保健食品用原料阿膠

保健食品用原料阿膠1范圍本文件適用于保健食品用原料阿膠。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。下列文件中所包含的部分條款通過相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的部分內(nèi)容。凡是注明日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改版本）適用于本文件。GB2761食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中真菌毒素限量GB2762食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中污染物限量GB2763食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量GB5009.11食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中總砷及無機(jī)砷的測定GB5009.12食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中鉛的測定GB5009.15食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中鎘的測定GB5009.17食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中總汞及有機(jī)汞的測定GB16740食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)保健食品《中華人民共和國藥典》一部《中華人民共和國藥典》四部3技術(shù)要求3.1來源阿膠為馬科動(dòng)物驢EquusasinusL.的干燥皮或鮮皮經(jīng)煎煮、濃縮制成的固體膠。3.2感官要求應(yīng)符合表1的規(guī)定。表1感官要求項(xiàng)目要求檢驗(yàn)方法色澤棕色至黑褐色在日光下觀察顏色；如斷面不易觀察，可削平后觀察滋味、氣味氣微，味微甘滋味可取少量直接口嘗，或加熱水浸泡后嘗浸出液；氣味可直接嗅聞，或在折斷、破碎或搓揉時(shí)進(jìn)行形態(tài)本品呈長方形塊、方形塊或丁狀。有光澤。質(zhì)硬而脆，斷面光亮，碎片對(duì)光照視呈棕色半透明狀在日光下觀察；長度、寬度及厚度測量時(shí)應(yīng)用毫米刻度尺；質(zhì)地是指用手折斷時(shí)的感官感覺3.3高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用鑒別應(yīng)符合表2的規(guī)定。表2高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用鑒別項(xiàng)目要求檢驗(yàn)方法高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC-MS）鑒別以質(zhì)荷比（m/z）539.8（雙電荷）→612.4和m/z539.8（雙電荷）→923.8離子對(duì)提取的供試品離子流色譜中，應(yīng)同時(shí)呈現(xiàn)與阿膠對(duì)照藥材色譜保留時(shí)間一致的色譜峰附錄A3.4理化指標(biāo)應(yīng)符合表3的規(guī)定。表3理化指標(biāo)項(xiàng)目指標(biāo)檢驗(yàn)方法水分，%≤15.0《中華人民共和國藥典》2020年版四部通則0832第二法鉛（以Pb計(jì)），mg/kg≤5.0GB5009.12總砷（以As計(jì)），mg/kg≤1.0GB5009.11總汞（以Hg計(jì)），mg/kg≤0.3GB5009.17鎘（以Cd計(jì)），（mg/kg）≤0.3GB5009.15注：其他未列污染物限量應(yīng)符合GB2762相應(yīng)類別（名稱）的規(guī)定或有關(guān)規(guī)定；未列農(nóng)藥最大殘留限量應(yīng)符合GB2763相應(yīng)類別/名稱的規(guī)定或國家有關(guān)規(guī)定。3.5標(biāo)志性成分指標(biāo)應(yīng)符合表4的規(guī)定。表4標(biāo)志性成分指標(biāo)項(xiàng)目指標(biāo)檢驗(yàn)方法特征多肽（以干燥品計(jì)），%≥0.15附錄B3.5真菌毒素限量真菌毒素限量應(yīng)符合GB2761中相應(yīng)食品類別（名稱）的規(guī)定或有關(guān)規(guī)定。4其他保健食品所用原料為本品的炮制加工品，其炮制加工前的原料應(yīng)符合本標(biāo)準(zhǔn)。炮制方法為凈制、切制的，除另有規(guī)定外，炮制加工品應(yīng)符合本標(biāo)準(zhǔn)。炮制方法為其他炮制工藝的，炮制加工品應(yīng)符合相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。

附錄A（規(guī)范性附錄）高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用鑒別檢驗(yàn)方法A.1一般規(guī)定本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑在沒有注明其他要求時(shí)，均指分析純試劑和GB/T6682規(guī)定的三級(jí)水。實(shí)驗(yàn)中所用的溶液在未注明用何種溶劑配制時(shí)，均指水溶液。A.2方法提要本品經(jīng)1%碳酸氫銨溶液超聲提取、胰蛋白酶水解后，采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用鑒別法測定，以阿膠對(duì)照藥材為對(duì)照對(duì)樣品進(jìn)行鑒別分析。A.3儀器A.3.1分析天平：感量為0.01mg和0.0001g。A.3.2超聲波清洗儀。A.3.3高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：配有三重四級(jí)桿質(zhì)譜檢測器，電噴霧離子化（ESI）正離子模式下多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。A.4試劑和耗材A.4.1碳酸氫銨。A.4.2胰蛋白酶。A.4.30.45μm微孔濾膜（有機(jī)相）。A.4.4對(duì)照藥材阿膠對(duì)照藥材。A.5色譜和質(zhì)譜條件色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相：A相：乙腈；B相：含0.1%甲酸水溶液。梯度洗脫，梯度程序見表A.1；表A.1梯度條件時(shí)間/minA相/%B相/%0595252080405050檢測模式：采用三重四極桿質(zhì)譜檢測器，電噴霧離子化（ESI）正離子模式下多反應(yīng)監(jiān)測（MRM），選擇質(zhì)荷比（m/z)）539.8（雙電荷）→612.4和m/z539.8（雙電荷）→923.8作為檢測離子；對(duì)進(jìn)樣量：5μL；信噪比：取阿膠對(duì)照藥材溶液，進(jìn)樣5μL，按上述檢測離子對(duì)測定的MRM色譜峰的信噪比均應(yīng)大于3：1。流速：0.3mL/min。A.6操作方法A.6.1對(duì)照藥材溶液的制備：取阿膠對(duì)照藥材0.1g，加1%碳酸氫銨溶液50mL，超聲處理30分鐘，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液100μL，置微量進(jìn)樣瓶中，加胰蛋白酶溶液10μL（取序列分析用胰蛋白酶，加1%碳酸氫銨溶液制成每1mL中含1mg的溶液，臨用時(shí)配制），搖勻，37°C恒溫酶解12小時(shí)，備用。A.6.2供試品溶液的制備：取本品粉末0.1g，加1%碳酸氫銨溶液50mL，超聲處理30分鐘，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液100μL，置微量進(jìn)樣瓶中，加胰蛋白酶溶液10μL（取序列分析用胰蛋白酶，加1%碳酸氫銨溶液制成每1mL中含1mg的溶液，臨用時(shí)配制），搖勻，37°C恒溫酶解12小時(shí)，備用。A.6.3鑒別分析方法：照高效液相色譜-質(zhì)譜法（《中華人民共和國藥典》2020年版第四部0512和0431）試驗(yàn)，吸取供試品溶液5μL，注入高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，測定。

附錄B（規(guī)范性附錄）標(biāo)志性成分特征多肽檢驗(yàn)方法B.1一般規(guī)定本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑和水，在沒有注明其他要求時(shí)，均指分析純試劑和GB/T6682規(guī)定的三級(jí)水。實(shí)驗(yàn)中所用的溶液在未注明用何種溶劑配制時(shí)，均指水溶液。B.2方法提要本品經(jīng)1%碳酸氫銨溶液超聲提取、胰蛋白酶水解后，采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法驢源多肽A1和驢源多肽A2的總量。特征多肽含量以驢源多肽A1（C41H68N12O13）和驢源多肽A2（C51H82N18C18）的總量計(jì)。B.3儀器B.3.1分析天平：感量為0.01mg和0.0001g。B.3.2高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：配有三重四級(jí)桿質(zhì)譜檢測器，電噴霧離子化（ESI）正離子模式下多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。B.4試劑和耗材B.4.1水。B.4.2碳酸氫銨。B.4.3胰蛋白酶。B.4.4乙腈：色譜純。B.4.5甲酸。B.4.6水。B.4.70.45μm微孔濾膜（有機(jī)相）。B.4.8對(duì)照品驢源多肽A1對(duì)照品、驢源多肽A2對(duì)照品英文名稱、CAS號(hào)、分子式和相對(duì)分子量見表B.1。表B.1化學(xué)對(duì)照品（標(biāo)準(zhǔn)品）信息中文名稱英文名稱CAS號(hào)分子式相對(duì)分子量驢源多肽A1PeptideA1（1052-1062）asinm/C41H68N12O13937.05驢源多肽A2PeptideA2（692-706）asinm/C51H82N18C181235.31B.5色譜條件及系統(tǒng)適用性B.5.1色譜條件色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相：A相：乙腈；B相：含0.1%甲酸水溶液。梯度洗脫，梯度程序見表B.2；表B.2梯度條件時(shí)間/minA相/%B相/%0595252080405050檢測模式：采用三重四極桿質(zhì)譜檢測器，電噴霧離子化（ESI）正離子模式下多反應(yīng)監(jiān)測（MRM），監(jiān)測離子對(duì)見表B.3；表B.3監(jiān)測離子對(duì)測定成分定量離子對(duì)m/z定性離子對(duì)m/z驢源多肽A1469.25（雙電荷）→712.30469.25（雙電荷）→783.40驢源多肽A2618.35（雙電荷）→779.40618.35（雙電荷）→850.40進(jìn)樣量：5μL；流速：0.3mL/min。B.5.2系統(tǒng)適用性理論板數(shù)按驢源多肽A1峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。B.6操作方法B.6.1對(duì)照品溶液的制備取驢源多肽A1對(duì)照品、驢源多肽A2對(duì)照品適量，精密稱定，加1%碳酸氫銨溶液分別制成每lmL含2.5μg的混合溶液，即得。B.6.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液1mL、2mL、5mL、10mL、20mL和25mL，分別置50mL量瓶中，加1%碳酸氫銨溶液稀釋至刻度，制成標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。分別精密吸取不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液與供試品溶液各5μL，注入高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，以對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。B.6.3供試品溶液的制備取供試品粉碎，取粉末0.1g，精密稱定，置50mL量瓶中，加1%碳酸氫銨溶液40mL，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）30分鐘，加1%碳酸氫銨溶液稀釋至刻度，搖勻。精密量取1mL至5mL量瓶中，加胰蛋白酶溶液（取序列分析級(jí)胰蛋白酶，加1%碳酸氫銨溶液制成每1mL中含1mg的溶液，臨用前新制）1mL，加1%碳酸氫銨溶液稀釋至刻度，搖勻，37℃恒溫酶解12小時(shí)，經(jīng)0.45μm濾膜（B.4.7）濾過，取續(xù)濾液，即得。B.6.4供試品溶液的測定從標(biāo)準(zhǔn)曲線讀出供試品溶液中相當(dāng)于驢源多肽A1和驢源多肽A2的量，計(jì)算即得。B.7測定結(jié)果的計(jì)算阿膠中特征多肽含量以驢源多肽A1（C41H68N12O13）和驢源多肽A2（C51H82N18C18）的總量計(jì)，數(shù)值以%表示，按公式（B.1）和（B.2）計(jì)算：：Wi=mW=Wi…………（式中：Wi：供