水樣指標測定方法

(1)COD的測定1、 先將水樣離心10min(4000r/min),然后取3ml上清液于消解瓶中。2、 再向消解瓶中加入1ml掩蔽劑，3ml消化液II和5ml硫酸銀溶液。3、 消解25min,消解溫度為160°C。4、 標定硫酸鹽鐵銨溶液取10ml重鉻酸鉀溶液于250ml的錐形瓶中，加入45ml水稀釋，再向其中加入15ml硫酸，待其冷卻后用硫酸亞鐵銨滴定，顏色依次由黃色到淺黃色到墨綠色到亮綠色到淡橙色到亮橙色，即為滴定終點，消耗的體積為V。則： C=0.5/V5、 做空白試驗，將3ml水樣改為3ml的蒸餾水，其它一樣，消耗V?？?、 將消解瓶中的溶液轉(zhuǎn)移至錐形瓶中，加入3滴試亞鐵靈指示劑后進行滴定，消耗V0。貝U： COD(mg/L)={8000XCX(V六一V。)}/3藥品的配制：重鉻酸鉀標準溶液(1/6K2Cr2O3=0.0500mol/L):稱取經(jīng)120C烘干2h基準或優(yōu)級純重鉻酸鉀2.4516g,用少量水溶解，移入1000mL容量瓶中，稀釋至標線，搖勻。供硫酸亞鐵標準溶液用。試亞鐵靈指示劑：稱取1.485g鄰菲羅啉(Cl2H8N2?H2O)和0.695g硫酸亞鐵(FeSO4?7H2O)溶于水中，稀釋至100mL，貯于棕色瓶內(nèi)。硫酸亞鐵氨標準溶液【(NH4)4Fe(SO4)2?6H20=0.05mol/L】：稱取9.88g分析純?nèi)苡谒校厰嚢柽吘徛尤?0mL濃硫酸，冷卻后移入1000mL容量瓶中，蒸餾水稀釋至標線，搖勻，配制0.025mol/L的硫酸鹽亞鐵銨溶液。臨用前，用重鉻酸鉀標準溶液標定。消化液II：稱取9.80g重鉻酸鉀，50.0g硫酸鋁鉀、10.0g鉬酸銨，溶解于500mL水中，加入200mL濃硫酸，冷卻后轉(zhuǎn)移至1000mL容量瓶中，用水稀釋至標線。該溶液重鉻酸鉀濃度為0.2mol/L。用于測定COD濃度在50~1000mg/L的水樣。催化劑：稱取4.4g硫酸銀溶解于500ml的濃硫酸中，搖勻。掩蔽劑：稱取30.00g硫酸汞溶解于100ml10%的硫酸中。⑦10%的硫酸：取50mL蒸餾水，緩慢加入10ml的濃硫酸，冷卻后定容至100mL。⑵揮發(fā)酸MA,volatileFattyQ的測定1、取離心水樣0.5ml,向其中加入1.7ml的硫酸乙二醇（1.5ml乙二醇和0.2ml（1:1硫酸）），混合均勻后將其放入沸水中加熱3min,之后待其冷卻后向其中加入2.5ml的羥胺溶液，混合均勻后靜止1min，然后全部置于10ml酸性氯化鐵的容量瓶中，定容至25ml，靜止5min后在分光光度上測其值，波長定為500nm。標準曲線：99.6%。同樣操作做空白試驗1份。藥品的配制：TOC\o"1-5"\h\z硫酸乙二醇：乙二醇 15ml1+1的硫酸 2ml\o"CurrentDocument"羥胺溶液:4.5mol/L的氫氧化鈉 20ml10%硫酸羥胺溶液 5ml酸性氯化鐵：稱取20g的六水氯化鐵于500ml的燒杯中，向其中加入蒸餾水，準確量取20ml的濃硫酸于其中，充分攪拌，加蒸餾水定容至1L。10%硫酸羥胺溶液：稱取硫酸羥胺10g，溶于100ml蒸餾水中。（3）堿度的測定1、 水樣離心10min。2、 取樣V2ml水樣+30V2ml蒸餾水+3滴溴甲酚綠一甲基紅指示劑+1滴硫代硫酸鈉3、 滴定用0.02mol/L的標準鹽酸溶液滴定，顏色由無色轉(zhuǎn)為淡紅色，即為滴定終點，記錄樣品中消耗的鹽酸用量為V1ml，空白對照中消耗的鹽酸用量為V°ml。（V-V）xC貝U： 堿度二 X1000（mmol/L）2式中：V1——樣品消耗的鹽酸量；V。一空白溶液消耗的鹽酸的量；V2——水樣體積。藥品的配制：①蒸餾水：應煮沸加熱15min去除水中溶解的二氧化碳，冷卻后備用。②溴甲酚綠-甲基紅指示劑：取100mg的溴甲酚綠鈉鹽和20mg甲基紅鈉鹽溶于100ml蒸餾水中即可?；蚍Q取100mg的溴甲酚綠和20mg甲基紅溶于100ml95%的乙醇中。0.02mol/L的鹽酸標準溶液：相對密度為1.19的濃鹽酸8.3ml,以蒸餾水定容至1000ml,即為0.10mol/L的鹽酸溶液，儲存?zhèn)溆谩Ｊ褂脮r，取200ml以蒸餾水定容至1000ml，即為0.02mol/L的鹽酸溶液，其準確濃度需以0.0200mol/L的基準碳酸鈉溶液標定。0.1mol/L(1/2Na2S2O3)溶液：稱12.5gNa2S2O3?5H20，溶于1000mL新煮沸并已放冷的水中，此溶液濃度約為0.1mol/L，加入0.2g無水碳酸鈉，貯于棕色瓶內(nèi)。水中氨氮的測定(納氏試劑比色法)一、原理碘化汞和碘化鉀的堿性溶液與氨反應生成淡黃棕色膠態(tài)化合物，其色度與氨氮含量成正比，通?？稍诓ㄩL410—425nm范圍內(nèi)測其吸光度，計算其含量。本法最低檢出濃度為0.025mg/L(光度法)，測定上限為2mg/L。二、儀器1．500mL全玻璃蒸餾器。2．50mL具塞比色管。3．分光光度計。4．pH計。三、試劑配制試劑用水均應為無氨水。1．無氨水：可用一般純水通過強酸性陽離子交換樹脂或加硫酸和高錳酸鉀后，重蒸餾得到。2．1mol/L氫氧化鈉溶液。吸收液：①硼酸溶液：稱取20g硼酸溶于水中，稀釋至1L。②O.Olmol/L硫酸溶液。納氏試劑：稱取16g氫氧化鈉，溶于50mL水中，充分冷卻至室溫。另稱取7g碘化鉀和碘化汞(Hgl)溶于水，然后將此溶液在攪拌下徐徐注入氫氧2化鈉溶液中。用水稀釋至100mL，貯于聚乙烯瓶中，密塞保存。酒石酸鉀鈉溶液：稱取50g酒石酸鉀鈉(KNaCHO?4HO)溶于100mL水中，加446 2熱煮沸以除去氨，放冷，定容至100mL。銨標準貯備溶液：稱取3.819g經(jīng)100°C干燥過的氯化銨(NHC1)溶于水中，移4入lOOOmL容量瓶中，稀釋至標線。此溶液每毫升含l.OOmg氨氮。銨標準使用溶液：移取5.00mL銨標準貯備液于500mL容量瓶中，用水稀釋至標線。此溶液每毫升含O.OlOmg氨氮。四、測定步驟水樣預處理：無色澄清的水樣可直接測定；色度、渾濁度較高和含干擾物質(zhì)較多的水樣，需經(jīng)過蒸餾或混凝沉淀等預處理步驟。標準曲線的繪制：吸取0、0.50、1.00、3.00、5.00、7.00和lO.OmL銨標準使用液于50mL比色管中，加水至標線，加1.0mL酒石酸鉀鈉溶液，混勻。加1.5mL納氏試劑，混勻。放置10min后，在波長420nm處，用光程10mm比色皿,以水為參比，測定吸光度。由測得的吸光度，減去零濃度空白管的吸光度后，得到校正吸光度，繪制以氨氮含量（mg）對校正吸光度的標準曲線。3?水樣的測定：分取適量的水樣（使氨氮含量不超過O.lmg），加入50mL比色管中，稀釋至標線，加l.OmL酒石酸鉀鈉溶液（經(jīng)蒸餾預處理過的水樣，水樣及標準管中均不加此試劑），混勻，加1.5mL的納氏試劑，混勻，放置lOmin。4?空白試驗：以無氨水代替水樣，作全程序空白測定。五、計算由水樣測得的吸光度減去空白實驗的吸光度后，從標準曲線上查得氨氮含量（mg）。氨氮（N,mg/L）二mX1000/V式中：m——由校準曲線查得樣品管的氨氮含量（mg）；V 水樣體積（mL）。注意事項1、 納氏試劑中碘化汞與碘化鉀的比例，對顯色反應的靈敏度有較大影響。靜置后生成的沉淀應除去。2、 濾紙中常含痕量銨鹽，使用時注意用無氨水洗滌。所用玻璃器皿應避免實驗室空氣中氨的沾污。（5）總磷的測定（法）主題內(nèi)容與適用范圍本標準規(guī)定了用過硫酸鉀為氧化劑，將未經(jīng)過濾的水樣消解，用鉬酸銨分光光度測定總磷的方法?？偭装ㄈ芙獾?、顆粒的、有機的和無機磷。本標準適用于地面水、污水和工業(yè)廢水。原理在中性條件下用過硫酸鉀使試樣消解，將所含磷全部轉(zhuǎn)化為正磷酸鹽。在酸性介質(zhì)中，正磷酸鹽與鉬酸銨反應，在銻鹽存在下生成磷雜多酸后，立即被抗壞血酸還原，生成藍色的絡合物。儀器及用具具塞（磨口）比色管：50mL；加熱板；刻度吸管：5mL,2mL,1mL；紫外分光光度計；燒杯：1000mL試劑本標準所列試劑除磷酸二氫鉀為工作基準試劑外，其余均為分析純，水為蒸餾水。4.1過硫酸鉀溶液：50g/L。將25g過硫酸鉀溶于水并稀釋至500mL。4.2鉬酸銨溶液：26g/L。稱取13g鉬酸銨，精確至O.lg。稱取0.35g酒石酸銻鉀，精確至O.Olg。溶于在200mL水中，加入300mL硫酸溶液，混勻，冷卻后用水稀釋至500mL，混勻，存于棕色試劑瓶中（冷藏可保存兩個月）。4.3抗壞血酸溶液：100g/L。稱取50g抗壞血酸，精確至O.lg。溶于蒸餾水中，用水稀釋至500mL，貯于棕色試劑瓶中（冷藏可穩(wěn)定幾周，如不變色可長時間使用）。4.4磷標準貯備溶液：1mg/mL。溶解磷酸二氫鉀（使用前在105°C下干燥2h）1.0967g于蒸餾水中，移入250mL容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻。4.5磷標準工作溶液：10ug/mL。吸取5mL磷標準儲備溶液于500mL容量瓶中，以蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。分析步驟空白試樣按（5.2）的規(guī)定進行空白試驗，用水代替試樣，并加入與測定時同體積的試劑。測定5.2.1消解吸取5mL混勻水樣于50mL具塞比色管中，加入5mL過硫酸鉀溶液（4.1）,用蒸餾水稀釋至25mL，將比色管置于沸水浴中加熱30分鐘，取出冷卻至室溫。發(fā)色分別向各份消解液中加入1mL抗壞血酸溶液（4.3）,2mL鉬酸銨溶液（4.2），用蒸餾水稀釋至50mL，充分混合均勻。分光光度測量室溫下放置30分鐘后，使用光程為10mm比色皿，在700nm波長下，以蒸餾水為參比液，空白試液調(diào)節(jié)零點，測定吸光度后，從工作曲線（5.2.4）上查得磷的含量。工作曲線的繪制取6支具塞比色管分別加入0.0；0.50；1.0；2.0；3.0；4.0mL磷標準溶液（4.5）。然后按步驟（5.2）進行處理，以蒸餾水為參比液，空白試液調(diào)節(jié)零點，測定吸光度后，和對應的磷的含量繪制工作曲線。計算總磷含量以C（mg/L）表示，按下式計算：mXXC= V式中：m 試樣測得含磷量，ug；X---樣品稀釋倍數(shù)；V 測定用試樣體積，mL。注：1、對于總磷較大的水樣（如精煉廠、榨油廠污水和中和水）需將水樣稀釋50倍后再進行檢測；排放水采樣量為10mL。2、若消解后的試樣有懸浮物需過濾后再發(fā)色。（6）溶解性糖的測定（苯酚-硫酸法）苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚生成橙黃色化合物。再以比色法測定。原理多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚生成橙黃色化合物。再以比色法測定。試劑濃硫酸：分析純，95.5%80%苯酚：80克苯酚（分析純重蒸餾試劑）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光長期儲存。6%苯酚：臨用前以80%苯酚配制。（每次測定均需現(xiàn)配）標準葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）,或分析純葡萄糖。操作1?制作標準曲線：準確稱取標準葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分別吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸餾水補至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及濃硫酸5.0ml,搖勻冷卻，室溫放置20分鐘以后于490nm測光密度，以2.0ml水按同樣顯色操作為空白，橫坐標為多糖微克數(shù)，縱坐標為光密度值，得標準曲線。2.樣品含量測定：吸取樣品液1.0ml（相當于40ug左右的多糖），按上述步驟操作，測光密度，以標準曲線計算多糖含量。（1） 此法簡單、快速、靈敏、重復性好，對每種糖僅制作一條標準曲線，顏色持久。（2） 制作標準線宜用相應的標準多糖，如用葡萄糖，應以校正系數(shù)0.9校正仇g數(shù)。（3） 對雜多糖，分析結(jié)果可根據(jù)各單糖的組成比及主要組分單糖的標準曲線的校正系數(shù)加以校正計算。（4）測定時根據(jù)光密度值確定取樣的量。光密度值最好在 0.1——0.3之間。比如：小于0.1之下可以考慮取樣品時取2克，仍取0.2ml樣品液，如大于0.3可以減半取0.1ml的樣品液測定。（7）溶解性蛋白的測定（一） 樣品（二） 試劑1．牛血清白蛋白標準液（200g/ml）準確稱取牛血清白蛋白粉末50.0mg，用0.1mol/LNaOH溶液潤濕溶解，加蒸餾水到250ml。堿性硫酸銅溶液堿溶液：NaCO2g溶于100ml0.1mol/LNaOH中。2 3硫酸銅溶液：CuSO4?5HO0.5g溶于100ml35mmol/L（1%）酒石酸鉀鈉中。2使用前將①與②按50:1混合即成堿性硫酸銅溶液。使用時新鮮配制。Folin-酚試劑在2L磨口回流裝置內(nèi)加鎢酸鈉（NaWO?2HO）100g,鉬酸鈉（NaMoO?2HO）24224225g，蒸餾水700ml，14.68mol/L（85%）磷酸50ml，濃鹽酸100ml，充分混合后用小火回流10h。冷卻后，再加硫酸鋰（LiSO?HO）150g，水50ml，數(shù)滴（2~3242滴）液體溴（也可用30%HO6~8滴代替），然后開口沸騰15min，驅(qū)除過量的溴22（因溴氣甚毒，這一步應在通風櫥中進行），冷卻后加水至1000ml，過濾，溶液呈黃色（如帶綠色則不能用），保存于棕色瓶中置冷暗處備用（如配制時間較長，試劑轉(zhuǎn)呈綠色），可再加液體溴數(shù)滴，煮沸15min，若能恢復原有的黃色或金黃色仍可繼續(xù)使用）。（三）儀器及器材V-1100分光光度計恒溫水浴箱試管6支、試管架4．加樣槍、加樣槍架5．坐標紙三、實驗步驟（一）操作步驟1．反應體系設置取6支試管編號，按下表加入試劑，混勻。試劑（mL）空白管標準管樣品管123456牛血清白蛋白標準液0.20.40.60.8樣品液0.5蒸餾水1.00.80.60.40.20.52．雙縮脲反應向各管內(nèi)分別加入堿性硫酸銅溶液2ml,混勻，室溫放置lOmin。Folin-酚反應再加入Folin-酚試劑0.20ml,2s內(nèi)迅速混勻a!40°C水浴lOmin后，冷卻至室溫。a.當Folin-酚試劑加到堿性的銅-蛋白質(zhì)溶液中后，必須立即混勻（加一管混勻一管）,使還原反應發(fā)生在磷鉬酸-磷鎢酸試劑被破壞之前。b.每管重復測三次A值，求平均值用于繪標準曲線。500比色測定以500nm波長比色，用1號管作空白，讀取各管吸光度值Ab。500（二）注意事項1.干擾物質(zhì)此法是在Folin-酚法的基礎上引入雙縮脲試劑，因此凡干擾雙縮脲反應的基團，如-CO-NH，-CH-NH，-CS-NH以及在性質(zhì)上是氨基酸或肽的緩沖劑，如Tris2222緩沖劑以及蔗糖，硫酸銨，巰基化合物均可干擾Folin-酚反應。此外，所測的蛋白質(zhì)樣品中，若含有酚類及檸檬酸，均對此反應有干擾作用。而濃度較低的尿素（約0.5%左右），胍（0.5%左右），硫酸鈉（1%），硝酸鈉（1%），三氯乙酸（0.5%），乙醇（5%），乙醚（5%），丙酮（0.5%）對顯色無影響，這些物質(zhì)在所測樣品中含量較高時，則需做校正曲線。若所測的樣品中含硫酸銨，則需增加碳酸鈉—氫氧化鈉濃度即可顯色測定。若樣品酸度較高，也需提高碳酸鈉—氫氧化鈉濃度1—2倍，這樣即可糾正顯色后色淺的弊病。2．控制時間因Lowry反應的顯色隨時間不斷加深，因此各項操作必須精確控制時間。即