二講實(shí)驗(yàn)設(shè)備及培養(yǎng)條件

第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室第二節(jié)設(shè)備和器材第三節(jié)培養(yǎng)條件第二講實(shí)驗(yàn)設(shè)備及培養(yǎng)條件

一：實(shí)驗(yàn)室規(guī)模及設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)室規(guī)模：實(shí)驗(yàn)室規(guī)模大小取決于研究的目的性質(zhì)和工作任務(wù)的多少：一般來(lái)說(shuō)研究性質(zhì)的100－200M2為宜開發(fā)生產(chǎn)性質(zhì)的200M2以上實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)：植物細(xì)胞培養(yǎng)室包擴(kuò)有準(zhǔn)備室、接種室、培養(yǎng)室有條件的，還應(yīng)有細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室（顯微鏡室）、化學(xué)實(shí)驗(yàn)室（分析實(shí)驗(yàn)室）、切片室等第一節(jié)實(shí)驗(yàn)室配置室洗滌室接種室培養(yǎng)室觀察室實(shí)驗(yàn)室馴化室培養(yǎng)室

培養(yǎng)室

培養(yǎng)室

門廳

走廊

準(zhǔn)備室觀察室

接種室

洗滌室

配置室

案例1：實(shí)驗(yàn)室平面設(shè)計(jì)配置室滅菌室觀察室馴化室走廊

洗滌室培養(yǎng)室接種室培養(yǎng)室案例2：實(shí)驗(yàn)室構(gòu)成培養(yǎng)室接種室緩沖間準(zhǔn)備室案例3：實(shí)驗(yàn)室平面設(shè)計(jì)圖功能：用于玻璃器具的清洗、干燥和貯存；接種材料沖洗。

配備：上下水；水槽；塑料筐；干燥箱；晾干架等。

1、洗滌室面積：根據(jù)規(guī)模，可與配置室合并，一般20m2。2.配置室功能：用于培養(yǎng)基的配制、試管苗出瓶、清洗。配備：藥品柜，天平，工作臺(tái)，蒸餾水器，磁力攪拌器，冰箱，電爐或電飯鍋，酸度計(jì)，培養(yǎng)箱設(shè)計(jì)要求：明亮、通風(fēng)、潔凈。藥品柜冰箱天平磁力攪拌器恒溫水浴鍋酸度計(jì)電蒸餾水器水處理中心恒溫培養(yǎng)箱電飯鍋

電爐人工氣候室功能：完成培養(yǎng)基、接種工具等的高壓滅菌過(guò)程。

配備：高壓滅菌器或微波爐，烘干箱。3.滅菌室

4、接種室功能：用于植物材料的無(wú)菌分離、接種和轉(zhuǎn)移培養(yǎng)物。結(jié)構(gòu)：緩沖間+接種室配備：超凈臺(tái)，工作臺(tái)，擱架，醫(yī)用平車，細(xì)菌過(guò)濾器、解剖鏡、紫外燈等。面積：一般10－20m2

設(shè)計(jì)要求:地面平坦無(wú)縫、頂棚及墻壁密閉光滑，干爽安靜，清潔明亮，配置橫拉門，門窗嚴(yán)密。超凈工作臺(tái)電子滅菌器臭氧滅菌機(jī)5.培養(yǎng)室

配備：培養(yǎng)架邊臺(tái)解剖鏡照明設(shè)備定時(shí)器空調(diào)器干濕溫度計(jì)工作臺(tái)除濕機(jī)換氣扇

面積：根據(jù)規(guī)模定

功能：培養(yǎng)植物材料。

6.觀察室功能：觀察并研究培養(yǎng)材料的生長(zhǎng)分化情況及其形態(tài)發(fā)生規(guī)律；檢查培養(yǎng)材料是否脫毒和發(fā)生變異。主要配備：生物顯微鏡，切片機(jī)，酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀，PCR擴(kuò)增儀等。要求：室內(nèi)清潔、明亮、安靜，設(shè)備先進(jìn)。

7.馴化棚室要求：能夠控溫調(diào)濕、控光通風(fēng)。面積：據(jù)規(guī)模來(lái)定。注：室內(nèi)馴化與設(shè)施下馴化均可。功能：提供組培苗煉苗的環(huán)境。①②7.馴化棚室③第二節(jié)設(shè)備和器材一、玻璃器皿二、器械用具三、儀器設(shè)備（一）對(duì)玻璃器皿要求：

1.耐腐蝕；耐高溫、高壓；

2.透明度好；

3.便于接種。一、玻璃器皿

三角瓶：50、100、250、500ml或用250ml罐頭瓶代替。培養(yǎng)皿：6、9、12cm試管：18×180mm或20×200mm量筒：10、50、100、500、1000ml燒杯：50、100、200、500、1000ml容量瓶：100、200、500、1000ml試劑瓶（棕色）：50、100、250、500、1000ml移液管：0.2、0.5、1.0、2、5、10ml

微量移液器玻璃棒、酒精燈（二）玻璃器皿的規(guī)格：1、鑷子類：接種、轉(zhuǎn)移材料或分離莖尖用，以100ml三角瓶為培養(yǎng)瓶，可用20cm長(zhǎng)。

二、器械用具二、器械用具2、剪刀類：醫(yī)用剪刀，剪切割外植體或繼代培養(yǎng)時(shí)分離材料。

3、解剖刀：切割芽、莖段、愈傷組織等，繼代時(shí)分離材料，也可用于微小外植體的接種等。4、解剖針：轉(zhuǎn)移細(xì)胞或愈傷組織，微莖尖分離及接種等。二、器械用具5.其它：周轉(zhuǎn)筐搪瓷盤移液管架、玻璃棒、酒精燈、試管架等。三、儀器設(shè)備1、恒溫培養(yǎng)箱2、烘箱3、空調(diào)4、高壓滅菌鍋5、冰箱6、天平7、酸度計(jì)8、顯微鏡9、水浴鍋10、蒸餾水器11、磁力攪拌器12、人工氣候室13、搖床轉(zhuǎn)床14、干燥箱15.細(xì)菌過(guò)濾器第三節(jié)培養(yǎng)條件

1.一般控制在25±2oC。

2.植株種類及外植體的不同，其最適溫度也是不同的?！?/p>

一、溫度二、光照1.光強(qiáng)

★影響外植體細(xì)胞的增殖、組織和器官的分化。

★有的材料愈傷組織的誘導(dǎo)需光或需暗；★光照強(qiáng)，幼苗生長(zhǎng)健壯；光照弱，幼苗生長(zhǎng)弱小，容易徒長(zhǎng)。★不同波長(zhǎng)的光對(duì)細(xì)胞的分裂和器官的分化有影響。2.光質(zhì)②白光促進(jìn)小花天竺葵愈傷組織的生長(zhǎng)，藍(lán)光則無(wú)作用。如：①紅光促進(jìn)楊樹愈傷組織的生長(zhǎng)，

藍(lán)光阻礙其生長(zhǎng)。3.光照時(shí)間

根據(jù)植物生物學(xué)特性決定；光照長(zhǎng)短對(duì)試管內(nèi)花的形成有重要影響；在胡蘿卜組織培養(yǎng)中隨著日照長(zhǎng)度的增加，而促進(jìn)生長(zhǎng)。

三、濕度1.瓶?jī)?nèi)的濕度：主要受到培養(yǎng)基含水量和封口膜透性的影響。如培養(yǎng)基過(guò)硬，則不利于外植體接觸和插入培養(yǎng)基，導(dǎo)致生長(zhǎng)遲緩；封口膜過(guò)于透氣，也會(huì)使瓶?jī)?nèi)濕度下降。2.環(huán)境濕度：過(guò)低會(huì)使培養(yǎng)基喪失大量水分，滲透勢(shì)升高，影響材料對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，也會(huì)阻礙外植體的生長(zhǎng)。一般為70－80%。三、濕度1.瓶?jī)?nèi)的濕度

1.培養(yǎng)基適宜pH值5-6.5，一般為5.8，調(diào)整用0.1M的NaOH和HCl溶液。四、pH值2.ｐH影響培養(yǎng)基的硬度。ｐH＞6.5培養(yǎng)基會(huì)變硬；ｐH＜5.0培養(yǎng)基不易凝固。3.滅菌之前，培養(yǎng)基的ｐH要比標(biāo)準(zhǔn)提高0.2－0.3個(gè)單位。五、氣體(必要條件)1.培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)氧氣的充足與否與封口材料有關(guān)?？捎妹奕蛱刂频姆饪谒芰稀Ｍ庾詈玫氖敲奕?，但棉塞易使培養(yǎng)基干燥，夏季易引起污染。

2.培養(yǎng)基內(nèi)氧氣充足與否與培養(yǎng)基的種類和培養(yǎng)方式有關(guān)?！艄腆w培養(yǎng)基可加進(jìn)活性炭來(lái)增加通氣度,以利于發(fā)根。◆液體培養(yǎng)時(shí)，可考慮采取振蕩培養(yǎng)的方式，以增加通氣性。

五、氣體(必要條件)2.２個(gè)大氣壓以上就對(duì)生長(zhǎng)有阻礙作用，5