【課件】微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)+課件高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修3

微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)本節(jié)聚焦：1.什么是培養(yǎng)基？如何配置？2.什么是無菌技術(shù)？

無細(xì)胞結(jié)構(gòu)原核細(xì)胞真核細(xì)胞微生物真菌:酵母菌、毛霉等；原生生物:草履蟲、變形蟲等微生物：難以用肉眼觀察的微小生物的統(tǒng)稱。病毒:SARS、新冠病毒、HIV、等RAN病毒；噬菌體等DNA病毒細(xì)菌:藍(lán)細(xì)菌、大腸桿菌、乳酸菌等；放線菌：鏈霉菌等研究和應(yīng)用微生物的前提?實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物條件?一、培養(yǎng)基的配制閱讀教材9頁-10頁相關(guān)內(nèi)容，回答以下問題：1.培養(yǎng)基的概念？培養(yǎng)基的種類？培養(yǎng)基的作用？2.培養(yǎng)基的成分？各成分的作用？3.培養(yǎng)基能直接培養(yǎng)病毒嗎？1.概念2.類型及用途液體培養(yǎng)基：表面生長（需氧型）均勻混濁生長（兼性厭養(yǎng)型）沉淀生長（厭養(yǎng)型）半固體培養(yǎng)基：(是否運(yùn)動(dòng))

無動(dòng)力有動(dòng)力(彌散)固體培養(yǎng)基：菌落幾種菌落及其形態(tài)劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用途物理性質(zhì)化學(xué)成分天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基用途鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基的種類不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂工業(yè)生產(chǎn)，擴(kuò)大培養(yǎng)觀察微生物的運(yùn)動(dòng)微生物分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)、保存菌種含化學(xué)成分不明確天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)培養(yǎng)基成分明確分類、鑒定在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長,促進(jìn)所需要的微生物的生長富集、分離出特定微生物在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品,用以鑒別不同種類的微生物鑒別不同種類微生物選擇培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基3.培養(yǎng)基的成分（1）基本成分：碳源、氮源、水、無機(jī)鹽①碳源：無機(jī)碳源：CO2、NaHCO3有機(jī)碳源：葡萄糖、蛋白質(zhì)、牛肉膏等②氮源：無機(jī)氮源：NH3、N2、銨鹽等有機(jī)氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等作用：①構(gòu)成生物體細(xì)胞的物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物

②有些是異養(yǎng)生物的能源物質(zhì)作用：合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮代謝產(chǎn)物等物質(zhì)所必需的組分含量提供的主要營養(yǎng)牛肉膏5g碳源、氮源、磷酸鹽和維生素等蛋白胨10g碳源、氮源和維生素等NaCl5g無機(jī)鹽H2O定容至1000mL水表1-11000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成（2）在主要營養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長的條件有哪些？例子？二、無菌技術(shù)閱讀教材10頁-11頁相關(guān)內(nèi)容，回答以下問題：1.獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是什么？2.消毒和滅菌的概念？它們的區(qū)別？3.常用的消毒和滅菌方法有哪些？4.各種方法適用的對(duì)象？1.獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是______________。防止雜菌污染2.無菌技術(shù)主要包括

。消毒和滅菌①消毒：是指使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物。②滅菌：是指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。3.具體操作：①實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒②培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌③實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸

④為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在超凈工作臺(tái)并在酒精燈火焰附近進(jìn)行。3.消毒和滅菌的概念①消毒：是指使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物。②滅菌：是指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。②巴氏消毒法：62-65℃下煮30min或80-90℃下煮30s-1min。

③化學(xué)藥劑消毒法：用70%酒精擦拭雙手；氯氣消毒水源。

④紫外線消毒法：用紫外燈照射接種室、接種箱、超凈工作臺(tái)。4.常用的消毒方法實(shí)例：牛奶

優(yōu)點(diǎn)？①濕熱滅菌：

利用沸水、流通蒸汽或高壓蒸汽進(jìn)行滅菌。高壓蒸汽滅菌效果最好，100kPa、121℃下維持15-30min，常用于培養(yǎng)基、無菌水等的滅菌。②干熱滅菌：

160-170℃下加熱2-3h。常用于玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿等）和金屬器具（耐高溫的和需要保持干燥的物品）。③灼燒滅菌：

常用于接種工具，如涂布器、接種環(huán)、接種針或其它金屬用具，試管口、瓶口等的滅菌。直接在酒精燈火焰的充分燃燒層（外焰）灼燒。5.常用的滅菌方法思考：無菌技術(shù)除用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么作用？避免操作者被微生物感染三、微生物的純培養(yǎng)閱讀教材11頁-13頁相關(guān)內(nèi)容，回答以下問題：1.培養(yǎng)物、純培養(yǎng)物、純培養(yǎng)的概念？2.菌落、單菌落的概念？獲得單菌落的方法？3.酵母菌純培養(yǎng)的方法步驟？4.倒平板的步驟和注意事項(xiàng)？5.平板劃線法的步驟和注意事項(xiàng)？1.培養(yǎng)物、純培養(yǎng)物、純培養(yǎng)的概念2.菌落、單菌落的概念3.獲得單菌落的方法平板劃線法和稀釋涂布平板法微生物群分散或稀釋單個(gè)細(xì)胞單個(gè)菌落繁殖4.酵母菌純培養(yǎng)的方法步驟（1）制備培養(yǎng)基①配制培養(yǎng)基②滅菌培養(yǎng)基？培養(yǎng)皿？③倒平板待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時(shí)，在酒精燈火焰附近倒平板。1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？2.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.怎么確定所倒平板未被雜菌污染？

將所倒平板放入37℃的恒溫箱中培養(yǎng)，觀察是否有菌落形成，以確定是否被污染或滅菌是否徹底。（2）接種和分離酵母菌連續(xù)劃線法分區(qū)劃線法平板劃線法的具體操作：1.將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)的金屬絲燒紅。2.在火焰旁冷卻接種環(huán)。同時(shí)，拔出裝有酵母菌培養(yǎng)液的試管的棉塞

3.試管口通過火焰

4.在火焰附近用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌液

5.試管口通過火焰，并塞上棉塞

6.在火焰附近將皿蓋打開一條縫隙，用接種環(huán)在培養(yǎng)基表面迅速劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。7.灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一次劃線的末端開始作第二次劃線。重復(fù)以上操作，作第三、四、五次劃線。注意不要將最后一次的劃線與第一次劃線相連。12345第1區(qū)劃線接種環(huán)滅菌第2區(qū)劃線接種環(huán)滅菌第3區(qū)劃線接種環(huán)滅菌接種環(huán)滅菌蘸取菌液冷卻冷卻冷卻平板劃線法注意事項(xiàng):①接種環(huán)只蘸一次菌液,但要在培養(yǎng)基不同位置連續(xù)劃線多次②劃線首尾不能相接③每次劃線前接種環(huán)進(jìn)行滅菌④劃線后,培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)接種環(huán)灼燒次數(shù)

=區(qū)域數(shù)+1（3）培養(yǎng)酵母菌完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板和一個(gè)未接種的平板倒置，放入28℃左右（培養(yǎng)溫度因酵母菌種類的不同而稍有差異）的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48h.1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí),仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？思考·討論項(xiàng)目目的蘸取菌液前灼燒每次劃線前灼燒劃線操作結(jié)束后灼燒避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染菌種殺死上一次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)接種環(huán)上的菌種直接來源于上一次劃線的末端及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免菌種污染環(huán)境和感染操作者2.在第二次劃線以及以后的操作時(shí)，為什么要從上一次劃線的末端開始劃線？3.為什么最后一次的劃線不能與第一次的劃線相連？思考·討論

使細(xì)菌的數(shù)目隨劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終分離得到單菌落。最后一次劃線已經(jīng)將細(xì)菌稀釋成單個(gè)的細(xì)胞，如果與第一次劃線相連，則增加了細(xì)菌的數(shù)目，得不到純化的效果。1.培養(yǎng)基的概念、種類、作用及營養(yǎng)成分2.獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵？消毒和滅菌的概念、方法及作用對(duì)象。3.培養(yǎng)物、純培養(yǎng)物、菌落和單菌落的概