人類血液來源免疫細胞庫建設(shè)與管理規(guī)范

1人類血液來源免疫細胞庫建設(shè)與管理規(guī)范下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本GB2894-2008安全標(biāo)志及GB7000.2-2008燈具第2-22部分：特殊要求應(yīng)急GB/T20269-2006信息安全技術(shù)信息系統(tǒng)GB/T27025-2008檢測和校準(zhǔn)實驗室能力的GB50052-2009供配電系GB50140-2005建筑滅火器配GB50346-2011生物安全實驗室建GB50351-2014儲罐區(qū)防火AQ3013-2008危險化學(xué)品從業(yè)單位安全標(biāo)準(zhǔn)化通用規(guī)范CNAS-CL05:2009實驗室生物WS/T224-2002真空采血管及其DB12/597-2015醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)醫(yī)療廢物處理規(guī)范WHOThirdEdition實驗室生物安全免疫細胞immunecell2外周血單個核細胞peripheralbloodmononucle3指使用化學(xué)物品時遵守一定的規(guī)范并有相應(yīng)的緊急預(yù)案應(yīng)對事故,防止危險化學(xué)品事故生物安全評審委員會biosafetyreview4縮略詞NIH:美國國立衛(wèi)生研究院（NationalInstitutesofHealth）HIV:人類免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficiencyViTP:梅毒螺旋體（TreponemaPallHBV:乙型肝炎病毒（HepatitisBVirHCV:丙型肝炎病毒（HepatitisCVirALT:谷丙轉(zhuǎn)氨酶(AlanineAminotransferase)WHO:世界衛(wèi)生組織（WorldHealthOrganization）GMP:藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GoodManufacturingPraPBMC:外周血單個核細胞（PeripheralBloodMononuclearCeDC:樹突狀細胞(DendriticCell)CIK:細胞因子誘導(dǎo)殺傷細胞(Cytokine-inducedKillAABB:美國血庫協(xié)會(AmericanAssociationofBloodBanks)ATCC:美國菌種保藏中心（AmericanTypeCultureCollection）5.1倫理審查委員會5.1.1細胞庫應(yīng)設(shè)有倫理審查委員會。倫理審查委員會由醫(yī)藥學(xué)、倫理學(xué)、法學(xué)等專家以5.1.3倫理審查委員會應(yīng)在樣本相關(guān)研究項目開始前進行倫理審查及對已通過審查或正在5.2科學(xué)審查委員會45.2.1細胞庫應(yīng)設(shè)有科學(xué)審查委員會。科學(xué)審查5.2.2科學(xué)審查委員會應(yīng)負責(zé)對生物樣本采集5.3生物安全評審委員會5.3.2生物安全評審委員會負責(zé)細胞庫的生物安全政策和安全操作規(guī)范的審查。6.2.1細胞庫場地要符合長久儲存要求，避免頻繁更換儲存6.2.4細胞庫的建設(shè)應(yīng)由具有相應(yīng)資質(zhì)的施工單位進室的核心工作區(qū)的照度不低于350lx，其它區(qū)域不少于30分鐘，需安裝后備電池或者與后備發(fā)電機相連，并符提供保護。液氮罐應(yīng)設(shè)有溫度報警和液面控制裝置。所有設(shè)備的選擇均應(yīng)符合通用要57.1.1血液樣本的采集應(yīng)符合《血站基本標(biāo)準(zhǔn)》中血液采集樣本提供者須做血液初、復(fù)檢，合格后方能采用。采血人員采集時應(yīng)輕搖血液，防止凝WT/S400-2012血液運輸要求的規(guī)定。7.3.1樣本接收時，做好自我防護工作，應(yīng)戴好手套與口罩，確認送達接收室的樣本7.3.2觀察樣本容器包裝的外觀，檢查有無破損并記錄，檢查信息記錄表上的信息免疫細胞的凍存需加入適當(dāng)?shù)睦鋬霰Ｗo液，按照標(biāo)準(zhǔn)密度進行凍存7.6.1細胞入庫必須有嚴(yán)格的過程控制及完整的信息錄入、7.6.2將凍存好的細胞移至細胞暫存庫中儲存，儲存溫度為-196℃~-135℃,同時對細胞7.6.3將符合入庫標(biāo)準(zhǔn)的細胞從細胞暫存庫轉(zhuǎn)移至細胞儲存庫中，在儲存溫度為-196℃~6加入新鮮培養(yǎng)基重懸細胞，混合均勻，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶，放入二氧化臨床治療需使用細胞庫內(nèi)細胞時，細胞庫出庫人員需核對庫存細胞信息和細胞使科研用途使用細胞庫的細胞時，需保證樣本提供者在充分知情并簽訂知情細胞庫內(nèi)部因整改、擴容或評估凍存細胞質(zhì)量細胞轉(zhuǎn)移操作應(yīng)確保細應(yīng)對樣本的銷毀進行記錄，包括銷毀樣本的名稱與數(shù)量、銷毀的原因、批7.9.2將符合發(fā)放標(biāo)準(zhǔn)的細胞發(fā)放，并填寫發(fā)放記錄。質(zhì)量不合格的細胞需進行記7細胞庫應(yīng)建立并實施質(zhì)量目標(biāo)、質(zhì)量方針，遵循相關(guān)法律法規(guī)要求。明確在整個樣本采集、制備、儲存的全過程中的質(zhì)量要求，包括全面質(zhì)量保證（QA）和質(zhì)量控制系統(tǒng)（QC并以完整的質(zhì)量體系文件形式明確規(guī)定及監(jiān)控其有效性。確保所制備的免疫細胞生產(chǎn)管理人員應(yīng)當(dāng)至少具有相關(guān)專業(yè)本科學(xué)歷，具有至少三年從事免疫細胞形成報告。樣本提供者健康信息采集表見附錄B，各項檢測指標(biāo)合格者，具備提供工作人員必須系統(tǒng)的接受相關(guān)生物安全知識、法規(guī)制度培訓(xùn)和業(yè)務(wù)崗位培訓(xùn)與考培訓(xùn)及考核結(jié)果應(yīng)有相關(guān)檔案記錄及查閱制度。8細胞庫若發(fā)生生物安全暴露，相關(guān)人員應(yīng)接受必要救治并制壓力容器指壓力氣瓶及高壓滅菌裝置。壓力容器應(yīng)由持有壓力容器操作資格證的專業(yè)人員操作。壓力容器使用應(yīng)建立使用記錄檔案，并應(yīng)按照相關(guān)規(guī)程定期檢驗、調(diào)整和檢修、壓力容器安全應(yīng)符合《中華人民購進可能有危害的化學(xué)物品都必須附有材料安全數(shù)據(jù)表。所有危險化學(xué)品都需要以易于識別的形式進行標(biāo)記，使專業(yè)和非專業(yè)人員很容易警覺其潛在的危險應(yīng)建立危險化學(xué)用品事故危險評估和應(yīng)急預(yù)案工作人員在操作中接觸到液氮時，需使用防護面罩和隔熱手套并做好其它防凍措應(yīng)建立嚴(yán)格的生物安全及危害性評估方案、疾病傳播預(yù)防方案、生物安全審查制9細胞庫的生物安全制度應(yīng)通過生物安全委員會及生命倫理委員會的批準(zhǔn)后方可實應(yīng)保證實驗室的安全運行，包括防止實驗室工作人員的感染、防止實驗室操作的散。應(yīng)及時向相關(guān)領(lǐng)導(dǎo)報告事故情況，以對事故進行及時處細胞庫的疾病傳播預(yù)防應(yīng)符合《中華人民共和國傳染病防治法》的規(guī)定。d)廢液的處理，應(yīng)符合國家的相關(guān)規(guī)定，根據(jù)廢液的性質(zhì)進行正確處理。細胞庫所用物料耗材需從具有專業(yè)資質(zhì)并經(jīng)過驗證核實的供應(yīng)商處采購，且具備物料耗材包裝應(yīng)保證完整無破損，入庫時嚴(yán)格進行分區(qū)，待抽檢結(jié)果合格后方可應(yīng)由專人進行維護、管理，設(shè)備的運行狀態(tài)應(yīng)進行明確標(biāo)識當(dāng)設(shè)備出現(xiàn)故障或性能無法達到工藝要求時，需進行維修、升級或報廢。8.6.1應(yīng)對樣本采集、細胞制備與凍存、入庫和出庫全過程進行質(zhì)量控制。慮實際生產(chǎn)條件和保證生產(chǎn)質(zhì)量必需的檢查、檢驗；所有必需的生產(chǎn)記錄和制訂、驗證和實施所有質(zhì)量控制操作規(guī)程。嚴(yán)格按照操作規(guī)程執(zhí)行操作管理并做免疫細胞操作環(huán)境和儲存環(huán)境條件由專人進行監(jiān)控和維護，并形成記錄。質(zhì)量控制區(qū)應(yīng)當(dāng)與生產(chǎn)區(qū)分開。實驗室的設(shè)計應(yīng)當(dāng)確保其適能夠避免混淆和交叉污染，應(yīng)當(dāng)有足夠的區(qū)域用于樣品處置、留樣和穩(wěn)定性考察樣品唯一的ID，對原始樣本ID和新增錄入ID進行樣本容器都必須標(biāo)上含有樣本編碼的條形碼。細胞的編碼應(yīng)遵循唯一性的總原則。在別抗原、產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答的淋巴細胞等。免疫細胞是人體內(nèi)清除各種細菌，病毒和XXX細胞中心：電話XXX，郵箱XXX，網(wǎng)站XXX，地址為XXX?！魽.無償捐贈予XXX；□B.按《醫(yī)療廢棄我已告知該樣本提供者可能的風(fēng)險及獲益情況，給予他/她足夠的時間閱讀、與情同意書，并解答了其相關(guān)的問題；我已告知該我已詳細閱讀了知情同意書，項目專員已向我作了詳盡的說明，我完全了解參加真完成本次樣本儲存。本知情同意書一式兩份，我將得到簽名后的一份知情我自愿參加本次樣本采集，并同意按照本知情同意書的內(nèi)容配合細胞中心人員的操作，認真完成本次樣本采集。本知情同意書一式兩份，我將得到簽名后的一份知情無聯(lián)系電話X109/L；HIV-Ab(I+II)(免疫缺陷病1)將血袋中的血轉(zhuǎn)移到離心管中，使用經(jīng)滅菌消毒的剪刀剪斷塑料管，小心把袋中3)離心完畢后分層，吸取上層血漿層到離心管中，貼上血漿編碼標(biāo)記暫于4℃保5)鋪層加樣：將稀釋的血液樣本緩慢勻速的加入到盛有室溫的淋巴細胞分離液上的分界面。離心：2000rpm，20min，室溫6)提取單個核細胞:離心完畢后，離心管內(nèi)出現(xiàn)明顯分層，由下到上分別為：紅細胞層、粒細胞層、ficoll層、單個核細胞層、血漿生理鹽水9)離心完畢后收集上清液留作無菌檢測，細胞沉淀即為目的細胞。2)配置凍存液：根據(jù)上一步的細胞計數(shù)結(jié)果計算凍存液用量，將DMSO與自體血漿3)離心后獲得細胞沉淀，棄掉上清。加入適量的低溫凍存液，使最終的細胞凍存密5)貼標(biāo)簽