抗原，稱血小板相關(guān)抗原另一類為血小板特異性抗原血小板血型相關(guān)抗原：主要與紅細(xì)胞的ABO血型系統(tǒng)以及人類白細(xì)胞抗原(HLA)有關(guān)特異性抗原：由血小板特有的抗原決定簇組成，表現(xiàn)出血小板獨(dú)特的遺傳多態(tài)性，在其他細(xì)胞和組織上不能發(fā)現(xiàn)血小板血型血小板表面存在紅細(xì)胞ABO系統(tǒng)的A抗原和B抗原,可能是從血漿中吸附上的。是否還存在其他紅細(xì)胞血型抗原尚在探討之中在我國(guó)，通常進(jìn)行ABO同型血小板輸血配合性血小板輸注ABO同型血小板抗體的篩選交叉配合試驗(yàn)：確保供受體的血小板型和HLA型的配合血小板血型

血小板特異性抗原

具有獨(dú)特的型特異性，并構(gòu)成血小板膜結(jié)構(gòu)中的一部分血小板特異性抗原有6個(gè)血型系統(tǒng)24個(gè)抗原，正式命名為HPA-1、HPA-2、HPA-3、HPA-4、HPA-5、HPA-15血小板血型的臨床意義一.血小板輸注無(wú)效性(PTR)二.輸血后紫癜(PTP)三.新生兒同種免疫性血小板減少性紫癜(NAITP)四.血小板的自身免疫作用---特發(fā)性血小板減少性紫癜(簡(jiǎn)稱ITP)血小板同種抗體與輸血

1.ABO血型的選擇

一般需要做主側(cè)或次側(cè)的交叉配血，最好輸注ABO血型配合的血小板

2．Rh血型的選擇

D陰性的患者，最好要避免用D陽(yáng)性獻(xiàn)血者的濃縮血小板。對(duì)育齡婦女可以注射Rh免疫球蛋白

三、輸血前免疫血液學(xué)檢查

目的:供者與患者的血液

安全有效相容輸血前免疫血液學(xué)檢查內(nèi)容：患者的病史、標(biāo)本的核對(duì)及處理供受雙方ABO、Rh血型鑒定不規(guī)則抗體的篩選和鑒定交叉配血試驗(yàn)報(bào)告和發(fā)血標(biāo)本一、標(biāo)本采集二、紅細(xì)胞懸液的配制三、標(biāo)本的保存標(biāo)本一、標(biāo)本采集1．紅細(xì)胞標(biāo)本-ACD或CPD、(Na2-EDTA)抗凝靜脈血少數(shù)患者有一種自身抗體--不宜用抗凝血液作為紅細(xì)胞抗原標(biāo)本

2．血清標(biāo)本

一般實(shí)驗(yàn)避免使用血漿配血試驗(yàn)用血清——不超過72小時(shí)二、紅細(xì)胞懸液的配制1、紅細(xì)胞懸液常用濃度有2％、5％和10％2、2％的懸液一般用于滴定抗體效價(jià)，5％的懸液常用于血型鑒定和交叉配血試驗(yàn)，10％的懸液則用于測(cè)定抗體的親合力。

三、標(biāo)本的保存1．血清標(biāo)本不稀釋的血清標(biāo)本如加有防腐劑可在4℃保存數(shù)月,在一20℃以下可保存數(shù)年如用生理鹽水稀釋的血清只限當(dāng)天使用2．紅細(xì)胞標(biāo)本一般試驗(yàn)用的凝血標(biāo)本要在5天之內(nèi)使用，以不溶血為準(zhǔn)。如用保存液可保存3周用鹽水配制的紅細(xì)胞懸液只能在當(dāng)天使用

供受雙方ABO、Rh血型鑒定ABO血型正反定型Rh血型鑒定｝試管法抗A、抗B以外的所有抗體統(tǒng)稱為不規(guī)則抗體。常見于多次輸血的人群不規(guī)則抗體的篩選和鑒定不規(guī)則抗體的篩選和鑒定患者血清+試劑篩選紅細(xì)胞鹽水介質(zhì)聚凝胺介質(zhì)抗人球蛋白介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)受者血清+供者紅細(xì)胞受者紅細(xì)胞+供者血清方法主側(cè)次側(cè)

鹽水介質(zhì)聚凝胺介質(zhì)抗人球蛋白介質(zhì)（1）低離子聚凝胺交叉配血技術(shù)原理：聚凝胺（Polybrene），一種高價(jià)陽(yáng)離子季胺鹽多聚物，溶解后能產(chǎn)生很多正電荷，可以中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，使紅細(xì)胞之間距離減少，能引起正常紅細(xì)胞可逆性的非特異性凝集。如果使抗體致敏的紅細(xì)胞被聚凝胺凝集，則凝集不可逆。1紅細(xì)胞間有一定間距2加入聚凝胺后，可以縮短紅細(xì)胞之間的距離，使其非特異性凝集3加入枸櫞酸鈉，可以中和聚凝胺4紅細(xì)胞的非特異性凝集消失聚凝胺交叉配血技術(shù)示意圖1聚凝胺枸櫞酸鈉1紅細(xì)胞上已有不完全抗體致敏2加入聚凝胺后，縮短紅細(xì)胞之間的距離，讓不完全抗體可以同時(shí)與兩個(gè)紅細(xì)胞結(jié)合使其特異性凝集3加入枸櫞酸鈉中和聚凝胺4由于不完全抗體的結(jié)合，紅細(xì)胞的特異性凝集不消失聚凝胺交叉配血技術(shù)示意圖2聚凝胺枸櫞酸鈉不完全抗體試驗(yàn)分步原理血清紅細(xì)胞懸液加入LIM混合液Polybrene受體血型抗原IgG抗體迅速致敏試驗(yàn)分步原理Polybrene上海市血液中心血Polybrene分子連接到紅細(xì)胞上加入Polybrene試驗(yàn)分步原理離心Polybrene拉近紅細(xì)胞間的距離并造成凝集1個(gè)IgG分子同時(shí)連接兩個(gè)紅細(xì)胞試驗(yàn)分步原理加入重懸液減弱了Polybrene的作用重懸液上海市血液中心血加重懸液試驗(yàn)分步原理已被血型抗體致敏的紅細(xì)胞不會(huì)散開陽(yáng)性結(jié)果試驗(yàn)分步原理未被血型抗體致敏的紅細(xì)胞很快散開陰性結(jié)果注意事項(xiàng)按比例加樣致敏時(shí)間觀察非特異性凝集觀察結(jié)果關(guān)于冷凝集聚凝胺方法的特點(diǎn)靈敏：靈敏度比抗球蛋白方法高1-20倍。速度快：實(shí)驗(yàn)時(shí)間5分鐘左右。準(zhǔn)確：準(zhǔn)確度高于酶試驗(yàn)。不適合于Kell系統(tǒng)抗體的檢測(cè)，但黃種人群中Kell系統(tǒng)抗體極罕見。操作要求較高（2）微柱凝膠技術(shù)微柱凝膠技術(shù)

凝膠技術(shù)的原理

反應(yīng)室外管壁反應(yīng)室底孔內(nèi)套管壁凝膠或玻璃珠親和凝膠試劑或鹽水特殊粘液凝膠技術(shù)的原理：A、反應(yīng)室：下端底孔很小，液體在孵育過程中不會(huì)流入下方微柱中。B、試劑或鹽水層：紅細(xì)胞在離心力作用下穿越該層，紅細(xì)胞與反應(yīng)室中的血清分離并與該層液體中的試劑反應(yīng)。C、粘液：親和柱中有一層粘液，作用與“試劑或鹽水層”相同。1）敏感：在凝膠試驗(yàn)中常能發(fā)現(xiàn)其它試驗(yàn)不易發(fā)現(xiàn)的問題。2）結(jié)果可保存凝膠試驗(yàn)的結(jié)果可在冰箱中保存數(shù)日，并且較容易被拍成照片。3）操作技術(shù)要求較低：凝膠試驗(yàn)的操作主要是簡(jiǎn)單的加樣和判讀，孵育、離心過程都有專門的設(shè)備。其中能被人為改變的因素較少。4)無(wú)需洗滌的抗球蛋白試驗(yàn)：

優(yōu)點(diǎn)：缺點(diǎn)：凝膠試驗(yàn)方法成本較高，需要特殊設(shè)備。高度敏感有時(shí)也會(huì)造成不便：有報(bào)導(dǎo)應(yīng)用凝膠試驗(yàn)后，1/300的庫(kù)血直抗陽(yáng)性。2不完全抗體可以結(jié)合在紅細(xì)胞表面,但是不能和兩個(gè)紅細(xì)胞同時(shí)結(jié)合（致敏）。3加入抗人球蛋白1紅細(xì)胞彼此之間有一定的間距4抗人球蛋白可以同時(shí)和兩個(gè)不完全抗體的FC段結(jié)合，從而把紅細(xì)胞連接在一起。（3）抗人球蛋白交叉配血法示意圖1.試劑紅細(xì)胞(表面標(biāo)有抗血小板抗體)2.加入供者血小板3.試劑紅細(xì)胞和血小板特異性結(jié)合4.加入受者的血清,如有抗血小板抗體,則和血小板發(fā)生特異性結(jié)合5.凝膠柱中的抗人球蛋白捕獲抗血小板抗體,導(dǎo)致試劑紅細(xì)胞凝集。（4）血小板配血實(shí)驗(yàn)原理示意圖（陽(yáng)性）1.試劑紅細(xì)胞(表面標(biāo)有抗血小板抗體)2.加入供者血小板3.試劑紅細(xì)胞和血小板特異性結(jié)合4.加入受者的血清,如血清中無(wú)抗血小板抗體,則凝膠柱中的抗人球蛋白不發(fā)生特異性結(jié)合，試劑紅細(xì)胞仍呈單個(gè)分布。血小板配血實(shí)驗(yàn)原理示意圖（陰性反應(yīng)）抗原（antigen，Ag）指能啟動(dòng)機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫應(yīng)答，并能與應(yīng)答的產(chǎn)物在體內(nèi)或體外特異結(jié)合的物質(zhì)。兩個(gè)重要特性：

（1）免疫原性：指抗原能刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗體或致敏淋巴細(xì)胞的能力。（2）抗原性：指抗原與其誘生的抗體或致敏淋巴細(xì)胞在體內(nèi)外發(fā)生特異性結(jié)合的能力。第一節(jié)抗原抗原與半抗原的區(qū)別一、抗原的性質(zhì)（一）異物性

異物性是物質(zhì)作為抗原的首要性質(zhì)。具有異物性的物質(zhì)包括以下三類：異種物質(zhì)同種異體物質(zhì)自身物質(zhì)口蹄疫病毒（二）理化特性分子量：具有免疫原性通常為大分子有機(jī)物，其相對(duì)分子量通常在10kD以上。物理性狀：免疫原性的強(qiáng)弱與抗原物質(zhì)的物理性狀有關(guān)。免疫原性較弱的物質(zhì)吸附某些大顆粒物質(zhì)可增強(qiáng)其免疫原性?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)：抗原物質(zhì)的化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)決定其免疫原性。（三）其他因素宿主反應(yīng)性：不同種動(dòng)物、甚至同種動(dòng)物不同個(gè)體間，對(duì)同一抗原的應(yīng)答性差別很大。免疫方法：抗原進(jìn)入機(jī)體的途徑、劑量、次數(shù)、間隔時(shí)間以及免疫佐劑的使用等也與免疫原性的強(qiáng)弱有關(guān)，也可影響免疫應(yīng)答。二、抗原的特異性

特異性（specificity）是指抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，并與應(yīng)答產(chǎn)物發(fā)生反應(yīng)所顯示的專一性，是指物質(zhì)之間的相互吻合性或針對(duì)性?？乖奶禺愋约缺憩F(xiàn)在免疫原性，也表現(xiàn)在免疫反應(yīng)性。（一）抗原決定簇抗原決定簇的特點(diǎn)：抗原決定簇與相應(yīng)淋巴細(xì)胞表面的抗原受體結(jié)合，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答；與相應(yīng)的抗體或致敏淋巴細(xì)胞特異性結(jié)合發(fā)生免疫反應(yīng)?？乖瓫Q定簇的數(shù)目、化學(xué)基團(tuán)的組成、化學(xué)性質(zhì)和空間結(jié)構(gòu)決定著該抗原的特異性，也影響著該抗原的免疫原性?？乖Y(jié)合價(jià)表位結(jié)合價(jià)=2=2表位結(jié)合價(jià)=6=4抗原結(jié)構(gòu)不同影響抗原的特異性1.構(gòu)象決定簇和順序決定簇2.功能性決定簇和隱蔽性決定簇3.T細(xì)胞決定簇和B細(xì)胞決定簇抗原決定簇的類型：（二）共同抗原與交叉反應(yīng)

兩種不同的抗原具有相同或相似的抗原決定簇，互稱為共同抗原（commonantigen）?？贵w對(duì)具有相同或相似抗原決定簇的不同抗原發(fā)生反應(yīng)，稱為交叉反應(yīng)（crossreaction）。abcdfe123a和b表示不同特異性的抗體，c和d表示相似的抗原決定簇，e為與抗體b特異性結(jié)合的抗原決定簇，f為其它抗原決定簇；1、2和3為共同抗原，具有相同和相似的抗原決定簇，與同一特異性抗體發(fā)生交叉反應(yīng)。交叉反應(yīng)1.完全抗原2.半抗原（一）根據(jù)抗原的特異性分類三、抗原的分類（二）根據(jù)誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答分類1.胸腺依賴性抗原2.胸腺非依賴性抗原3.超抗原半抗原

+載體抗體BT完全抗原BBBTTD-AgTI-Ag組成B細(xì)胞表位和T細(xì)胞表位重復(fù)B細(xì)胞表位T細(xì)胞的輔助必需無(wú)需抗體類型多種，主要為IgGIgM免疫應(yīng)答體液免疫和細(xì)胞免疫體液免疫免疫記憶有無(wú)TD-Ag和TI-Ag的比較

直接非特異性激活某些T細(xì)胞亞群或B細(xì)胞亞群的物質(zhì)，極低濃度即可激活大量的T細(xì)胞克隆，并產(chǎn)生極強(qiáng)的免疫應(yīng)答，稱為超抗原。其一端可直接與TCR的某些片段區(qū)結(jié)合，以完整蛋白形式激活T細(xì)胞；另一端和APC表面的MHC-Ⅱ類分子非多態(tài)區(qū)外側(cè)結(jié)合。一類多克隆激活劑。3.超抗原超抗原普通抗原單克隆T細(xì)胞反應(yīng)1:104-1:105超抗原單克隆T細(xì)胞反應(yīng)1:4-1:10APCT細(xì)胞超抗原MHCⅡ類分子抗原肽V

V

TCR超抗原普通抗原化學(xué)性質(zhì)細(xì)菌外毒素、逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白普通蛋白質(zhì)、多糖等TCR結(jié)合部位VβVβ、Dβ、Jβ、Vα、JαMHC結(jié)合部位及其限制性非多態(tài)區(qū)，無(wú)多態(tài)區(qū)肽結(jié)合槽，有反應(yīng)細(xì)胞CD4+T細(xì)胞T、B細(xì)胞應(yīng)答特點(diǎn)直接激活T細(xì)胞APC處理后被T細(xì)胞識(shí)別T細(xì)胞反應(yīng)頻率1/20~1/51/106~1/104超抗原與普通抗原的主要特性比較（三）根據(jù)抗原與機(jī)體的親緣關(guān)系分類1.異種抗原2.同種異型抗原3.異嗜性抗原4.自身抗原痢疾桿菌

指來(lái)自于另一物種的抗原性物質(zhì)，包括各種病原微生物及其代謝產(chǎn)物，植物蛋白、異種動(dòng)物血清、異種器官移植物以及吸入和食進(jìn)的異種蛋白等。通常情況下，異種抗原的免疫原性較強(qiáng)，容易引起較強(qiáng)的免疫應(yīng)答。1.異種抗原(xenoantigen)傷寒桿菌鏈球菌流感病毒G-菌胞壁G＋菌胞壁腺病毒病原微生物抗原真菌白色念珠菌

(1,000Xoil)瘧原蟲病原微生物抗原2.同種異型抗原指同一物種而基因型不同個(gè)體之間存在的抗原性物質(zhì)。常見的人類同種異型抗原有血型抗原（紅細(xì)胞和血小板）和主要組織相容性抗原（HLA）。能誘導(dǎo)宿主發(fā)生自身免疫應(yīng)答的自身組織成分。3.自身抗原是一類與種屬特異性無(wú)關(guān)，存在于人、動(dòng)植物和微生物之間的共同抗原。4.異嗜性抗原豚鼠綿羊（四）其他分類分類依據(jù)分類物理性狀顆粒性抗原和可溶性抗原化學(xué)性質(zhì)蛋白質(zhì)抗原、多肽抗原、脂蛋白抗原、多糖抗原和核酸抗原獲得方式天然抗原、人工抗原與合成抗原活化淋巴細(xì)胞方式特異性抗原、超抗原和有絲分裂原誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的作用移植抗原、腫瘤抗原、變應(yīng)原、過敏原及耐受原返回章目錄

免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）是指具有抗體（antibody，Ab）活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)上與抗體相似的球蛋白。

第二節(jié)免疫球蛋白抗體（Ab）是指B細(xì)胞接受抗原刺激后增殖分化為漿細(xì)胞所產(chǎn)生的一類能與相應(yīng)抗原特異結(jié)合的球蛋白。主要存在于血清等體液中，顯示免疫功能。免疫球蛋白（Ig）具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的的球蛋白?？煞譃榉置谛停╯Ig）和膜型（mIg）?？贵w＝免疫球蛋白？一、免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)免疫球蛋白呈“Y”字型的四肽鏈，由2條相同長(zhǎng)的重鏈（H鏈）和2條相同短的輕鏈（L鏈）通過鏈間二硫鍵連接而成，又稱Ig分子的單體。（一）免疫球蛋白的基本結(jié)構(gòu)1.H鏈：根據(jù)H鏈恒定區(qū)氨基酸的組成和排列順序的差異及其抗原特異性不同，分為α、γ、μ、δ、ε鏈，形成IgA、IgG、IgM、IgD和IgE。2.

L鏈：根據(jù)L鏈的結(jié)構(gòu)和抗原特異性不同，可分為k鏈與λ鏈，組成的Ig分別稱為k型Ig與λ型Ig。天然Ig分子中，重鏈同類，輕鏈同型。3.連接鏈

（J鏈）：以二硫鍵的形式共價(jià)結(jié)合到Ig的H鏈上，將單體Ig分子連接為多聚體。如，二聚體IgA和五聚體IgM。4.分泌片（SP）：以非共價(jià)形式結(jié)合于IgA二聚體上，并一起被分泌到粘膜表面，具有抵抗蛋白水解酶的作用，并介導(dǎo)IgA的轉(zhuǎn)運(yùn)。黏膜sIgA的合成和作用部位

1.可變區(qū)：靠近N端H鏈約l/4或1/5和L鏈約1/2的氨基酸的種類、排列順序與構(gòu)型變化很大，稱為可變區(qū)（V）。H鏈和L鏈的V區(qū)為VH和VL，各有3個(gè)超變區(qū)（HVR）或稱互補(bǔ)決定區(qū)（CDR）。V區(qū)的非HVR區(qū)變化較小，結(jié)構(gòu)較穩(wěn)定，稱為骨架區(qū)（FR）。（二）免疫球蛋白的功能區(qū)超變區(qū)（HVR）輕鏈：24-34、50-56、89-97重鏈：31-35、50-65、95-102框架區(qū)（FR）2.恒定區(qū)：Ig的多肽鏈羧基端（C端），H鏈的3/4或4/5和L鏈的1/2氨基酸的數(shù)量、種類、排列順序、構(gòu)型及含糖量均較穩(wěn)定，稱為恒定區(qū)（C區(qū)），分別稱為CH和CL。207

3.鉸鏈區(qū)：位于CH1與CH2之間富含脯氡酸，不易形成氫鍵且多二硫鍵，具有彈性、伸展性和可轉(zhuǎn)動(dòng)性，有利于Ig分子變構(gòu)與抗原決定簇結(jié)合。（四）免疫球蛋白的酶解片段(1)木瓜蛋白酶水解片段：木瓜蛋白酶將Ig分子鉸鏈區(qū)近N端的兩條H鏈裂解為兩個(gè)完全相同的抗原結(jié)合片段（Fab段）和一個(gè)可結(jié)晶片段（Fc段）。(2)胃蛋白酶水解片段：胃蛋白酶將H鏈從鏈間二硫鍵近C端處切斷，形成1個(gè)能與抗原特異性結(jié)合的大片段F(ab’)2和一些小分子多肽碎片pFc’。二、免疫球蛋白的抗原特異性根據(jù)Ig的種類、抗原決定簇存在的部位，以及在異種、同種異體或自體中免疫反應(yīng)的差異，將Ig的抗原特異性分為同種型、同種異型和獨(dú)特型，通常也稱為Ig的血清型。

1.類和亞類（根據(jù)H鏈的Ｃ區(qū)抗原性不同）

IgG—γ(gamma)IgA—α(alpha)IgM—μ(mu)IgD—δ(delta)IgE—ε(epsilon)

類IgG：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4IgA：IgA1、IgA2IgM:IgM1、IgM2亞類（一）同種型IgG1、IgG2、IgG3、IgG4結(jié)構(gòu)示意圖

2.型和亞型(根據(jù)輕鏈C區(qū)抗原特異性不同分型)

(1)型κ(kappa)型

λ(lambda)型(2)亞型同種異型（allotype）是指同一種屬不同個(gè)體的Ig分子也具有抗原特異性，主要表現(xiàn)在Ig的C區(qū)的一個(gè)或數(shù)個(gè)氨基酸的差異

（二）同種異型（三）獨(dú)特型

獨(dú)特型（idiotype，Id）是指同一個(gè)體不同B細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的Ig分子V區(qū)所具有的抗原特異性標(biāo)志，由Ig超變區(qū)特有的氨基酸序列和構(gòu)型所決定的。IgV區(qū)的功能是與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合，尤其是CDR區(qū)與抗原決定簇必須吻合，二者的結(jié)合具有互補(bǔ)性、高度特異性。（一）IgV區(qū)的功能三、抗體的生物學(xué)活性1.激活補(bǔ)體

人IgGl～3和IgM與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合后，結(jié)合Clq，通過經(jīng)典途徑激活補(bǔ)體系統(tǒng)。2.穿過胎盤和粘膜

IgG是惟一能通過胎盤的Ig。使胎兒被動(dòng)地獲得免疫能力，同樣也可誘發(fā)新生兒溶血病。（二）IgC區(qū)的功能3.結(jié)合Fc受體

Ig

V區(qū)與相應(yīng)抗原結(jié)合后，其Fc段與多種細(xì)胞表面的Fc受體（FcR）結(jié)合，激發(fā)多種不同的生物學(xué)效應(yīng)。（1）調(diào)理作用（Opsonization）（2）抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC）（3）介導(dǎo)I型超敏反應(yīng)（4）結(jié)合細(xì)菌蛋白224四、免疫球蛋白的特性和功能IgG主要由脾和淋巴結(jié)中的漿細(xì)胞合成，于出生后3個(gè)月開始合成，以單體形式存在于血液和細(xì)胞外液中，是血清和細(xì)胞外液中含量最高的Ig，人類IgG有IgG1~4四個(gè)亞類。（一）IgG

(1)單體分子；

(2)四個(gè)亞類；

(3)血清中含量最高的Ig；

(4)半衰期最長(zhǎng)；

(5)3～5歲達(dá)成人水平；

(6)可與SPA結(jié)合。1.一般特性2.生物學(xué)活性

(1)通過胎盤（新生兒抗感染）；(2)激活補(bǔ)體（裂解細(xì)胞）；(3)調(diào)理作用（促進(jìn)吞噬）；(4)介導(dǎo)ADCC（細(xì)胞毒作用）。3.實(shí)際意義

(1)抗感染；(2)自身抗體

自身免疫??；(3)介導(dǎo)變態(tài)反應(yīng)(Ⅱ、Ⅲ型)；(4)封閉抗體

腫瘤細(xì)胞逃逸；(5)親合層析法

IgG純化。（二）IgMIgM主要是由脾臟和淋巴結(jié)中的漿細(xì)胞合成，是個(gè)體發(fā)育中合成與分泌最早的Ig，在胚胎發(fā)育晚期的胎兒就能產(chǎn)生，由五個(gè)單體借一個(gè)J鏈和若干個(gè)二硫鍵連接而成的分泌型五聚體，是分子量最大的Ig，又稱巨球蛋白。激活補(bǔ)體能力最強(qiáng)，也可參與II、III型超敏反應(yīng)。血清型：IgA1，單體；分泌型：IgA2，二聚體,

粘膜局部漿細(xì)胞合成；（三）IgA1.兩種類型2.半衰期為6d；3.占血清Ig含量的5%～15%；4.粘膜局部抗感染免疫；5.聚合IgA激活補(bǔ)體替代途徑。

IgD主要由扁桃體和脾臟中的漿細(xì)胞產(chǎn)生，在個(gè)體發(fā)育中合成較晚，以單體形式存在于血清中，含量很低，表達(dá)在B細(xì)胞表面的IgD是B細(xì)胞成熟的表面標(biāo)志，又是B細(xì)胞的抗原識(shí)別受體（BCR）。（四）IgD返回章目錄（五）IgEIgE又稱親細(xì)胞抗體，主要由鼻咽部、扁桃體、支氣管、胃腸道等黏膜固有層中漿細(xì)胞產(chǎn)生，產(chǎn)生的部位與SIgA相似，是種系進(jìn)化過程中最晚出現(xiàn)的含量最低的Ig，僅占血清Ig總量的0.002％。第三節(jié)抗原抗體反應(yīng)抗原與抗體特異性結(jié)合反應(yīng)主要是二者分子間的結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性與親和性。體內(nèi)：溶菌、殺菌等作用，也可引起免疫病理?yè)p傷；體外：抗原的物理性狀不同（可溶性或顆粒性）、抗體類型及反應(yīng)條件（電解質(zhì)、補(bǔ)體等）不同，表現(xiàn)出、沉淀、細(xì)胞溶解和補(bǔ)體結(jié)合等反應(yīng)。一、基本原理（一）抗原抗體結(jié)合力1.靜電引力2.范德華引力：作用最小3.氫鍵：最具特異性4.疏水作用力：作用最大

抗原抗體結(jié)合力示意圖（二）抗原抗體的親和力與親合力1.親和力（affinity）：是抗體分子上的一個(gè)抗原結(jié)合部位與對(duì)應(yīng)的抗原決定簇之間的相適性而結(jié)合的強(qiáng)度。2.親合力

（avidity）：抗體結(jié)合部位與抗原表位之間結(jié)合的強(qiáng)度。（三）親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體可見反應(yīng)抗原抗體復(fù)合物

(疏水膠體)電解質(zhì)

抗原(親水膠體)

抗體(親水膠體)

+二、抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)（一）特異性1.特異性：抗原與抗體結(jié)合反應(yīng)的專一性。2.分子基礎(chǔ)：抗原表位與抗體分子高變區(qū)之間空間構(gòu)型的互補(bǔ)性?？乖c相應(yīng)抗體結(jié)合成復(fù)合物后，在一定條件下又可解離為游離抗原與抗體。影響因素：親合力和pH、離子強(qiáng)度等環(huán)境因素。（二）可逆性用途：常用親和層析技術(shù)來(lái)純化抗原或抗體。（三）比例性前帶：抗體過量后帶：抗原過量等價(jià)帶：二者比例合適

比例性：抗原與抗體發(fā)生可見反應(yīng)需遵循一定的量比關(guān)系?？乖贵w反應(yīng)比例性示意圖抗體稀釋抗原稀釋原液1:21:41:81:161:321:641:1281:256原液4＋4＋4＋3＋3＋2＋＋＋＋1:22＋

4＋4＋3＋3＋2＋＋＋

＋1:4

＋＋3＋3＋2＋＋

＋＋1:8

＋＋

3＋2＋＋＋1:162＋3＋＋＋1:32＋2＋2＋＋1:64＋2＋注：表中紅色者表示出現(xiàn)沉淀最快，二者最適比例始終是1:4。抗原抗體反應(yīng)的最適比例（四）階段性第一階段：特異性結(jié)合階段，反應(yīng)快，不可見。第二階段：反應(yīng)可見階段，反應(yīng)慢，出現(xiàn)凝集、沉淀和細(xì)胞溶解等現(xiàn)象。1.抗原：理化性狀、表位種類和數(shù)目。2.抗體：來(lái)源、特異性、親和性、效價(jià)。（一）反應(yīng)物自身因素三、抗原抗體反應(yīng)的影響因素二、環(huán)境因素1.電解質(zhì)：生理鹽水或緩沖液。2.酸堿度：pH6～pH9。3.溫度：15℃～40℃，37℃最適。四、抗原抗體反應(yīng)的類型反應(yīng)類型實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)方法敏感度凝集反應(yīng)直接凝集試驗(yàn)用肉眼、放大鏡或顯微鏡觀察紅細(xì)胞或膠乳等顆粒的凝集現(xiàn)象1+間接凝集試驗(yàn)2+凝集抑制試驗(yàn)3+協(xié)同凝集試驗(yàn)3+自身紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)3+抗人球蛋白試驗(yàn)3+沉淀反應(yīng)液相沉淀試驗(yàn)觀察沉淀、檢測(cè)濁度1+、2+瓊脂凝膠擴(kuò)散觀察掃描沉淀線或沉淀環(huán)+凝膠電泳技術(shù)觀察掃描沉淀峰、沉淀弧2+反應(yīng)類型實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)方法敏感度補(bǔ)體參與的反應(yīng)補(bǔ)體溶血試驗(yàn)以肉眼或光電比色儀觀察測(cè)定溶血現(xiàn)象2+補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)3+中和反應(yīng)病毒中和試驗(yàn)病毒感染性喪失1+毒素中和試驗(yàn)外毒素毒性喪失2+免疫標(biāo)記放射免疫技術(shù)檢測(cè)放射性強(qiáng)度4+酶標(biāo)免疫技術(shù)檢測(cè)酶底物顯色4+熒光免疫技術(shù)檢測(cè)熒光現(xiàn)象4+化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)測(cè)定發(fā)光強(qiáng)度4+金標(biāo)免疫技術(shù)檢測(cè)金顆粒沉淀4+（一）凝集反應(yīng)

凝集反應(yīng)是指細(xì)菌和紅細(xì)胞等顆粒性抗原，或表面覆蓋抗原的顆粒狀物質(zhì)（如紅細(xì)胞等），與相應(yīng)抗體結(jié)合后，在適當(dāng)電解質(zhì)存在的條件下出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。分為直接凝集反應(yīng)和間接凝集反應(yīng)?？梢姺磻?yīng)形成1.直接凝集反應(yīng)：在適當(dāng)電解質(zhì)參與下，細(xì)菌和紅細(xì)胞等顆?？乖苯优c相應(yīng)抗體反應(yīng)，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。2.間接凝集反應(yīng)：可溶性抗原（或抗體）吸附或偶聯(lián)在顆粒上，使之成為致敏顆粒，再與相應(yīng)抗體（或抗原）作用，在適宜電解質(zhì)存在的條件下，出現(xiàn)特異性凝集現(xiàn)象。YYY+

1.直接凝集反應(yīng)方法評(píng)價(jià)：簡(jiǎn)便和快速、敏感度低，用于定性試驗(yàn)。臨床應(yīng)用：菌種鑒定、血清學(xué)分型、血型鑒定及抗體效價(jià)測(cè)定。用抗原致敏載體--檢測(cè)抗體。（1）間接凝集試驗(yàn)載體顆?？乖乖旅纛w粒凝集抗體2.間接凝集反應(yīng)（1）間接凝集試驗(yàn)用抗體致敏載體---檢測(cè)抗原。抗原抗體載體顆粒凝集（2）間接凝集抑制試驗(yàn)用抗原致敏載體--檢測(cè)抗原?？乖荒贵w無(wú)抗原抗體抗原致敏顆?？乖旅纛w粒3.特殊的凝集試驗(yàn)（間接血凝試驗(yàn)）++紅細(xì)胞抗原抗原致敏紅細(xì)胞抗體紅細(xì)胞凝集1/21/41/81/161/321/641/1281/2561/5121/1024Pos.Neg.效價(jià)648512<232128324病人12345678反向間接血凝試驗(yàn)?zāi)z乳凝集試驗(yàn)

間接凝集反應(yīng)方法評(píng)價(jià)：快速、敏感、操作簡(jiǎn)便。臨床應(yīng)用：（1）檢測(cè)抗原，如HBsAg可溶性抗原、甲胎蛋白等；（2）檢測(cè)抗體，如抗-HIV抗體、抗溶血素“O”抗體等，類風(fēng)濕因子、抗DNA抗體等自身免疫性疾病的抗體和青霉素抗體等變態(tài)反應(yīng)的抗體。（二）沉淀反應(yīng)可溶性抗原與相應(yīng)抗體發(fā)生特異性結(jié)合，在適當(dāng)條件下而出現(xiàn)的沉淀現(xiàn)象。多克隆抗體可與抗原表面多個(gè)不同的表位結(jié)合，容易與多個(gè)抗原交聯(lián)成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)而發(fā)生沉淀，而單克隆抗體只與抗原表面的一種表位結(jié)合，不易形成交聯(lián)，故不適用于免疫沉淀試驗(yàn)。沉淀反應(yīng)分類1.液體內(nèi)沉淀試驗(yàn)：環(huán)狀沉淀試驗(yàn)、絮狀沉淀試驗(yàn)、免疫濁度沉淀。2.凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)：?jiǎn)蜗颦傊瑪U(kuò)散試驗(yàn)、雙向擴(kuò)散試驗(yàn)。3.凝膠免疫電泳技術(shù)：對(duì)流免疫電泳、免疫電泳、火箭免疫電泳、免疫固定電泳。1.液體內(nèi)沉淀試驗(yàn)

（1）環(huán)狀沉淀試驗(yàn)：抗原溶液疊加在細(xì)玻璃管內(nèi)的抗體液面上，二者在兩液面交界處形成白色沉淀環(huán)。

（2）絮狀沉淀試驗(yàn)：可溶性抗原、抗體在液相中特異性結(jié)合，形成絮狀沉淀物。

（3）免疫濁度沉淀：透射、散射和免疫膠乳比濁法，應(yīng)用于自動(dòng)化。2.凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)

指可溶性抗原、抗體在含有電解質(zhì)的凝膠內(nèi)自由擴(kuò)散形成濃度梯度，二者在比例合適的位置形成肉眼可見的沉淀線或沉淀環(huán)。根據(jù)抗原與抗體反應(yīng)的方式和特性，可分為單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)和雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)。（1）單向擴(kuò)散試驗(yàn)（平板法）抗體與待測(cè)的抗原,在兩者比例合適的部位結(jié)合形成沉淀環(huán)。環(huán)的大小與抗原的濃度成正相關(guān)。

本法穩(wěn)定、簡(jiǎn)便、無(wú)需儀器設(shè)備。重復(fù)性和線性均可信，但靈敏度稍差、耗時(shí)長(zhǎng)、影響因素多。將抗原抗體分別加在瓊脂糖不同的對(duì)應(yīng)孔中，兩者在凝膠中自由擴(kuò)散，在比例合適處形成白色沉淀線。沉淀線的位置、形狀以及對(duì)比關(guān)系，可進(jìn)行定性分析，如抗原或抗體的存在與否、相對(duì)含量估計(jì)、相對(duì)分子量分析和性質(zhì)分析。

本法操作簡(jiǎn)單、特異性高、結(jié)果可靠、成本低廉，但靈敏度低，耗時(shí)長(zhǎng)，不能精確定量。

（2）

雙向擴(kuò)散試驗(yàn)（平板法）（1）抗原或抗體的存在與否以及相對(duì)含量的估計(jì)。（2）抗原或抗體相對(duì)分子量的估計(jì)。A：Ag、Ab濃度及擴(kuò)散率近似；B：Ag、Ab濃度近似，擴(kuò)散率Ag＞Ab；C：Ag、Ab濃度近似，擴(kuò)散率Ag＜Ab；D：擴(kuò)散率近似，濃度Ag＞Ab；E：濃度Ag＞Ab，擴(kuò)散率Ag＞Ab；F：濃度Ag＜Ab，擴(kuò)散率Ag＜Ab（4）抗體效價(jià)的滴定（3）抗原性質(zhì)的分析（5）抗原或抗體純度的鑒定抗原完全相同抗原不相同抗原部分相同3.凝膠免疫電泳技術(shù)

電泳分析與沉淀反應(yīng)的結(jié)合產(chǎn)物，即可溶性抗原和抗體在直流電場(chǎng)的作用下，在凝膠內(nèi)加速定向泳動(dòng)，彼此相遇而特異性結(jié)合，在比例合適處形成可見的沉淀物。該技術(shù)提高了沉淀反應(yīng)的速度和敏感度，廣泛用于臨床實(shí)驗(yàn)診斷和科學(xué)研究。無(wú)沉淀線出現(xiàn)表明無(wú)相應(yīng)的抗原。沉淀線位于抗原抗體孔中間，說(shuō)明兩者比例較適合。沉淀線偏向抗原孔一方，表示抗體濃度＞抗原，反之，則是抗體濃度＜抗原濃度。（1）對(duì)流免疫電泳（2）免疫電泳單向免疫擴(kuò)散和電泳的定量檢測(cè)技術(shù)。固定抗體不移動(dòng)，抗原向正極泳動(dòng)，隨著抗原量減少，基底區(qū)越來(lái)越窄，形成的沉淀線逐漸變窄，形成一個(gè)如火箭的沉淀峰，峰的高度與抗原量呈正相關(guān)。（3）火箭免疫電泳火箭免疫電泳圖①②③④為標(biāo)準(zhǔn)抗原；⑤⑥為標(biāo)本-+

左圖為IgGκ型,

中圖為IgGλ型，右為正常

SPGAMκ

λSPGAMκ

λSPGAMκ