大腸桿菌的檢測及原理

大腸桿菌的檢測及原理檢測原理：大腸菌群是一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽抱桿菌，該菌主要來源于人畜糞便，故以此作為糞便污染指標(biāo)來評價食品的衛(wèi)生質(zhì)量，推斷食品中有否污染腸道致病菌的可能。食品中的大腸菌群數(shù)系以100ml(g)檢樣內(nèi)大腸菌群最可能數(shù)(MPN)表示。儀器設(shè)備與器具：2.1恒溫培養(yǎng)箱：36±1°C。2.21000ml三角燒瓶、1ml、10ml移液管。2.3接種針。2.4顯微鏡。2.5超凈工作臺。2.6玻片、酒精燈、洗耳球、試管架。2.7天平：感量0.01g。2.8滅菌釜。2.9培養(yǎng)皿(直徑為90mm)、試管，經(jīng)121C、30分鐘滅菌。2.10試管夾、酒精燈、秒表、載玻片3.培養(yǎng)基及試劑：3.1乳糖膽鹽發(fā)酵管：按照制造廠家使用說明進(jìn)行配制，滅菌。3.2伊紅美蘭瓊脂平板：按照制造廠家使用說明進(jìn)行配制，滅菌。3.3乳糖發(fā)酵管：按照制造廠家使用說明進(jìn)行配制，滅菌。3.4革蘭氏染色液。3.4.1結(jié)晶紫染色液：結(jié)晶紫1g95%乙醇20ml1%草酸銨水溶液80ml將結(jié)晶紫溶解于乙醇中，然后與草酸銨溶液混合。3.4.2革蘭氏碘液：碘1g碘化鉀2g蒸餾水300ml將碘與碘化鉀先進(jìn)行混合，加入蒸餾水少許，充分振搖，待完全溶解后，再加蒸餾水至300ml。3.4.3沙黃復(fù)染液:沙黃0.25g95%乙醇10ml蒸餾水90ml將沙黃溶解于乙醇中，然后用蒸餾水稀釋。3.5生理鹽水。檢驗程序：檢樣稀釋I乳糖膽鹽發(fā)酵管，36±1°C,24±2hr；不產(chǎn)氣產(chǎn)氣I大腸菌群陰性伊紅美蘭瓊脂平板，36±1C,24±2hr報告II革蘭氏染色乳糖發(fā)酵管，36±1C,24±2hr ；；；G+G-，無芽抱桿菌產(chǎn)氣不產(chǎn)氣大腸菌群陰性大腸菌群陰性報告大腸菌群陽性報告測定方法：5.1檢樣稀釋：5.1.1以無菌操作將檢樣25ml（或25g）放于含有225ml滅菌生理鹽水的滅菌塑料燒杯中，經(jīng)充分振搖成1：10均勻稀釋液。5.1.2用1ml滅菌吸管吸取1：10稀釋液1ml，注入含有9ml滅菌生理鹽水的試管中，振搖成1：100稀釋液。5.1.3重復(fù)5.1.2的操作，使成1：1000稀釋液。5.2乳糖膽鹽發(fā)酵試驗：根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)z樣污染情況的估計，選擇二個稀釋度，每一稀釋度接種3管，接種量在1ml以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管。1ml及1ml以下者，用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。然后置于36±1C培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)24±2hr，如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報告為大腸菌群陰性；如有產(chǎn)氣者，則可按以下程序進(jìn)行。5.3分離培養(yǎng)：將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別接種于伊紅美蘭瓊脂平板上，置36±1C溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24hr后取出，觀察菌落形態(tài)，并作革蘭氏染色。5.4證實試驗：在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落1?2個進(jìn)行革蘭氏染色同時接種乳糖發(fā)酵管，置于36±1°C溫箱內(nèi)培養(yǎng)24±2hr，觀察產(chǎn)氣情況。乳糖發(fā)酵管產(chǎn)氣，革蘭氏染色為陰性的無芽抱桿