現(xiàn)代生藥學(xué)概論

現(xiàn)代生藥學(xué)概論分子生藥學(xué)局部MolecularPharmacognosy1整理ppt第一篇概論第二篇分子生藥學(xué)研究方法及其根本技術(shù)

第三篇分子生藥學(xué)的研究領(lǐng)域內(nèi)容2整理ppt1生藥及生藥學(xué)的定義

2生藥學(xué)的開(kāi)展歷程

3分子生藥學(xué)產(chǎn)生的背景

4分子生藥學(xué)定義及其研究對(duì)象5分子生藥學(xué)研究?jī)?nèi)容6分子生藥學(xué)研究的方法7分子生藥學(xué)與相關(guān)學(xué)科的關(guān)系第一篇概論3整理ppt一、生藥及生藥學(xué)的定義生藥:來(lái)源于天然的、未經(jīng)加工或只經(jīng)簡(jiǎn)單加工的植物、動(dòng)物和礦物藥材。相當(dāng)于中藥材。另外直接用于醫(yī)療保健或作為醫(yī)藥用原料、輔料的天然藥物，也列入生藥的范疇。如植物中制取的淀粉、粘液質(zhì)、揮發(fā)油；自植物和動(dòng)物中制取的油質(zhì)、蠟類，以及某些醫(yī)用敷料如石棉、滑石粉、白陶土等。生藥學(xué)：〔Pharmakognosie,Pharmacognosy〕：簡(jiǎn)單講：是應(yīng)用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù),對(duì)生藥進(jìn)行綜合研究的一門科學(xué)。詳言之：生藥學(xué)是利用本草學(xué)、植物學(xué)、動(dòng)物學(xué)、化學(xué)〔包括植物化學(xué)、藥物分析化學(xué)、生物化學(xué)等〕、藥理學(xué)、中醫(yī)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)和分子生物學(xué)等學(xué)科的理論知識(shí)和現(xiàn)代科學(xué)知識(shí)，來(lái)研究生藥的名稱、來(lái)源、生產(chǎn)、采制、鑒定、化學(xué)成分、品質(zhì)評(píng)價(jià)、細(xì)胞組織培養(yǎng)、醫(yī)療用途及資源開(kāi)發(fā)利用等方面的科學(xué)。4整理ppt二、生藥學(xué)的開(kāi)展歷程大致可分為四個(gè)時(shí)期：(1)傳統(tǒng)本草學(xué)時(shí)期：從古代到19世紀(jì)初。對(duì)于生藥的認(rèn)識(shí)主要靠感官和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，本草所記載的內(nèi)容以醫(yī)療效用為主，兼及生藥的名稱、產(chǎn)地、形態(tài)和感官鑒別特征。(2)近代商品生藥學(xué)時(shí)期：1915-1930年，生藥學(xué)成為一門獨(dú)立的學(xué)科，當(dāng)時(shí)主要的內(nèi)容是研究商品生藥的來(lái)源，鑒定商品生藥的真?zhèn)蝺?yōu)劣。在此期間，顯微方法開(kāi)始用于生藥的鑒定，同時(shí)化學(xué)定性和定量方法也應(yīng)用于生藥鑒定中。5整理ppt(3)現(xiàn)代生藥學(xué)新時(shí)期：1930年-至今。主要表達(dá)在以下方面：①生藥有效成分研究進(jìn)一步深入。②生藥鑒定方面應(yīng)用了電子顯微鏡和Ｘ－射線衍射法觀察和研究生藥組織的超微結(jié)構(gòu)，免疫電泳法用于種子生藥的鑒別，利用各種生藥的紫外或紅外光譜建立生藥的指紋鑒別數(shù)據(jù)庫(kù)的研究正在開(kāi)展之中。③藥用植物的組織培養(yǎng)，涉及到遺傳育種和突變品系等多方面的研究，利用細(xì)胞和組織培養(yǎng)方法來(lái)生成藥用植物的有效物質(zhì)，已獲得進(jìn)展。④分類學(xué)研究的開(kāi)展，通過(guò)生藥化學(xué)成分的研究，作為分類學(xué)特征。⑤在資源開(kāi)發(fā)利用方面，重視海洋藥用生物的研究，并出現(xiàn)海洋生藥學(xué)。有關(guān)生化藥效、藥效藥理評(píng)價(jià)的臨床生藥學(xué)也已產(chǎn)生。(4)自然生藥學(xué)時(shí)期〔20世紀(jì)末〕：本時(shí)期的最大特點(diǎn)是數(shù)理化科學(xué)原理與實(shí)驗(yàn)技術(shù)廣泛應(yīng)用于生藥的研究中，使人們從宏觀和微觀來(lái)復(fù)原和揭示生藥的自然屬性。日本學(xué)者朝比奈泰彥的話“藥學(xué)的研究從生藥開(kāi)始，最終又將回到生藥的研究〞，預(yù)示了生藥學(xué)新時(shí)期的到來(lái)。6整理ppt三、分子生藥學(xué)產(chǎn)生的背景生藥研究存在的問(wèn)題：1珍稀瀕危藥用資源和利用及保護(hù)?中國(guó)珍稀瀕危植物?——保護(hù)物種388種，藥用約102種，其中屬中藥33種。2“道地性〞的研究表現(xiàn)型phenotype=基因型genotype+環(huán)境飾變environmentalmodification3質(zhì)量的控制研究農(nóng)藥殘留、重金屬污染、有效成分等。7整理ppt產(chǎn)生的理由：(1)1953年Watson和Crick對(duì)DNA結(jié)構(gòu)的發(fā)現(xiàn)標(biāo)志著生命科學(xué)的開(kāi)展進(jìn)入了一個(gè)新紀(jì)元。8整理ppt9整理pptDNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型的生物學(xué)意義:第一次提出了遺傳信息的儲(chǔ)存方式以及DNA復(fù)制的分子機(jī)理。10整理ppt(2)分子生物學(xué)快速開(kāi)展并在生物醫(yī)學(xué)各個(gè)領(lǐng)域滲透應(yīng)用，使得一大批交叉學(xué)科、邊緣學(xué)科和前沿學(xué)科應(yīng)動(dòng)而生，都開(kāi)展到了分子水平。生藥學(xué)主要研究動(dòng)物和植物性生藥，涉及到許多生物學(xué)的理論和方法，因此生藥學(xué)也不例外。(3)生藥主要來(lái)源于動(dòng)物和植物，任何植物、動(dòng)物的每個(gè)細(xì)胞中都含有儲(chǔ)藏、復(fù)制和傳遞遺傳信息的物質(zhì)根底——DNA，這也是分子生物學(xué)研究的物質(zhì)根底，使分子生物學(xué)的理論和方法能在生藥學(xué)中廣泛使用。(4)從生藥學(xué)研究動(dòng)物性和植物性生藥的層次來(lái)看，已逐漸從有機(jī)體、組織、器官、細(xì)胞開(kāi)展到基因水平，所以開(kāi)展生藥學(xué)的科學(xué)現(xiàn)代化，必然要與分子生物學(xué)密切聯(lián)系，理所當(dāng)然地將生藥學(xué)的研究推進(jìn)到分子水平。11整理ppt四、分子生藥學(xué)定義及其研究對(duì)象分子生藥學(xué)：在分子水平上研究生藥的鑒定、生產(chǎn)和成分的一門科學(xué)，所依據(jù)的主要是生藥學(xué)與分子生物學(xué)的理論和方法，是生藥學(xué)的一個(gè)極富前瞻性和前景性的分支。研究對(duì)象：主要為植物、動(dòng)物性生藥，只是研究層次是在基因水平。基因——細(xì)胞——器官——有機(jī)體——居群——群落等6個(gè)主要的生物層次。〔生物學(xué)譜〕12整理ppt五、分子生藥學(xué)研究?jī)?nèi)容

分子生藥學(xué)研究?jī)?nèi)容的科學(xué)內(nèi)涵就是研分遺傳物質(zhì)DNA的異同及其表達(dá)與生藥真?zhèn)蝺?yōu)劣的關(guān)系，其中遺傳物質(zhì)DNA的表達(dá)是分子生物學(xué)要控索研究的難點(diǎn)之一。具體內(nèi)容：(1)鑒定生藥：形態(tài)分類學(xué)——RFLP、RAPD等。(2)生產(chǎn)方面：抗病蟲(chóng)害、道地性藥材等。(3)有效成分方面：轉(zhuǎn)基因器官培養(yǎng)技術(shù)。13整理ppt六、分子生藥學(xué)研究的方法生藥學(xué)的研究就是為了控制生藥的“真?zhèn)蝺?yōu)劣〞，從而為臨床提供貨真質(zhì)優(yōu)的生藥。研究生藥學(xué)的方法按不同學(xué)科的應(yīng)用分為：1.分類法的研究方法：將原料藥的原植物或動(dòng)物，進(jìn)行分類學(xué)的研究，從而定下其品種，解決原動(dòng)物或植物的品種混亂問(wèn)題。涉及的方法有RFLP〔RestractionFragmentLengthPolymorphism〕、RAPD〔RandomlyAmplifiedPolymorphicDNA〕、AFLP〔AmplifiedFragmentLengthPolymorphism〕等。2.化學(xué)研究方法：對(duì)生藥的化學(xué)成分，進(jìn)行定性和定量的測(cè)定。因?yàn)榛瘜W(xué)成分是藥效的物質(zhì)根底，又是加工炮制和制劑制備的根底。此法為生藥質(zhì)量控制提供客觀而具體的指標(biāo)。TLC、HPLC、CE、MS等。14整理ppt3.物理學(xué)研究方法：包括生藥本身的物理性質(zhì)的測(cè)定和在形態(tài)、化學(xué)、生物活性等方法研究中對(duì)物理儀器的使用。藥物本身的物理性質(zhì)包括水分多少、顏色、硬度乃至形態(tài)等。水分含量測(cè)定，顯微鏡、電子顯微鏡對(duì)生藥的組織形態(tài)鑒定等。4.藥效學(xué)研究方法：藥物的質(zhì)量控制，最根本指標(biāo)或稱標(biāo)準(zhǔn)是其藥效如何。中醫(yī)理論指導(dǎo)或臨床實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)。15整理ppt七、分子生藥學(xué)與相關(guān)學(xué)科的關(guān)系生物化學(xué)分子系統(tǒng)學(xué)中藥鑒定學(xué)中藥資源學(xué)天然藥物化學(xué)保護(hù)生物學(xué)藥用植物育種學(xué)生藥學(xué)分子生物學(xué)分子生藥學(xué)藥用植物學(xué)16整理ppt1植物DNA方法與技術(shù)

2植物RNA方法和技術(shù)

3植物基因表達(dá)和調(diào)控的研究技術(shù)——分子雜交

核酸分子雜交

Westren雜交

4植物遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)——植物基因槍轉(zhuǎn)化技術(shù)

5與分子生藥學(xué)相關(guān)的Internet應(yīng)用第二篇分子生藥學(xué)研究方法及其根本技術(shù)17整理ppt植物DNA、RNA的別離技術(shù)核酸的別離與提取是分子生物學(xué)研究中很重要的根本技術(shù)。樣品質(zhì)量將直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)的成敗。但是不同的研究目的對(duì)DNA的純度和量的要求不同，因此提取方法也不同。一般而言，一個(gè)好的DNA別離程序應(yīng)符合以下3個(gè)主要標(biāo)準(zhǔn)：〔1〕所得DNA純度應(yīng)滿足下游操作的要求：如用于RFLP分析的DNA，其純度的要求為可用限制性內(nèi)切酶完全酶解并可成功地轉(zhuǎn)移到膜上進(jìn)行Southern雜交；用于PCR分析的DNA那么不應(yīng)含干擾PCR反響的污染物?！?〕所得DNA應(yīng)當(dāng)完整，電泳檢查時(shí)可給出準(zhǔn)確性高、重復(fù)性好的遷移帶型。〔3〕所得DNA應(yīng)有足夠的量。另外，操作方法應(yīng)當(dāng)快速、簡(jiǎn)便、價(jià)格低廉，并盡可能防止使用有毒試劑。18整理pptCTAB〔CetyltrimethylAmmoniumBromide溴化十六烷三甲基銨〕法CTAB是一種去污劑，這種方法的原理是：一定濃度的CTAB與核酸結(jié)合并通過(guò)離心形成CTAB-核酸復(fù)合沉淀，而多糖等成分留在上相中。要使CTAB-核酸復(fù)合物的分開(kāi)那么先溶于高鹽溶液中，再用乙醇沉淀核酸，CTAB溶于乙醇中。所得核酸DNA大小為20-50kb。很少有RNA干擾，必要時(shí)可用RNase去除殘留RNA。19整理pptRFLP技術(shù)生物個(gè)體間的差異，本質(zhì)上是DNA水平上的差異。這是由于進(jìn)化過(guò)程中種種原因引起的基因突變和DNA分子結(jié)構(gòu)重排，造成了分子內(nèi)核苷酸排列順序的改變，當(dāng)這種改變涉及到限制性酶切位點(diǎn)時(shí)，即稱為限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)。多態(tài)即非單態(tài)性，不一樣之意。也就是說(shuō)，如果兩個(gè)DNA分子完全相同，用同劑量的同種限制性內(nèi)切酶在相同條件下消化，所得的限制性內(nèi)切酶譜將相同。如果兩個(gè)DNA分子根本相同，只是在一處或幾處發(fā)生某種差異，哪怕是很小的差異，消化后兩DNA分子的限制性酶譜的條帶方式將出現(xiàn)不同，即產(chǎn)生多態(tài)性。20整理pptDNA多態(tài)性根據(jù)其產(chǎn)生的方式根本分為兩種：一是堿基對(duì)突變類型，即限制性內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)是發(fā)生了單個(gè)堿基替換，使原有切點(diǎn)消失或產(chǎn)生新的切點(diǎn)；另一類是結(jié)構(gòu)重排型，這是由DNA內(nèi)部發(fā)生較大的順序變化引起的。21整理pptRFLP分析在分子生藥學(xué)中的應(yīng)用1.品種及種質(zhì)資源的鑒定2.促進(jìn)異源種質(zhì)的轉(zhuǎn)移和利用3.研究藥用植物的親緣和進(jìn)化關(guān)系4.檢測(cè)與RFLP標(biāo)記連鎖的主基因5.構(gòu)建RFLP標(biāo)記與數(shù)量性狀遺傳位點(diǎn)的連鎖圖22整理pptDNA與PCR技術(shù)23整理pptPCR技術(shù)24整理pptPCR循環(huán)擴(kuò)增原理示意圖25整理pptPCR技術(shù)在分子生藥學(xué)中的應(yīng)用1.對(duì)屬性特異的DNA序列擴(kuò)增和直接測(cè)序以用于系統(tǒng)發(fā)育或親緣關(guān)系的分析，也可用于鑒定品種；2.通過(guò)簡(jiǎn)單純化從復(fù)雜生物樣品的混合物中鑒定病原體和土壤微生物，用于藥用植物的基因工程。26整理pptRAPD技術(shù)RAPD的特點(diǎn):1.無(wú)需專門設(shè)計(jì)RAPD擴(kuò)增反響的引物,也無(wú)需預(yù)知被研究的生物基因組核苷酸順序,引物是隨機(jī)合成或是任意選定的。引物長(zhǎng)度一般為9-10個(gè)寡核苷酸。2.每個(gè)RAPD反響中，僅加單個(gè)引物，通過(guò)引物和模板DNA鏈隨機(jī)配對(duì)實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增，擴(kuò)增沒(méi)有特異性。3.退火溫度較低，一般為36℃，這能保證短核苷酸引物與模板的穩(wěn)定配對(duì)，同時(shí)也允許了適當(dāng)?shù)腻e(cuò)誤配對(duì)，以擴(kuò)大引物在基因組DNA中配對(duì)的隨機(jī)性。4.較之常規(guī)PCR，RAPD反響易于程序化。利用一套隨機(jī)引物，得到大量DNA分子標(biāo)記，可以借助計(jì)算機(jī)進(jìn)行系統(tǒng)分析。27整理pptRAPD分析在分子生藥學(xué)中的應(yīng)用1.藥用生物多樣性：應(yīng)用RAPD技術(shù)進(jìn)行藥用植物生物多樣性研究，可以在遺傳多樣性水平上了解天然產(chǎn)物多樣性與物種、生態(tài)及地理分布的關(guān)系，挖掘潛在的藥物資源，為開(kāi)發(fā)新藥尋找途徑。2.RAPD標(biāo)記可用于生藥鑒別，在DNA分子水平上鑒別生物不同種、亞種、變種甚至株。3.RAPD標(biāo)記亦可用于遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建，指導(dǎo)藥用植物育種，防止品種間雜化和自交，選育優(yōu)良性狀品種。28整理pptAFLP技術(shù)AFLP技術(shù)(AmplifiedFragmentLengthPolymorphism擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性，是1993年由荷蘭KEY-GENE公司的科學(xué)家Zabeau和Vos創(chuàng)立開(kāi)展的一種新的DNA分子標(biāo)記技術(shù)及檢測(cè)DNA多態(tài)性的新方法，并于1993年獲得歐洲專利局專利。AFLP技術(shù)是限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)和聚合酶鏈?zhǔn)椒错?PCR)技術(shù)相結(jié)合的產(chǎn)物，可用于所有物種。它克服了RFLP技術(shù)復(fù)雜、RAPD穩(wěn)定性較差的缺點(diǎn)，又兼具兩者之長(zhǎng)。AFLP標(biāo)記多態(tài)性強(qiáng)，譜帶豐富且清晰可辨，試驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性好，被認(rèn)為是一種較為理想的、高效的分子標(biāo)記技術(shù)。29整理pptAFLP技術(shù)的根本原理是通過(guò)對(duì)基因組DNA的限制性酶切片段進(jìn)行選擇性擴(kuò)增而揭示其多態(tài)性，亦即將基因組DNA經(jīng)限制性內(nèi)切酶雙酶切后，形成分子大小不等的限制性酶切片段,酶切后的DNA片段連上接頭形成帶接頭的特異片段，作為PCR擴(kuò)增的模板，特異性片段經(jīng)PCR擴(kuò)增，只有那些與引物的選擇性堿基嚴(yán)格配對(duì)的DNA片段才能被擴(kuò)增出來(lái)，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳將特異的限制性片段別離。根本原理及優(yōu)點(diǎn)AFLP技術(shù)的特點(diǎn)是DNA用量少、靈敏度高，不需要預(yù)先知道基因組的信息。一般一次反響可得到50～150個(gè)擴(kuò)增片段，盡管其多態(tài)性不一定是最高的，但一次試驗(yàn)?zāi)鼙绕渌鼧?biāo)記得到更多數(shù)量的帶，被認(rèn)為是效率最高的標(biāo)記。AFLP采用長(zhǎng)引物和更高的退火溫度進(jìn)行PCR，比RAPD等其他以PCR為根底的分子標(biāo)記具有更好的重復(fù)性。30整理pptAFLP在分子生藥學(xué)中的應(yīng)用AFLP技術(shù)可產(chǎn)生豐富而穩(wěn)定的遺傳標(biāo)記，它可以用于藥用植物遺傳分析的各個(gè)方面，如分類、系統(tǒng)發(fā)育、品種鑒別、遺傳圖譜構(gòu)建及目的基因的定位等。31整理ppt植物基因表達(dá)和調(diào)控的研究技術(shù)——分子雜交分子雜交技術(shù)從開(kāi)始應(yīng)用到現(xiàn)在已有30余年歷史，最初出現(xiàn)的核酸分子雜交主要是在DNA與RNA之間進(jìn)行。RNA是DNA的一條鏈轉(zhuǎn)錄而成的，因此RNA與DNA模板鏈之間存在對(duì)應(yīng)的堿基互補(bǔ)關(guān)系。在堿性環(huán)境、加熱或參加變性劑等條件下，雙鏈DNA之間的氫鍵被破壞，兩條鏈解開(kāi)成為兩條單鏈。這時(shí)如果參加其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RNA并在一定離子強(qiáng)度和溫度下保溫，那么RNA與模板鏈可形成穩(wěn)定的RNA-DNA異質(zhì)雙鏈。形成異質(zhì)雙鏈的過(guò)程稱為雜交。由于雜交是在分子水平進(jìn)行的，所以稱為分子雜交，形成的異質(zhì)雙鏈分子稱為雜交分子。隨后這一技術(shù)又開(kāi)展到具有相似核苷酸序列的不同DNA分子之間的雜交，以及RNA分子、蛋白質(zhì)分子之間的雜交。32整理ppt分子雜交主要包括兩大局部?jī)?nèi)容，一是核酸分子雜交，其中又包括Southern雜交和Northern雜交；二是屬于蛋白質(zhì)分子雜交的Western雜交。二者分別在基因整合、轉(zhuǎn)錄和表達(dá)的不同階段對(duì)目的基因進(jìn)行檢測(cè)和定位。分子雜交實(shí)驗(yàn)主要涉及三大局部的內(nèi)容：〔1〕雜交探針的制備；〔2〕被檢的核酸或蛋白質(zhì)樣品制備；〔3〕印跡及雜交。33整理pptSouthern雜交Southern轉(zhuǎn)移是用一塊硝酸纖維素膜或尼龍膜貼在瓊脂糖凝膠上，通過(guò)一定的機(jī)械壓力以及毛細(xì)作用，在瓊脂糖凝膠中的緩沖液滲出的同時(shí)也把DNA分子帶出凝膠結(jié)合有膜上，使轉(zhuǎn)移后的膜上“復(fù)制〞有所有的瓊脂糖凝膠中的DNA條帶。用膜來(lái)作雜交不但方便得多，而且結(jié)果清晰，背景低。具體過(guò)程是將被檢的DNA樣品提取出來(lái)，用限制性內(nèi)切酶酶切，生成的酶切片段中，必有目的基因片段或含目的基因序列的片段，用瓊脂糖凝膠電泳別離，各片段按分子大小依次分開(kāi)，排布在凝膠上。利用印跡技術(shù)將變性的各酶切片段由凝膠轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜或尼龍膜上，經(jīng)烘干或紫外線照射處理，使印跡的各片段與膜牢固結(jié)合，這樣使各片段在膜上的相互位置與在凝膠上相同。34整理ppt印跡完成后，經(jīng)預(yù)雜處理，掩蓋膜上的非特異性雜交位點(diǎn)后，將膜放入含有單鏈或經(jīng)變性處理成單鏈的探針雜交液中，在適宜的條件下進(jìn)行雜交。膜上與探針同源的單鏈序列，可通過(guò)堿基互補(bǔ)作用與探針雜交成雙鏈，從而使探針固定在相應(yīng)的位置上。目的基因與探針同源，凡含有目的基因的序列的片段都可以發(fā)生雜交，形成帶標(biāo)記的特異性雜交體。在雜交過(guò)程中或許也會(huì)發(fā)生一些非特異性的雜交及探針與膜上非特異性位點(diǎn)結(jié)合，這些非特異性的結(jié)合及未結(jié)合的游離的探針可以通過(guò)雜交后的漂洗過(guò)程而逐步除去。35整理ppt（a）（b）（c）（d）（e）基因組DNADNA限制片段硝酸纖維素濾膜同探針同源雜交的基因DNA片段X光底片36整理pptNorthern雜交經(jīng)變性凝膠電泳別離的各RNA由凝膠轉(zhuǎn)移到固相膜上稱為Northern雜交。印跡原理及方法同于Southern雜交。Western雜交Western雜交是檢測(cè)蛋白質(zhì)的一種方法。當(dāng)目的基因正常表達(dá)時(shí)，細(xì)胞內(nèi)會(huì)產(chǎn)生一定量的相應(yīng)的特異蛋白，即目的蛋白。將此目的蛋白提取出來(lái)，溶解于含去污劑和復(fù)原劑的溶液中，經(jīng)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳使蛋白質(zhì)按分子大小別離，將別離的各蛋白質(zhì)條帶原位轉(zhuǎn)移到固相膜上，膜在高濃度的蛋白質(zhì)溶液中溫育，以封閉非特異性位點(diǎn)。然后參加特異抗體〔一抗〕，印跡上的目的蛋白〔抗原〕與一抗結(jié)合后，再參加能與一抗專一結(jié)合的標(biāo)記的二抗，最后通過(guò)二抗上標(biāo)記化合物的性質(zhì)進(jìn)行檢出。37整理ppt植物遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)植物遺傳轉(zhuǎn)化〔genetictransformation〕是指利用重組DNA技術(shù)，細(xì)胞組織培養(yǎng)技術(shù)或種質(zhì)系統(tǒng)轉(zhuǎn)化等技術(shù)，將外源基因?qū)胫参锛?xì)胞或組織，獲得轉(zhuǎn)基因植物的技術(shù)。目前，轉(zhuǎn)化技術(shù)大體可分為三類：1農(nóng)桿菌介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移。2以原生質(zhì)體或細(xì)胞作為受體的直接基因轉(zhuǎn)移。如電擊、基因槍法、超聲波法等。3種質(zhì)系統(tǒng)的基因轉(zhuǎn)移。如子房注射、種胚及花粉等途徑導(dǎo)入外源基因。38整理ppt基因槍法〔particlebombardment,PB〕又稱粒子轟擊技術(shù)、生物發(fā)射技術(shù)或高速微粒子發(fā)射技術(shù)，是藉高速度運(yùn)動(dòng)的金屬微粒將附著于其外表的核酸分子引入受體細(xì)胞的一種遺傳物質(zhì)導(dǎo)入技術(shù)。優(yōu)點(diǎn)：具有簡(jiǎn)易、快速、每槍所需DNA量少，而且可將外源DNA直接導(dǎo)入帶壁的植物細(xì)胞，特別是通過(guò)葉綠體膜轉(zhuǎn)入葉綠體，這是其它方法所難于比較的。39整理ppt1藥用植物的分子系統(tǒng)學(xué)研究

2藥用植物種質(zhì)資源的分子生物學(xué)研究

3生藥鑒定的分子標(biāo)記研究

4藥用植物有效成分基因調(diào)控研究

5藥用植物轉(zhuǎn)基因器官和細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)天然活性化合物第三篇分子生藥學(xué)的研究領(lǐng)域40整理ppt一、分類系統(tǒng)學(xué)研究〔一〕、分類系統(tǒng)之演變:人為分類系統(tǒng)：?本草綱目?——草谷菜果木進(jìn)化論前的自然系統(tǒng)：主要以形態(tài)親緣關(guān)系分類為根底，沒(méi)有反映親緣進(jìn)化關(guān)系。系統(tǒng)發(fā)育系統(tǒng)：?物種起源?、恩格勒系統(tǒng)、哈欽松系統(tǒng)等。41整理ppt〔二〕、研究方法之演變1.傳統(tǒng)分類法:2.解剖分類法:3.胚胎分類法:4.細(xì)胞分類法:5.化學(xué)分類法:6.數(shù)值分類法:7.分支分類法:8.分子系統(tǒng)學(xué):42整理ppt〔三〕、分子系統(tǒng)學(xué)定義、內(nèi)涵及意義用分子生物學(xué)方法解決系統(tǒng)分類學(xué)的問(wèn)題，為不同分類群的命名，劃分及相互間的關(guān)系提供DNA或RNA的遺傳依據(jù)的方法和理論，稱為“分子系統(tǒng)學(xué)〞。藥用植物的分子系統(tǒng)學(xué)研究也就是用分子系統(tǒng)學(xué)的方法和理論對(duì)藥用植物的親緣進(jìn)化進(jìn)行研究。意義：1進(jìn)行藥用植物的鑒定和分類：2尋找新的藥用植物：藥用植物的親緣關(guān)系——化學(xué)成分——療效3保護(hù)藥用植物資源：43整理ppt例子44整理ppt二、藥用植物種質(zhì)資源的分子生物學(xué)研究種質(zhì)資源是藥用植物生產(chǎn)的源頭，種質(zhì)的優(yōu)劣對(duì)藥材(生藥)的產(chǎn)量和質(zhì)量具有決定性的作用，種質(zhì)資源學(xué)是一門專門研究作物品種的好壞并從中選優(yōu)去劣的科學(xué)，藥用植物種質(zhì)資源研究是生藥研究的根底和起點(diǎn)，對(duì)生藥的開(kāi)發(fā)和可持續(xù)利用起著至關(guān)重要的作用。〔一〕、定義：廣義的“藥用植物種質(zhì)資源〞是泛指一切可用于藥物開(kāi)發(fā)的植物遺傳資源，是所有藥用植物物種(包括種下分類單位)的總和。狹義的“種質(zhì)資源〞通常是就某一具體物種而言的，加“人參的種質(zhì)資源〞、“貝母的種質(zhì)資源〞、“紅花的種質(zhì)資源’’等，實(shí)際上主要是就“品種〞而言的，是包括栽培品種(類型)、野生種、近綠野生種和特殊遺傳材料(多倍體、單倍體、雙單倍體、單體、三體、缺體及易位系、附加系、代換系等野生或人工誘導(dǎo)的變異材料)在內(nèi)的所有可利用的遺傳材料。45整理ppt〔二〕、種質(zhì)資源研究的重要意義1種質(zhì)資源是發(fā)現(xiàn)和利用基因資源的源泉；種質(zhì)資源是基因的載體，植物種內(nèi)所有個(gè)體及其遺傳性狀的基因構(gòu)成了該物種的基因體。其中可能蘊(yùn)藏著豐富的巳知或未知的有益基因，如控制高產(chǎn)、抗病、抗逆等優(yōu)良性狀的基因和控制有效成分代謝途徑和代謝速度的基因。種質(zhì)資源遺傳多樣性的研究將為評(píng)估基因資源的開(kāi)發(fā)前景提供重要信息。2種質(zhì)資源是引種栽培和資源保護(hù)的根底；種質(zhì)資源有效成分的遺傳變異是影響藥品產(chǎn)量和質(zhì)量的重要因素，要獲得好的療效和經(jīng)濟(jì)效益．在引種之前，首先必須在眾多遺傳資源中篩選出最有用的遺傳資源，以便在消耗同等數(shù)量物資的情況下獲得更多的產(chǎn)品。3種質(zhì)資源為育種提供了原始材料；任何一個(gè)新品種的培育都是在原有的植物資源根底上通過(guò)選擇、雜交、回交、誘變等方法修飾、加工、改進(jìn)后培育出來(lái)的。4種質(zhì)資源是實(shí)施GAP的保證。46整理ppt〔三〕、DNA指紋的概念及應(yīng)用1.DNA指紋技術(shù)是近年來(lái)開(kāi)展起來(lái)的一組可以檢測(cè)出大量DNA位點(diǎn)差異性的分子生物學(xué)新技術(shù)，因它們的電泳譜帶類似人的指紋圖形而得名，如RAPD、RFLP、AFLP等。2.DNA指紋技術(shù)在藥用植物種質(zhì)資源研究中的應(yīng)用(1)在品種品系鑒定上的應(yīng)用(2)在品種品質(zhì)純度檢測(cè)上的應(yīng)用(3)在種質(zhì)資源遺傳多樣性研究上的應(yīng)用(4)在種質(zhì)資源遺傳關(guān)系研究上的應(yīng)用(5)在作物育種上的應(yīng)用47整理ppt三、生藥鑒定的分子標(biāo)記研究傳統(tǒng)生藥鑒定研究:1基源鑒定2性狀鑒定3顯微鑒定4理化鑒定5生物鑒定48整理ppt生藥DNA分子鑒定技術(shù):1基于傳統(tǒng)的Southern雜交技術(shù)的分子標(biāo)記,如RFLP等;2基于PCR反響的分子標(biāo)記,如RAPD等;3PCR-RFLP技術(shù)的結(jié)合即AFLP技術(shù);4測(cè)序技術(shù)生藥DNA分子鑒定的應(yīng)用:1近緣生藥品種的DNA分子鑒定;2名貴易混淆生藥的D