DB3301T 1062-2018鐵皮石斛組織培養(yǎng)育苗技術規(guī)程

DB3301杭州市質量技術監(jiān)督局發(fā)布I本標準依據(jù)GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標準由杭州市農業(yè)局提出并歸口。請注意本文件的某些內容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機構不承擔識別這些專利的責任。本標準起草單位：浙江傳化生物技術有限公司。本標準主要起草人：米曉潔、張明奎、榮松、俞永奇。1DB3301/T1062—2018鐵皮石斛組織培養(yǎng)育苗技術規(guī)程本標準規(guī)定了鐵皮石斛制種、組培育苗、煉苗與移栽的要求及模式圖。本標準適用于杭州市鐵皮石斛組織培養(yǎng)育苗生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T3543（所有部分）農作物種子檢驗規(guī)程GB4285農藥安全使用標準DB33/T635—2015鐵皮石斛生產(chǎn)技術規(guī)程3術語和定義DB33/T635—2015界定的術語和定義適用于本標準。4制種4.1品種選擇根據(jù)生產(chǎn)實際，選擇優(yōu)質高產(chǎn)并經(jīng)過鑒定確認，符合GB/T3543（所有部分）要求的品種。4.2授粉4月～6月，進行人工授粉，授粉后掛牌標記，采用物理隔絕。4.3采收9月～10月，當蒴果開始轉黃時，選擇飽滿的果實采收備用。5組培育苗5.1蒴果消毒蒴果經(jīng)過后熟，除去表面的雜物，在超凈工作臺上用75%的酒精浸泡30秒，無菌水清洗干凈，再放入0.5%的次氯酸鈉溶液中浸泡10分鐘～15分鐘后，用無菌水沖洗3次～5次。5.2種子保存2DB3301/T1062—2018在超凈工作臺上無菌手術刀、鑷子將滅菌好的蒴果剖開，將種子密封貯藏于5毫升～10毫升無菌玻璃瓶中，每瓶保存1個蒴果的種子。將裝好種子的玻璃瓶置于3℃~5℃的冰箱中保存。保存4個月～6個月。5.3萌發(fā)培養(yǎng)5.3.1播種用75%酒精擦拭裝有種子的玻璃瓶表面，置于超凈工作臺上，用無菌鑷子均勻撒播于萌發(fā)培養(yǎng)基中。萌發(fā)培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基為MS，激素和添加物配方見附錄A。5.3.2培養(yǎng)條件前期暗培養(yǎng)15天后，光照強度12.5μmol·m-2·s-1～37.5μmol·m-2·s-1培養(yǎng)，光照時間8小時/天～12小時/天，培養(yǎng)溫度為25℃±2℃。5.4分化培養(yǎng)5.4.1轉接培養(yǎng)培養(yǎng)60天～75天后，將原球莖均勻地轉接到分化培養(yǎng)基上，分化培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基為MS，激素和添加物配方見附錄A。5.4.2培養(yǎng)條件光照強度12.5μmol·m-2·s-1～37.5μmol·m-2·s-1，光照時間8小時/天～12小時/天，培養(yǎng)溫度為25℃±2℃。5.5壯苗與生根培養(yǎng)5.5.1轉接培養(yǎng)培養(yǎng)60天～70天后，轉接到壯苗與生根培養(yǎng)基上。壯苗與生根培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基為MS，激素和添加物配方見附錄A。5.5.2培養(yǎng)條件光照強度12.5μmol·m-2·s-1～37.5μmol·m-2·s-1，光照時間8小時/天～12小時/天，培養(yǎng)溫度為25℃±2℃。組培苗達到DB33/T635—2015中合格苗標準時，即可煉苗。6煉苗與移栽6.1煉苗組培苗移栽前放置于栽培環(huán)境相近的設施大棚中，遮光率80%～85%，溫度25℃~28℃,自然光閉瓶煉苗3周～4周，定期用殺菌劑消毒。殺菌液應符合GB4285規(guī)定。6.2移栽小心取出合格組培苗，用清水洗凈培養(yǎng)基后，用0.1%高錳酸鉀溶液浸泡3分鐘～5分鐘。晾干至根部發(fā)白，種植于由松麟、木屑、碎石等組成的基質中?；|在使用前應堆制發(fā)酵或高溫滅菌處理。3DB3301/T1062—20187模式圖鐵皮石斛組織培養(yǎng)育苗技術模式圖見附錄B。4DB3301/T1062—2018（資料性附錄）鐵皮石斛組織培養(yǎng)各生長階段培養(yǎng)基激素和添加物推薦配方