FDA與ISO食品微生物檢驗(yàn)方法小學(xué)教育

1/1FDA與ISO食品微生物檢驗(yàn)方法-小學(xué)教育

食品微生物檢驗(yàn)方法（FDA與ISO對(duì)比）

內(nèi)容提要：

z菌落總數(shù)檢測(cè)

z大腸菌群及大腸桿菌檢測(cè)

z金黃色葡萄球菌檢測(cè)

z沙門氏菌檢測(cè)

z單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢測(cè)

菌落總數(shù)測(cè)定——菌落總數(shù)的概念

z菌落總數(shù)是指在被檢樣品的單位重量（g）、容積（ml）或表面積（cm）內(nèi)，所含能于某種固2

體培育基上，在肯定條件下培育后所生成的菌落的總數(shù)。

菌落總數(shù)測(cè)定——衛(wèi)生學(xué)意義

z判定食品被細(xì)菌污染的程度及衛(wèi)生質(zhì)量。

z準(zhǔn)時(shí)反映食品加工過程是否符合衛(wèi)生要求，為被檢食品衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)供應(yīng)依據(jù)。

z通常認(rèn)為，食品中細(xì)菌數(shù)量越多，則可考慮致病菌污染的可能性越大，菌落總數(shù)的多少在肯定程度上標(biāo)志著食品衛(wèi)生質(zhì)量的優(yōu)劣。

FDABAM菌落總數(shù)測(cè)定流程

檢樣xg/mL+9xml

適當(dāng)十倍稀釋樣品

選擇2~3個(gè)連續(xù)相宜稀釋度

各取1mL分別加入滅菌平皿內(nèi)

每皿內(nèi)加入適量平板計(jì)數(shù)瓊脂（PCA）

35℃482h

FDABAM菌落計(jì)數(shù)方法

25~250CFU之間的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)算公式如下：N=∑C/（1*n1+0.1*n2）*d

z全部平板的菌落數(shù)都不足25CFU，報(bào)告EAPC/ml（g）為＜25*1/d。EAPC：estimatedaerobicplatecount2z全部平板的菌落數(shù)都超過250CFU，但不足100/cm，報(bào)告EAPC/ml（g）為最接近250CFU的平板菌落數(shù)的估量值，乘以相應(yīng)的稀釋度。

22z全部平板的菌落數(shù)都超過100/cm，計(jì)算平板的面積（直徑為90mm的平板面積為65cm），估

計(jì)最高稀釋度每cm2的菌落數(shù)，乘以相應(yīng)平板面積作為該稀釋度的菌落計(jì)數(shù)結(jié)果，報(bào)告EAPC/ml（g）為＞65*100*1/d。

z無法計(jì)數(shù)的平板報(bào)告LA（LaboratoryAccident）。

z最終結(jié)果保留前兩位有效數(shù)字。根據(jù)4舍6入，5是奇進(jìn)偶不進(jìn)。z選擇

ISO4833-2023菌落總數(shù)測(cè)定流程

檢樣xg/mL+9xml稀釋液（磷酸鹽緩沖液）

適當(dāng)十倍稀釋樣品

選擇2~3個(gè)連續(xù)相宜稀釋度

各取1mL分別加入滅菌平皿內(nèi)

每皿內(nèi)加入適量（12~15mL）

平板計(jì)數(shù)瓊脂（PCA），

301℃，723h

ISO4833-2023菌落計(jì)數(shù)方法

2個(gè)稀釋度不超過300CFU的平板，且一個(gè)平板至少含15CFU進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)算公式如

下：N=∑C/（n1+0.1*n2）*d

z全部平板的菌落數(shù)都不足15CFU，計(jì)算2平板菌落的算術(shù)平均值m，液體樣品：NE=m固體樣

品：NE=md-1

z無菌生長：液體樣品：lessthan1;固體樣品：lessthan1d-1

z最終結(jié)果保留前兩位有效數(shù)字。z選擇連續(xù)

菌落總數(shù)測(cè)定幾點(diǎn)說明

30/35℃有氧條件下培育，因而并不是樣品中實(shí)際的總活菌數(shù)，一些特別養(yǎng)分

要求的細(xì)菌、厭氧菌、微需氧菌、以及非嗜中溫細(xì)菌，均難以反映出來。

z鑒于食品檢樣中的細(xì)菌細(xì)胞是以單個(gè)、成雙、鏈狀、葡萄狀或成堆的形式存在，因而在平板上

消失的菌落可以來源于細(xì)胞塊，也可以來源于單個(gè)細(xì)胞，因而平板上所得菌落的數(shù)字不應(yīng)報(bào)告活

菌數(shù)，而應(yīng)以單位重量、容積或表面積內(nèi)的菌落數(shù)或菌落形成單位（colonyformingunits，CFU）報(bào)告。z由于檢樣中采納

菌落總數(shù)測(cè)定幾點(diǎn)要求

15min，主要為防止細(xì)菌增殖和

產(chǎn)生片狀菌落。樣液與瓊脂應(yīng)充分混合，避開將混合物濺到平皿壁和皿蓋上。皿內(nèi)瓊脂凝固后，不要長時(shí)間放置，然后倒置培育，可避開菌落擴(kuò)散生長。

z檢樣過程中應(yīng)用稀釋劑做空白對(duì)比，用以判定稀釋液、培育基、平皿或吸管可能存在的污染。

同時(shí)，檢樣過程中應(yīng)在工作臺(tái)上打開一塊空白平板計(jì)數(shù)瓊脂，其暴露時(shí)間應(yīng)與檢樣時(shí)間相當(dāng)，以

了解檢樣在檢驗(yàn)操作過程中有無受到來自空氣的污染。

z檢樣稀釋液有時(shí)帶有食品顆粒，為避開與細(xì)菌菌落發(fā)生混淆，可作一檢樣稀釋液與平板計(jì)數(shù)瓊

脂混合的平皿，不經(jīng)培育，于4℃放置，以便在計(jì)數(shù)檢樣時(shí)用作對(duì)比。z每個(gè)樣品從開頭稀釋到傾注最終一個(gè)平皿所用的時(shí)間不得超過

大腸菌群的定義

z大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。

z大腸菌群不是細(xì)菌學(xué)上的分類命名，而是依據(jù)衛(wèi)生學(xué)方面的要求，提出的與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌，即作為食品、水體等是否受過人畜糞便污染的指示菌，這些細(xì)菌在生化及血清學(xué)方面并非完全全都。依據(jù)進(jìn)一步的生化試驗(yàn)，可將這群細(xì)菌再分為大腸艾希氏菌（俗稱大腸桿菌）、弗氏檸檬酸桿菌、肺炎克雷伯氏菌和陰溝腸桿菌等。

大腸桿菌的定義

z大腸桿菌（也稱大腸埃希氏菌），分類于腸桿菌科，歸屬于埃希氏菌屬。

z大腸桿菌指革蘭氏陰性無芽孢桿菌、乳糖發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣、IMViC試驗(yàn)（靛基質(zhì)、MR、V-P、檸檬酸鹽試驗(yàn)）為++--或-+--的細(xì)菌。

z與人類有關(guān)的大腸桿菌統(tǒng)稱為致瀉性大腸桿菌，包括五種：腸毒素性大腸桿菌（ETEC）、致病性大腸桿菌（EPEC）、出血性大腸桿菌（EHEC）、侵襲性大腸桿菌（EIEC）、黏附性大腸桿菌（EAEC）。

衛(wèi)生學(xué)意義

z大腸菌群和大腸桿菌是評(píng)價(jià)衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)，作為食品中的糞便污染指標(biāo)。

z食品中檢出大腸菌群，表明該食品有糞便污染，既可能有腸道致病菌存在，因而也就有可能通過污染的食品引起腸道傳染病的流行。大腸菌群數(shù)的凹凸，表明白糞便污染的程度，也反映了對(duì)人體健康危害性的大小。

z大腸桿菌在外界存活時(shí)間與一些主要腸道致病菌接近，它的消失預(yù)示著某些腸道病原菌的存在，因此該菌是國際上公認(rèn)的衛(wèi)生監(jiān)測(cè)指示菌。近年來，有些國家在執(zhí)行HACCP管理中，將大腸桿菌檢測(cè)作為微生物污染狀況的監(jiān)測(cè)指標(biāo)和HACCP實(shí)施效果的評(píng)估指標(biāo)。

大腸桿菌的生物學(xué)特性

基本形態(tài)：

此菌為兩端鈍圓的短小桿菌，一般約0.5-0.8μm*1.0-3.0μm，多單獨(dú)存在或成雙，但不呈

長鏈排列。約50%的菌株有周生鞭毛，但多數(shù)只有1-4根，一般不超過10根，故菌體動(dòng)力弱。多數(shù)菌株有菌毛，有的有莢膜或微莢膜，不形成芽孢，對(duì)一般堿性染料著色良好，革蘭氏染色陰性。

培育特性：

z大腸桿菌合成代謝力量強(qiáng)，在含無機(jī)鹽、銨鹽、葡萄糖的一般培育基上生長良好。最適生長溫度為37℃，在42-44℃條件下仍能生長，生長溫度范圍15-46℃。

大腸菌群及大腸桿菌測(cè)定

——MPN法檢驗(yàn)流程（FDABAM）

檢樣稀釋液

適當(dāng)十倍稀釋樣品

選擇3

每個(gè)稀釋度接種三管LST肉湯（每管9mlLST肉湯并加有導(dǎo)管），

每管接種1mL

44.50.5℃（水浴培育）

242h~482h

查MPN表報(bào)告結(jié)果產(chǎn)氣管接種EMB平板（35℃、18~24h）

（大腸菌群）從EMB平板上挑取5個(gè)可疑菌轉(zhuǎn)接到PCA斜面，進(jìn)行革蘭氏染色、IMVC生化鑒定、接

種LST復(fù)檢產(chǎn)氣

查MPN表報(bào)告結(jié)果（大腸桿菌）

大腸菌群測(cè)定——MPN法檢驗(yàn)幾點(diǎn)說明

MPN檢索表：

MPN檢索表只給了三個(gè)稀釋度，如改用不同的稀釋度，則表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)降低或增加10倍。z初發(fā)酵和證明試驗(yàn)：

1）兩步法進(jìn)行了兩次乳糖發(fā)酵試驗(yàn)。初發(fā)酵和證明試驗(yàn)所用培育基不同，但都是為了證明培育物是否符合大腸菌群的定義，即“在37℃分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣”。

2）初發(fā)酵陽性管，不能確定就是大腸菌群細(xì)菌，經(jīng)過證明試驗(yàn)后，有時(shí)可能成為陰性。有數(shù)據(jù)表明，食品中大腸菌群檢驗(yàn)步驟的符合率，初發(fā)酵與證明試驗(yàn)相差較大。因此，在實(shí)際檢測(cè)工作中，證明試驗(yàn)是必需的。

z產(chǎn)氣量與倒管：

在乳糖發(fā)酵試驗(yàn)工作中，常?？梢钥吹皆诎l(fā)酵倒管內(nèi)極微少的氣泡（有時(shí)比小米粒還?。袝r(shí)可以遇到在初發(fā)酵時(shí)產(chǎn)酸或沿管壁有緩緩上浮的小氣泡。試驗(yàn)表明，大腸菌群的產(chǎn)氣量，多者可以使發(fā)酵倒管全部布滿氣體，少者可以產(chǎn)生比小米粒還小的氣泡。假如對(duì)產(chǎn)酸但未產(chǎn)氣的乳糖發(fā)酵如有疑問時(shí)，可以用手輕輕打動(dòng)試管，如有氣泡沿管壁上浮，即應(yīng)考慮可能有氣體產(chǎn)生，而應(yīng)作進(jìn)一步試驗(yàn)。

大腸桿菌測(cè)定——EMB選擇性分別鑒別

EMB平板典型大腸桿菌菌落特征：

中心黑色或紫紅色，有或無綠色金屬光澤z

大腸桿菌測(cè)定——EMB選擇性分別鑒別

zEMB是一種弱選擇性培育基，一些球菌也可在該培育基上生長；

z高壓滅菌可使得美藍(lán)還原從而使培育基的顏色呈不均一橘黃色，輕輕搖動(dòng)培育基可以恢復(fù)原有的正常紫色，傾注平板前應(yīng)先搖勻；

z大腸桿菌在該培育基上并不肯定總是呈現(xiàn)綠色的金屬光澤；

z該培育基受可見光易使其中的成分氧化，儲(chǔ)存及培育細(xì)菌時(shí)都應(yīng)在避光條件。

大腸桿菌測(cè)定——革蘭氏染色

基本步驟：

z將涂片在火焰上固定，滴加結(jié)晶紫染液，染

z滴加革蘭氏碘液，作用1min，水洗；1min，水洗；

z滴加95%乙醇脫色約15～30s,直至染色液被洗掉，不要過分脫色，水洗；

z滴加番紅復(fù)染液，復(fù)染1min，水洗、待干、鏡檢。

z結(jié)果：革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。

大腸桿菌測(cè)定——生化鑒定

（表略）

金黃色葡萄球菌——概述

依據(jù)《伯杰氏鑒定細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》，按葡萄球菌的生理化學(xué)組成，將葡萄球菌分為金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、表皮葡萄球菌(S.epidermidis)和腐生葡萄球菌(S.saprophyticus)，其中金葡多為致病性菌，表葡間或致病。

z金黃色葡萄球菌是人類化膿性感染中最常見的病原菌?？梢鹁植炕撔愿腥?，如癤、癰、皮下膿腫、外科切口及燒傷創(chuàng)面的感染；也可引起肺炎、偽膜性腸炎、腎盂腎炎、心包炎等多系統(tǒng)的化膿性感染；還可引起敗血癥、膿毒癥等全身性感染。葡萄球菌的致病力強(qiáng)弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶。z

金黃色葡萄球菌——生物學(xué)特性

金黃色葡萄球菌呈球形，直徑0.8μm左右，排列成葡萄串狀，無芽孢，無莢膜。

金黃色葡萄球菌——生長特性

z金黃色葡萄球菌在肉湯中呈渾濁生長，在胰酪胨大豆肉湯內(nèi)有時(shí)液體澄清，菌量多時(shí)呈渾濁生長。

金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)——方法適用性

zMPN法：適用于檢測(cè)帶有大量競爭菌的食品及其原料和未經(jīng)處理的含少量金黃色葡萄球菌的食品。

z直接平板計(jì)數(shù)法：適用于檢查金黃色葡萄球菌數(shù)不小于10/g（ml）的食品。

z增菌培育法：適用于檢查含有受損傷的金黃色葡萄球菌的加工食品。

金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)——直接平板計(jì)數(shù)法

（FDABAMISO）

檢樣（稀釋液）

選擇2~3個(gè)連續(xù)相宜稀釋度

吸取1ml菌液根據(jù)0.3mL、0.4mL分別涂布于

3塊90mmBaird-Parker平板上（做平行試驗(yàn)）35℃，45~48h

報(bào)告

FDABAM金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)——MPN法

檢樣（稀釋液）

選擇3個(gè)相宜的連續(xù)稀釋度的樣品稀釋液，

每個(gè)稀釋度接種三管10%NaClTSB肉湯，

1mL

℃，482h

從生長的管中接種1環(huán)劃線于Baird-Parker平板上

℃，48h

報(bào)告

FDABAM金黃色葡萄球菌確證試驗(yàn)

1.凝固酶試驗(yàn)

z方法：從平板上至少挑取1個(gè)可疑金黃色葡萄球菌菌落，移種到TSB/BHI肉湯中，置35℃培育18-24h。取肉湯培育物0.3mL同0.5mL凝固酶試驗(yàn)兔血漿充分混合，置35℃培育，定時(shí)觀看是否有凝塊形成，至少觀看6h。試驗(yàn)中需同時(shí)做已知陽性和陰性對(duì)比。

z結(jié)果判定：以內(nèi)容物完全凝固，使試管倒置或傾斜時(shí)不流淌為陽性。部分凝固（2+和3+）的必需進(jìn)行生化鑒定加以證明。

FDABAM金黃色葡萄球菌確證試驗(yàn)

2.革蘭氏染色

z對(duì)全部的可疑培育物都要進(jìn)行革蘭氏染色。

3.生化鑒定

z過氧化氫酶試驗(yàn)

z葡萄糖厭氧利用試驗(yàn)

z甘露醇厭氧利用試驗(yàn)

z金葡溶菌酶敏感性試驗(yàn)

z耐熱核酸酶試驗(yàn)（幫助）

ISO金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)——MPN法

檢樣（xg+9xmL稀釋液）

適當(dāng)十倍稀釋樣品選擇3

每個(gè)稀釋度接種三管，

37℃，24~48h

接種1環(huán)培育物于平板上

37℃，48h

報(bào)告

沙門氏菌屬簡介

z1880年E.Berth首先發(fā)覺傷寒沙門氏菌，1885年Salmon與Smith又分別出豬霍亂沙門氏菌，以后取Salmon氏之名為本菌屬之名。

z沙門氏菌屬是一群符合腸桿菌科定義并與其血清學(xué)相關(guān)的革蘭氏陰性、需氧性、無芽孢桿菌。本菌屬種類繁多，抗原結(jié)構(gòu)簡單，現(xiàn)已發(fā)覺2000多個(gè)血清型，我國已發(fā)覺血清型近200個(gè)。

沙門氏菌屬——生物學(xué)特性

形態(tài)特征：

革蘭氏陰性，大小為1~30.4~0.9μm的兩端鈍圓的短桿菌，無芽孢，一般無莢膜，除雞沙門氏菌和雛沙門氏菌以外，都有周身鞭毛，運(yùn)動(dòng)力強(qiáng)。

培育特性：

℃都可生長，最適生長溫度為37℃，最適pH為6.8~7.8。

z養(yǎng)分瓊脂平板上：35~37℃培育18~24h，其菌落大小一般為2~3mm，光滑、潮濕、無色、半透亮?????、邊緣整齊。

z血平板上：中等大小的灰白色菌落。z沙門氏菌需氧或兼性厭氧，10-42

沙門氏菌屬的抗原

z菌體抗原（O抗原）

z表面抗原（K抗原）：Vi抗原和M抗原

z鞭毛抗原（H抗原）

z纖毛抗原

FDABAM沙門氏菌檢驗(yàn)流程

前增菌

選擇性增菌

42℃、24h

℃、24h（水浴培育）

含菌量低

分別培育劃線接種選擇性培育基（℃、24~48h（BS）

生化鑒定2個(gè)可疑菌（包括典型和非典型各2個(gè)）

接種TSI三糖鐵、LIA賴氨酸鐵高層斜面（LIA高層深4cm）

（松蓋以保持有氧條件防止產(chǎn)生過多H2S）

℃、242h

棄去衛(wèi)矛醇、氰化鉀、丙二酸鈉、吲哚試驗(yàn)

陽性陰性

血清學(xué)——沙門氏菌的分類

報(bào)告結(jié)果

ISO6579沙門氏菌檢驗(yàn)流程

前增菌

25g樣+225mLBPW

選擇性增菌

371℃、243h

分別培育37℃、24~48h（BS）

每個(gè)平板挑取至少5個(gè)可疑菌進(jìn)行純培育和確認(rèn)試驗(yàn)

37℃、243h

生化鑒定TSI、尿素酶、賴氨酸脫羧酶、β-牛乳糖、V-P、吲哚試驗(yàn)

血清學(xué)——沙門氏菌的分類

報(bào)告結(jié)果

沙門氏菌檢驗(yàn)選擇性分別培育

XLD瓊脂：

FDABAM——典型菌落：粉色菌落，帶或不帶黑色中心。很多沙門氏菌培育物可呈現(xiàn)大的具光澤的黑色中心或幾乎為全部黑色的菌落。

——非典型菌落：黃色帶或不帶黑色中心。ISO——中心黑色、四周由于指示劑顏色的轉(zhuǎn)變而消失紅色的稍微透亮?????帶。

菌名菌落形態(tài)

鼠傷寒沙門氏菌紅色，有黑心

傷寒沙門氏菌紅色，有黑心

弗氏志賀氏菌紅色

大腸埃希氏菌黃色，有膽鹽沉淀環(huán)

-糞鏈球菌

沙門氏菌檢驗(yàn)選擇性分別培育

BS瓊脂：

FDABAM——典型菌落：產(chǎn)硫化氫菌落黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色，菌落四周的培育基通常開頭呈褐色，但伴隨培育時(shí)間的延長而變?yōu)楹谏?，并有暈環(huán)效應(yīng)；

——非典型菌落：有些菌株不產(chǎn)生硫化氫，形成灰綠色菌落，四周培育基不變色。

沙門氏菌檢驗(yàn)選擇性分別培育

HE瓊脂：

FDABAM——典型菌落：蘭綠色至蘭色，多數(shù)菌株產(chǎn)硫化氫，菌落帶或不帶黑色,中心或幾乎全黑色。

——非典型菌落：乳糖陽性的菌株為黃色中心黑色或全黑色。

沙門氏菌檢驗(yàn)生化鑒定

TSI：

典型反應(yīng)：斜面產(chǎn)堿（K）：紅色；底部產(chǎn)酸（A）：黃色；產(chǎn)H2S：黑色（少數(shù)不產(chǎn)）

沙門氏菌檢驗(yàn)——幾點(diǎn)留意

z冷凍樣品解凍需在45℃以下，有自動(dòng)調(diào)溫器自控的水浴鍋內(nèi)不斷攪拌進(jìn)行15min或在2-8℃，18小時(shí)內(nèi)軟化。

–為保證檢驗(yàn)的精確?????性，必需在選擇性培育基上挑取足夠數(shù)量的菌落進(jìn)行生化和血清學(xué)鑒定。z進(jìn)行生化反應(yīng)時(shí)，應(yīng)以純培育物進(jìn)行試驗(yàn)，如消失血清學(xué)陽性，而生化反應(yīng)特征不符合時(shí)，應(yīng)對(duì)接種物進(jìn)行純化，用純化后的培育物重新進(jìn)行生化試驗(yàn)。

–測(cè)試中應(yīng)同時(shí)接種陽性對(duì)比菌株。

李斯特菌屬簡介

9版中，李斯特菌屬有7個(gè)種：單核細(xì)胞增生李斯特氏菌（L.

monocytogenes）、英諾克李斯特氏菌（L.innocua）、西爾李斯特氏菌（L.seeligeri）、威爾斯李斯特氏菌（L.welshimeri）、綿羊李斯特氏菌（L.ivanovvi）、格氏李斯特氏菌（L.grayi）、默氏李斯特氏菌（L.murrayi）。

z單核細(xì)胞增生李斯特氏菌是李斯特氏菌病的致病菌，可引起動(dòng)物的感染，也可引起人的感染。

z《伯杰氏鑒定細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》第

單核細(xì)胞增生李斯特氏菌——生物學(xué)特性

形態(tài)特征：

革蘭氏陽性短桿菌，大小為0.4~0.50.5~2μm，兩端鈍圓，常兩兩相串成彎曲及V形，間或有球狀、雙球狀、短鏈狀，但很少有長鏈狀，兼性厭氧、無芽孢，一般不形成莢膜。該菌有4根周毛和1根端毛，周毛易脫落。20℃培育后可見到許多鞭毛。

培育特性：

生長溫度為2~42℃（冷藏不能阻擋該菌的生長），最適生長溫度為35~37℃。20~25℃培育有動(dòng)力，37℃培育動(dòng)力消逝；在顯微鏡下觀看該菌新奇的室溫肉湯培育物可見翻筋斗運(yùn)動(dòng)。z在pH3.8~4.4仍能生長，在pH中性至弱堿性（9.6）、氧分壓略低、二氧化碳張力略高的條件下該菌生長良好，在6.5%NaCl肉湯中也能良好生長。

z血平板上：菌落通常不大呈灰白色，刺種血平板可產(chǎn)生窄小的β溶血環(huán)。z

FDABAM單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢驗(yàn)流程25g

增菌EB增菌液基礎(chǔ)225mL

30℃4h

℃44h

選擇性分別培育接種

和PALCAM

35℃24-48h

生化鑒定

過氧化氫酶試驗(yàn)

革蘭氏染色溶血試驗(yàn)

ISO單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢驗(yàn)流程

測(cè)試樣品（xg或xmL）+9xmL一次增菌培育基（HalfFraser肉湯）30℃培育242h

1mL培育液加入Oxford瓊脂

瓊脂

（30℃、35℃或

37℃培育24-48h

劃線接種和挑取可疑菌接種TSAYE培育基

過氧化氫酶試驗(yàn)

革蘭氏染色

單核細(xì)胞增生李斯特菌的確證：

溶血試驗(yàn)

碳源利用試驗(yàn)

CAMP（協(xié)同溶血）試驗(yàn)

單核細(xì)胞增生李斯特氏菌——溶血試驗(yàn)

制備5~7%羊血瓊脂平板。

z挑取TSAYE平板上的典型菌落刺種血平板，刺種時(shí)避開接觸到平板底部和使瓊脂裂開，同時(shí)接種陽性（單核細(xì)胞增生李斯特氏菌）和陰性（英諾克李斯特氏菌）對(duì)比。

z單增呈現(xiàn)狹窄、清楚、光明的β-溶血；

z西爾李氏菌消失弱的溶血現(xiàn)象；

z綿羊李氏菌通常呈寬的、輪廓清楚的β-溶血；

z英諾克李氏菌不產(chǎn)生溶血現(xiàn)象。

單核細(xì)胞增生李斯特氏菌——協(xié)同溶血試驗(yàn)（CAMP）

z方法：在羊血瓊脂平板上平行接種β-溶血金黃色葡萄球菌（S.aureus）和馬紅球菌(R.equi),在它們中間垂直劃線接種可疑菌，與兩線相近但不相交，在30℃培育24h-48h,檢查平板中垂直接種點(diǎn)對(duì)溶血環(huán)的影響。

z結(jié)果：靠近金黃色葡萄球菌接種點(diǎn)的單增李斯特氏菌的溶血增加，西爾李斯特氏菌的溶血也增加，綿羊李斯特氏菌在馬紅血球四周的溶血增加。

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