1、血清學(xué)檢驗新疆農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院

才干單元八

血清學(xué)檢驗與生物制品一血清學(xué)檢驗

定義：抗原及相應(yīng)抗體在體外的特異性結(jié)合。在體外能發(fā)生可見的免疫反響?？贵w主要存在于血清中，將這一反響稱為--。

(一)血清學(xué)實驗的特點：

1、特異性：抗原決議簇的組成、構(gòu)造不同，所產(chǎn)生的抗體也就不同，一種抗原只能與相應(yīng)抗體結(jié)合，表現(xiàn)出高度的特異性。

2、交叉性：

〔二〕用知測未知：用知抗原〔抗體〕監(jiān)測未知抗體〔抗原〕。

〔三〕最適比與帶景象：最適比：抗原與抗體結(jié)合需求適當(dāng)比例才干出現(xiàn)可見反響。帶景象：如抗原過多或抗體過多，大的抗原抗體復(fù)合物很難構(gòu)成，不能出現(xiàn)可見的反響?！菜摹撤错懙目赡嫘裕赫＃簻囟龋?-40度，PH：4-9。當(dāng)T>60度，PH<3時，發(fā)生可逆反響。〔五〕反響的兩階段型：第一階段：抗原抗體相互結(jié)合，作用快，構(gòu)成的復(fù)合物較小，不出現(xiàn)可見反響。第二階段：在電解質(zhì)作用下，構(gòu)成大的復(fù)合物，出現(xiàn)各種可見反響，反響慢。

〔六〕反響的敏感性：極微量的抗原或抗體都能檢測。

二影響血清學(xué)實驗的要素1、電解質(zhì)：常用的是氯化納，0.9%生理鹽水，促進可見景象的發(fā)生。

2、溫度：37度，適宜的溫度可添加抗原抗體活性及相互接觸的時機。

3、PH=6.8,PH=5-5.5,非特異性沉淀，PH=2-3,離解。4、振蕩：加速碰撞，但過強可解離。

5、雜質(zhì)：蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、糖等雜志時，抑制反響進展，或引起非特異性反響。故實驗設(shè)立對照。

三、血清學(xué)實驗的類型：〔一〕凝集實驗：顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后，在電解質(zhì)存在下相互凝結(jié)成絮片狀團塊的景象。參與的抗原為凝集原，抗體為凝集素。１、直接凝集實驗：〔1〕平板凝集實驗：例如：沙門氏菌，痢疾桿菌，布氏桿菌病，血型鑒定。

〔2〕試管凝集實驗：抗原等量，抗體作倍比稀釋，37℃，50%以上為該血清的效價〔滴度〕。例如：布氏桿菌病，沙門氏菌。2、間接凝集實驗：將可溶性抗原〔或抗體〕吸附與免疫無關(guān)的顆粒外表，再與抗體結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集景象。

間接血凝實驗：以紅細(xì)胞為載體。

正向血凝實驗：紅細(xì)胞+抗原抗體。

反向血凝實驗：紅細(xì)胞+抗體抗原。

〔二〕沉淀實驗：可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后，構(gòu)成肉眼可見的白色沉淀。１、環(huán)狀沉淀實驗：d=3～4毫米試管中，抗血清參與管底，再將稀釋的抗原重疊其上，陽性：一～二分鐘出現(xiàn)反響，一小時，三-五h。例如：炭疽病診斷。

2、瓊脂分散實驗：機理：略

例如：藍舌病，馬傳染性貧血，MD，傳染性法氏囊病。

〔三〕補體結(jié)合實驗：

1、原理：補體無特異性，能與任何抗原抗體復(fù)合物結(jié)合，紅細(xì)胞+溶血素+補體溶血，陰性。紅細(xì)胞+溶血素不溶血，為陽性

2、運用：牛付結(jié)核，乙型腦炎，馬鼻疽〔四〕中和實驗：病毒或毒素與相應(yīng)抗體結(jié)合后，可失去對易打動物的致病力的實驗。

1、毒素、抗毒素的中和實驗：LD50常用

2、病毒中和實驗：〔1〕體外中和實驗〔2〕體內(nèi)中和實驗例：

口蹄疫病毒(FMDV)4～7d乳鼠乳鼠死亡

FMDV+抗血清4～7d乳鼠乳鼠不死亡

例:

FMDV仔豬腎傳代細(xì)胞(IB-RS-2)單層細(xì)胞

細(xì)胞病變(CPU)：變圓、成串、空泡、變形、零落、裂解

FMDV+抗血清IB-RS-2單層細(xì)胞細(xì)胞無病變CPU

〔五〕抗體標(biāo)志技術(shù)：用熒光素、酶和同位素等對抗體進展標(biāo)志的實驗技術(shù)。

1、熒光抗體技術(shù)：將熒光染料標(biāo)志在抗體上制成熒光抗體，標(biāo)志的抗體仍能與相應(yīng)抗原結(jié)合并構(gòu)成帶有熒光的抗原抗體復(fù)合物。

熒光資料：異硫氰酸熒光素顯微鏡下的熒光熒光顯微鏡

〔1〕直接法：熒光染料+知抗體監(jiān)測未知抗原?！?〕間接法：熒光染料標(biāo)志在抗抗體上檢測未知抗原2、免疫酶標(biāo)抗體技術(shù)：

利用抗原抗體的特異性結(jié)合和酶的高效特異的催化作用，顯色而建立起來的免疫檢測技術(shù)。酶標(biāo)志抗體抗原復(fù)合物上的酶在遇到相應(yīng)的底物時，能催化底物分解，并使底物中的供氫體呈現(xiàn)顏色反響。常用標(biāo)志酶：辣根過氧化物酶〔HRP〕。作用底物為過氧化氫。供氫體：3，3`-二氨基聯(lián)苯胺〔棕色沉淀〕——免疫酶組織化學(xué)染色法；鄰苯二胺〔橙色可溶物質(zhì)〕——酶聯(lián)免疫吸附實驗。

直接法：1免疫酶組織化學(xué)染色法：酶標(biāo)抗體+被檢抗原洗滌過氧化氫+DAB的反響液中