大腸桿菌和沙門氏菌的分離鑒定

青島農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)微生物學(xué)課程論文題目：大腸桿菌和沙門氏菌的分離鑒定姓名：學(xué)院：動物科技學(xué)院班級：馬業(yè)科學(xué)1201班學(xué)號：2012任課教師：溫建新二0一四年四月一日材料1.1菌種大腸桿菌、沙門氏菌、大腸桿菌與沙門氏菌的混合菌液1.2培養(yǎng)基普通培養(yǎng)基:肉湯、普通瓊脂、半固體培養(yǎng)基。鑒別培養(yǎng)基：SS瓊脂、麥康凱瓊脂、三糖鐵瓊脂。生化鑒別基：糖發(fā)酵管、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、尿素瓊脂、醋酸鉛瓊脂。1.3生化試劑MR試劑、VP試劑、吲哚試劑、乙醚、硝酸鹽還原試劑等。1.4沙門氏菌診斷血清A~E群多價(jià)O血清及單因子血清。1.5器材革蘭氏染液、顯微鏡、吸管等。2方法2.1增菌培養(yǎng)用無菌刻度吸管吸取大腸桿菌與沙門氏菌的混合菌液2ml，分別加入已有亞砷酸鹽量綠增菌液100ml的試管和四磺酸鈉增菌液10ml的試管個(gè)1ml.接種后輕輕混勻，置37攝氏度溫箱內(nèi)培養(yǎng)18-24h。2.2直接分離培養(yǎng)2.3形態(tài)觀察以無菌接種環(huán)分別挑取麥康凱瓊脂平板或SS瓊脂平板上新鮮培養(yǎng)的大腸桿菌和沙門氏菌單個(gè)菌落，在在載玻片上制成涂片，待自然干燥后，以火焰固定，進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢。觀察兩種細(xì)菌的形態(tài)，大小與排列方式并做比較。這兩種都是革蘭氏陰性、兩端鈍圓的球桿菌，菌體大多單個(gè)存在，大小差異不顯著。2.4培養(yǎng)特性觀察將大腸桿菌和沙門氏菌的純培養(yǎng)物分別接種肉湯、普通瓊脂、三糖鐵瓊脂、SS瓊脂和麥康凱瓊脂。三糖鐵瓊脂接種時(shí)，先涂布斜面，后穿刺底層。置37攝氏度溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h后，取出觀察兩種細(xì)菌的培養(yǎng)特性并比較。2.5生化試驗(yàn)生化實(shí)驗(yàn)前，須對菌種進(jìn)行純度檢查，以保證不被污染雜菌。檢查方法同一般培養(yǎng)物的制片、染色、鏡檢。鏡檢時(shí)要適當(dāng)多看幾個(gè)視野，每個(gè)視野中細(xì)菌形態(tài)也染色特性菌須符合該種菌種的特性。凡污染雜菌者，此菌種不可用。2.5.1糖發(fā)酵管接種每種菌純培養(yǎng)物分別接種葡萄糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖、甘露醇、衛(wèi)矛醇微量生化反應(yīng)管，每種唐一管，穿刺接種。后置于37℃溫箱培養(yǎng)2-3d。2.5.2蛋白胨水接種每種菌純培養(yǎng)物接種一管，培養(yǎng)后作吲哚實(shí)驗(yàn)。后置于37℃溫箱培養(yǎng)2-3d。2.5.3葡萄糖蛋白胨水接種每種菌純培養(yǎng)物接種兩管，培養(yǎng)后一管作MR實(shí)驗(yàn)，另一管作VP實(shí)驗(yàn)。后置于37℃溫箱培養(yǎng)2-3d。2.5.4尿素瓊脂接種每種菌純培養(yǎng)物接種一管，接種量要大。后置于37℃溫箱培養(yǎng)數(shù)小時(shí)。2.5.5枸櫞酸鹽瓊脂接種每種菌純培養(yǎng)物接種一管，接種量要少。后置于37℃溫箱培養(yǎng)2-3d。2.6生化特性的觀察2.6.1糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)取經(jīng)2-3d培養(yǎng)后的兩種細(xì)菌的糖發(fā)酵管一一觀察，凡培養(yǎng)基變?yōu)辄S色的，表示該菌發(fā)酵此糖產(chǎn)酸氣；凡凡培養(yǎng)基不變色的，表示該菌不發(fā)酵此糖。2.6.2MR實(shí)驗(yàn)取一支經(jīng)2-3d培養(yǎng)后的葡萄糖蛋白胨水的糖發(fā)酵管，加入MR試劑數(shù)滴，凡液體呈紅色者為陽性反應(yīng)，呈黃色者為陰性反應(yīng)，橙黃色者為可疑反應(yīng)。2.6.3VP實(shí)驗(yàn)取另一支葡萄糖蛋白胨水的糖發(fā)酵管，加入VP試劑3ml，再加入VP試劑乙液1ml，充分搖勻后靜置與試管架上，在數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色者為陽性反應(yīng)，不出現(xiàn)紅色者應(yīng)放在37℃繼續(xù)觀察1-2h，仍然不變色者判為陰性。2.6.4吲哚實(shí)驗(yàn)去蛋白胨水培養(yǎng)管先加乙醚少量，塞緊棉塞搖振試管，是一米與培養(yǎng)基充分混勻，靜置片刻，待乙醚浮于液面上層時(shí)，沿管壁加入吲哚試劑2-3滴。凡在乙醚層內(nèi)出現(xiàn)玫瑰紅色者為陽性反應(yīng)，不變色者位陰性反應(yīng)。2.6.5枸櫞酸鹽利用實(shí)驗(yàn)觀察經(jīng)2-3d培養(yǎng)的枸櫞酸鹽瓊脂管是否有細(xì)菌生長，并觀察其顏色變化。凡有細(xì)菌生長，培養(yǎng)基變?yōu)樘焖{(lán)色為該菌利用枸櫞酸鹽，否則為陰性反應(yīng)。2.6.6硫化氫實(shí)驗(yàn)觀察經(jīng)2-3d培養(yǎng)的醋酸鉛瓊脂管，凡沿穿刺線或其周圍出現(xiàn)黑色沉淀者，為硫化氫反應(yīng)陽性，無黑色者為反應(yīng)陰性。2.7藥物敏感試驗(yàn)-擴(kuò)散法曲松納、紅霉素、硫酸鏈霉素、磷霉素、多面環(huán)素對大腸桿菌或沙門氏菌生長的影響。3結(jié)果觀察3.1大腸桿菌和沙門氏菌在三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基上的生長狀況大腸桿菌反應(yīng)模式表示：沙門氏菌反應(yīng)模式表示：3.2細(xì)菌的染色、鏡檢3.3生化管的接種培養(yǎng)接種培養(yǎng)前：接種培養(yǎng)后：實(shí)圖：3.4吲哚、MR、V-P實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果;3.5藥物敏感試驗(yàn)4結(jié)論大腸桿菌和沙門氏菌生化反應(yīng)結(jié)果綜合匯表菌三糖鐵糖發(fā)酵甲基紅VP吲哚硫化氫尿素酶枸櫞酸鹽利用運(yùn)動力種斜面底層硫化氫葡萄糖乳糖甘露醇蔗糖衛(wèi)矛醇AAA-⊕⊕/-⊕v++-+-+-+BKA+/-⊕-⊕+-+/--++/-注：⊕

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