霉菌的培養(yǎng)與形態(tài)觀察

山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告20年月日姓名系年級(jí)學(xué)號(hào)科目題目組別同組者：第2頁(yè)共5頁(yè)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告·張連升一、【目的要求】學(xué)習(xí)并掌握霉菌的形態(tài)觀察法——小室培養(yǎng)法；了解四類常見霉菌（青、根、毛、曲霉）的形態(tài)特征；鞏固顯微鏡操作技術(shù)及無(wú)菌操作技術(shù)。二、【實(shí)驗(yàn)原理】1.霉菌可產(chǎn)生分枝的菌絲體，分為基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長(zhǎng)到一定階段分化產(chǎn)生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產(chǎn)生孢子。霉菌菌絲體（尤其是繁殖菌絲）及孢子的形態(tài)特征是識(shí)別不同種類霉菌的重要依據(jù)（本次實(shí)驗(yàn)觀察青霉、曲霉、根霉和毛霉菌四種霉菌）。霉菌菌絲和孢子的寬度通常比細(xì)菌和放線菌粗得多（約3-10μm），常是細(xì)菌菌體寬度的幾倍至幾十倍，因此，用低倍顯微鏡即可觀察。2.觀察霉菌的形態(tài)有多種方法，常用的有直接制片觀察法、載玻片培養(yǎng)觀察法和玻璃培養(yǎng)觀察法三種方法，本次實(shí)驗(yàn)采用載玻片培養(yǎng)觀察法（小室培養(yǎng)法）。3.載玻片培養(yǎng)觀察法（小室培養(yǎng)法）：用無(wú)菌操作將培養(yǎng)基瓊脂薄層置于載玻片上，接種后蓋上蓋玻片培養(yǎng)，霉菌即在載玻片和蓋玻片之間的有限空間內(nèi)沿蓋玻片橫向生長(zhǎng)。培養(yǎng)一定時(shí)間后，將載玻片上的培養(yǎng)物置于顯微鏡下觀察。這種方法既可以保持霉菌自然生長(zhǎng)狀態(tài)，還便于觀察不同發(fā)育期的培養(yǎng)物。三、【實(shí)驗(yàn)器材】菌種：曲霉，青霉，根霉和毛霉培養(yǎng)7d的馬鈴薯瓊脂平板培養(yǎng)物培養(yǎng)基：馬鈴薯培養(yǎng)基（簡(jiǎn)稱PDA）（配方見附表）3.儀器和其他用品：平皿，載玻片，蓋玻片，無(wú)菌吸管，U型玻璃棒，解剖刀，鑷子，50%乙醇，20%甘油，顯微鏡，接種環(huán)，酒精燈等四、【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】1．配培養(yǎng)基：根據(jù)報(bào)告后附錄準(zhǔn)確稱取實(shí)驗(yàn)所需各種物質(zhì)的質(zhì)量，配置PDA培養(yǎng)基150ml，121℃滅菌20分鐘；2．培養(yǎng)小室的準(zhǔn)備及滅菌：在八個(gè)平皿底部各鋪一張略小于皿底的圓濾紙片，再各放一個(gè)Ｕ形玻璃棒，其上各放一潔凈載玻片和四塊蓋玻片，蓋上平皿蓋，加上兩個(gè)空平皿，包扎后于121℃滅菌30分鐘，烘干備用；3．瓊脂薄片的制作：取已滅菌的馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基分別注入兩個(gè)滅菌平皿（事先在平皿底部畫上1cmX1cm或1.2cmX1.2cm的方格）中，使之凝固成薄層。通過(guò)無(wú)菌操作，用解剖刀將其切成小瓊脂塊，并將其移至上述培養(yǎng)室中的載玻片上（每片放兩塊)；4．接種：通過(guò)無(wú)菌操作，用接種環(huán)從斜面培養(yǎng)物上挑取很少量的孢子，接種于培養(yǎng)小室中瓊脂塊的邊緣上，用無(wú)菌鑷子將蓋玻片覆蓋在瓊脂塊上，每個(gè)菌種接種兩個(gè)平皿；5．培養(yǎng)：通過(guò)無(wú)菌操作，在培養(yǎng)小室中的圓濾紙上加3ml滅菌的20%的甘油（用于保持平皿內(nèi)的濕度)，蓋上皿蓋，28℃正置培養(yǎng)一周；6．鏡檢：根據(jù)需要可以在不同的培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)取出載玻片置低倍鏡下觀察，必要時(shí)換高倍鏡。記錄觀察結(jié)果。注意事項(xiàng)：①載玻片培養(yǎng)觀察中，注意無(wú)菌操作，接種量要少；②盡可能將分散的孢子接種在瓊脂塊邊緣上，否則培養(yǎng)后菌絲過(guò)于稠密影響觀察。五、【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】（1）四種霉菌形態(tài)特征對(duì)比菌種曲霉根霉毛霉青霉形態(tài)特征營(yíng)養(yǎng)菌絲具有分隔；氣生菌絲的一部分形成長(zhǎng)而粗糙的分生孢子梗，頂端膨大成球狀頂囊，表面輻射出一層或兩層小梗，小梗上著生成串的球形分生孢子。分生孢子梗生于足細(xì)胞上，并通過(guò)足細(xì)胞與營(yíng)養(yǎng)菌絲相連。菌絲無(wú)隔、多核、分枝狀，有匍匐菌絲和假根。在假根的上方直立地生長(zhǎng)出一至數(shù)根孢囊梗，其頂端膨大成球形孢子囊。囊的基部有囊托，中間有球形或半球形囊軸。囊內(nèi)產(chǎn)大量孢囊孢子，有性生殖時(shí)由不同性別的菌絲或匍匐菌絲上生出配子囊，配子囊雙雙異宗配合形成一接合孢子。菌絲無(wú)隔、多核、分枝狀，無(wú)假根或匍匐菌絲。菌絲體上直接生出單生、總狀分枝或假軸狀分枝的孢囊梗。各分枝頂端著生球形孢子囊，無(wú)囊托。菌絲有橫隔，分生孢子梗亦有橫隔，光滑或粗糙?；繜o(wú)足細(xì)胞，頂端不形成膨大的頂囊，其分生孢子梗經(jīng)過(guò)多次分枝，產(chǎn)生幾輪對(duì)稱或不對(duì)稱的小梗，形如掃帚，稱為帚狀體。小梗頂端有孢子。（2）顯微鏡下四種霉菌形態(tài)對(duì)比：青霉菌（10X40）根霉菌（10X40）毛霉菌（10X40）曲霉菌（10X10）曲霉菌足細(xì)胞放大（10X40）結(jié)果分析：顯微鏡下都能觀察到四種霉菌的菌絲體和孢子，且四種霉菌的形態(tài)對(duì)比非常明顯，霉菌培養(yǎng)結(jié)果較好。六、【思考題】1.黑根霉和黑曲霉在形態(tài)特征上有何區(qū)別？答：黑曲霉的營(yíng)養(yǎng)菌絲具有分隔；氣生菌絲的一部分形成長(zhǎng)而粗糙的分生孢子梗，頂端膨大成球狀頂囊，表面輻射出一層或兩層小梗，小梗上著生成串的球形分生孢子。分生孢子梗生于足細(xì)胞上，并通過(guò)足細(xì)胞與營(yíng)養(yǎng)菌絲相連；而黑根霉菌絲無(wú)隔、多核、分枝狀，有匍匐菌絲和假根。在假根的上方直立地生長(zhǎng)出一至數(shù)根孢囊梗，其頂端膨大成球形孢子囊。囊的基部有囊托，中間有球形或半球形囊軸。囊內(nèi)產(chǎn)大量孢囊孢子，有性生殖時(shí)由不同性別的菌絲或匍匐菌絲上生出配子囊，配子囊雙雙異宗配合形成接合孢子。七