ABO血型鑒定正反不符及其原因

ABO血型正反定型不符及其原因

目錄CONTENTS01ABO血型正反定型結果不相符合的原因03正定型的意外反應結果02正反定型不符的原因查找和處理04反定型的意外反應結果

除對新生兒只檢測其紅細胞抗原，即只進行正定型外，臨床常規(guī)檢測ABO血型，必須正反定型，正定型是檢測紅細胞抗原，反定型是檢測血清中抗體，判定ABO血型，結果相符。病人或者獻血者（待輸血液）ABO正反定型結果不相符合，要詳細記錄實驗，不能確定ABO血型，記錄該標本血型結果有疑問。如果是待輸血的標本，該袋血就不能發(fā)出使用，應換一袋正反定型相符的血液，或者在時間允許情況下，重新進行試驗，如確定是否試驗操作錯誤等原因，即已經(jīng)明確該袋血ABO正反定型相符，可以重新考慮使用該袋血。除此之外，不管是什么原因，只要是ABO正反定型不符的血，都不能用于臨床輸血。如受血者（病人）標本ABO正反定型不符，必須首先為該受血者準備RhD同型的O型血，以應病人治療急需。然后進行研究，查找該受血者ABO正反定型不符的原因。ABO血型正反定型

結果不相符合的原因01實驗操作者本身技術上的錯誤所造成受檢的血液標本問題所致BA1）假陰性結果：①試管中沒有加入抗體試劑或血清，只加入了紅細胞。②沒能識別溶血也是陽性反應。③血清或試劑與紅細胞比例不當。④離心速度、時間不夠。⑤使用了失效的或錯誤的抗體或/和紅細胞試劑。⑥試驗結果記錄和解釋錯誤。2）假陽性結果：①離心速度過大和離心時間過長。②使用了受到細菌污染的抗體試劑、紅細胞試劑或生理鹽水。③使用不干凈的玻璃試管等試驗器皿。④試驗結果記錄和解釋錯誤。一、實驗者操作或技術錯誤二、血液標本的問題

出現(xiàn)混合視野凝集現(xiàn)象，病人血液中不只是一個ABO血型的紅細胞，如將O型紅細胞，或O型造血細胞輸給A型人。病人接受了ABO血型不相容的骨髓細胞移植，并產(chǎn)生了耐受。比如，A型病人接受了O型人的骨髓后，血循環(huán)中有O型紅細胞，但血清中只存在抗-B。病人近期接受了大量ABO血型相容但不同型的紅細胞，如非O型人接受了O型紅細胞，或骨髓移植病人血液循環(huán)中有多于一個ABO型別的紅細胞。

纖維蛋白聚集的紅細胞小凝塊被誤認為是血液凝集，或血漿標本或未完全消除纖維蛋白影響的的血清標本，易出現(xiàn)小凝塊，可能被誤判為紅細胞凝集。213

出現(xiàn)混合視野凝集現(xiàn)象，是因為某些遺傳性的異常，如A3亞型紅細胞，非同卵雙胞的嵌合紅細胞。二、血液標本的問題

近期輸用了血型不相容的血液成分，以及大量血漿置換的病人血清中都可能出現(xiàn)意外抗體。該血液成分中抗體含有不相容的ABO抗體，如A型病人輸用了O型人的血小板制劑，同時病人也獲得了血小板制劑中血漿成分中的抗-A。近期接受了靜脈注射免疫球蛋白制品，或者含高濃度高效價ABO抗體的其他血漿或血液制品后的病人血漿中也含有非相容性ABO抗體。非正常的紅細胞凝集反應現(xiàn)象，如獲得性B抗原紅細胞、B(A)、cisAB等。546

血清樣品中含有抗-A、抗-B以外的其它紅細胞抗體，反復輸血及多次妊娠史的人血清中可能含有的ABO血型以外的同種異型抗體，如完全抗體抗-M使M抗原陽性的反定型試劑紅細胞都凝集。有些人血清中含高效價冷自身抗體抗-I，或冷同種異型抗體抗-M與抗原陽性的反定型紅細胞在4℃發(fā)生反應。二、血液標本的問題

4～6月齡內(nèi)嬰兒的血清ABO抗體是陰性或很弱。一般對嬰兒不檢測血清ABO抗體反定型，因為嬰兒不僅是抗體弱，而且其大部分抗體是是被動地來自母體。嬰兒在3至6個月才開始生成自己的ABO血型抗體。

ABO抗原性表達弱或太弱，ABO亞型紅細胞和ABO基因變異的個體紅細胞，或一些患白血病或其它惡性疾病的病人紅細胞，應用抗-A、抗-B試劑未能出現(xiàn)預期的強陽性凝集反應，或沒見陽性凝集。79

血漿或血清標本中有PH值依賴型的自身抗體，在反應液中EDTA作用下與紅細胞出現(xiàn)假陽性凝集反應，或出現(xiàn)錢串狀聚集紅細胞。8二、血液標本的問題

使用未洗滌的紅細胞標本，懸浮紅細胞的血清或血漿中含有針對抗-A、抗-B試劑中染色劑或其它成分的抗體，引起假的陽性反應。

血清中有不正常濃度和不正常比例的大分子蛋白成分，或者是血液中高分子蛋白增多引起非特異凝集，可能出現(xiàn)緡錢狀紅細胞非特異性聚集現(xiàn)象。使用未洗滌的紅細胞標本，懸浮紅細胞的血清或血漿中含高濃度A或B血型物質(zhì)，中和了抗體試劑，出現(xiàn)了假陰性反應。1012

使用未洗滌紅細胞、血清中會有非正常的高濃度蛋白質(zhì)，或者病人輸用了大分子溶液，都可能出現(xiàn)非特異凝集。臍帶血中Wharton氏膠也可能導致臍帶血紅細胞發(fā)生非特異凝集。11二、血液標本的問題

異常高效價的補體結合抗體抗-A、抗-B，可能促進大量的C1結合到紅細胞膜上，遮蔽了紅細胞A和B抗原位點，以致凝集反應不能發(fā)生，已有文獻報道這種現(xiàn)象發(fā)生在無EDTA的血清標本的ABO反定型試驗。

病人血清中高活性、高濃度冷自身抗體嚴重致敏（包被）自身紅細胞，以至自發(fā)地發(fā)生凝集，而不是抗體試劑的特異性免疫反應作用所致。141315

因治療需要在無菌環(huán)境下生活的兒童，有些血液中缺少抗-B抗體。二、血液標本的問題

接受馬科動物提純的免疫球蛋白制品治療的病人，有的缺少抗-A抗體。

免疫抑制疾病或經(jīng)免疫抑制治療的病人血清中ABO抗體減少或消失。老年人隨年齡增高，生理性的ABO抗體減弱。171618

繼發(fā)于遺傳性免疫缺陷癥，或因疾病治療出現(xiàn)了嚴重的低伽馬球蛋白血癥，或者因多次血漿白蛋白置換治療，病人血漿中抗體被稀釋也可產(chǎn)生低伽馬球蛋白血癥。二、血液標本的問題

血清標本中如果含有試劑紅細胞保護劑成份相應的抗體，則可能發(fā)生與ABO血型抗原抗體反應無關的紅細胞凝集反應。

紅細胞多凝集現(xiàn)象，遺傳性或獲得性紅細胞膜改變，隱蔽的自身抗原暴露，也稱T-激活紅細胞，因為人血清中都含有這些暴露的抗原的自然發(fā)生的抗體，故ABO血型相容的血清和T-激活紅細胞發(fā)生凝集反應。單克隆抗體血型試劑不發(fā)生這類反應。2019正反定型不符的原因查找和處理02（1）基本程序

首先重復試驗，如果先前試驗中紅細胞懸浮在血清或血漿中，則改為洗滌后的紅細胞并懸浮在鹽水中，進行重復試驗。如果重復試驗仍是正反定型不符，則繼續(xù)下列試驗：010203040506

重取標本：重新采集獻血員和受血者的血液新鮮標本，這樣可能解決標本采集或標記的錯誤或原標本受污染所致的錯誤結果。

查詢病人既往史，輸血史，骨髓移植史和用藥史等。

多次洗滌標本紅細胞或試劑紅細胞，除去可能引起意外陽性反應的血漿中的或試劑紅細胞保存液中化學成分。應換用新配制的或確定為無細菌污染的生理鹽水洗滌懸浮紅細胞。

應用抗-AB，抗-A1或抗-H檢測紅細胞。

如果懷疑血清中有抗-A1，則用數(shù)份A1和A2紅細胞標本進行檢驗。

室溫孵育30分鐘后，離心觀察凝集結果，能檢測弱的抗原抗體反應，但要用O型和自身紅細胞做對照，以排除抗-I或抗-H等抗體的干擾。抗-I和抗-H是對絕大部分成人紅細胞都反應的凝集素。07

分析O型篩選細胞檢測結果，確定是否是同種異型或自身冷抗體干擾正反定型結果。（2）ABO抗原弱或缺失所致正反定型不符合

合格的抗-A和抗-B試劑檢測A和B型人紅細胞，正定型絕大多數(shù)檢測都呈3+和4+的凝集強度；

反定型血清用合格的試劑紅細胞檢測絕大部分呈2+至4+的凝集強度。

正反定型不相符結果表現(xiàn)為沒有出現(xiàn)應該出現(xiàn)的凝集，或出現(xiàn)不該出現(xiàn)的反映格局；

對于反應的凝集強度低的標本，也要引起警惕，分析原因，而沒有分析清楚原因的獻血員（待輸血液）應該被認作是非正常紅細胞，避免作為合格血液。

例如某人血清對B紅細胞試劑呈強凝集，對A紅細胞不凝集，但其紅細胞又不被抗-A和抗-B試劑凝集，該人可能是A血型人。

具有某些遺傳變異基因的個體或者某些相關疾病的病人紅細胞都可能表達很弱的A或B抗原。有助于增加對這些弱抗原檢出的方案有：1）將抗-A，抗-B和抗-AB試劑與洗滌過紅細胞在室溫孵育30分鐘，可以增強抗體與少量抗原的結合。在4℃的孵育可能進一步增加抗體的結合。但一定要嚴格查看和遵照試劑的使用說明書，可能所要求的是相反的使用溫度，該廠家試劑不能在低溫度，而相反要求在較高些溫度下使用。2）酶處理病人紅細胞：木瓜酶、無花果酶和菠蘿蛋白酶處理紅細胞能夠增強抗-A、抗-B反應。有時，對經(jīng)酶處理過的紅細胞，經(jīng)室溫30分鐘孵育抗-A、抗-B才能夠反應。同時必須設立對照：酶處理O型細胞，以確定ABO反應特異性。有助于增加對這些弱抗原檢出的方案有：3）用人血清抗-A、抗-B進行吸收放散試驗檢測紅細胞弱A和弱B抗原。不是所有單克隆抗體試劑都適宜做吸收放散試驗，只有已經(jīng)經(jīng)過系統(tǒng)驗證的單克隆抗-A、抗-B（明確其細胞株名）才能應用于此試驗?？?A1植物凝集素不適于做吸收放散試驗，因為放散液中較高濃度植物血凝素能夠引起非特異性反應。本試驗要同時做O型血吸收、放散試驗作為對照，如果O型血放散液也與A和B型血凝集，則病人紅細胞放散液與A和B血的凝集反應無關，結果無效，這是ABO系統(tǒng)以外的反應。

4）檢測唾液中A、B和H血型抗原物質(zhì)和檢測Lewis血型，也有利于分析ABO血型正反定型不符。AB抗原減弱白血病、骨髓增生異常綜合征、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、再生障礙性貧血、細菌感染MN抗原減弱細菌感染、骨髓增生異常綜合征、白血病（Tn，Tk激活）i增強珠蛋白生成障礙性貧血、鐮刀細胞病、HEMPAS、Diamind-Blackfan貧血、成髓細胞或鐵粒幼紅細胞生成、難治性貧血獲得性A（Tn）骨髓增生異常綜合征、急性髓細胞白血病獲得性B細菌感染、胃腸道損傷或惡性病變獲得性T、Tk細胞感染獲得性K抗原屎腸球菌獲得性Jkb抗原屎腸球菌或微球菌感染缺失Cromer，Yt，Dombrock，JMH、Emm抗原陣發(fā)性夜間性血紅蛋白尿靶抗原（Rh，Kell，Kidd，LW）減弱自身免疫性溶血性貧血LW霍奇金病，淋巴瘤，白血病，肉瘤I，Rh，S，s，U，Kp*，Jk*，Xg°或En"減弱遺傳性口型細胞增多癥、橢圓紅細胞增多癥與抗原表達變化相關的疾病正定型的意外反應結果031獲得性B紅細胞2獲得性類A抗原4抗體包被紅細胞3混合視野凝集5B(A)表型

如果反定型結果正確，與正定型結果出現(xiàn)不符時，其原因可能是：①與ABO基因變異有關

②與ABO基因變異無關

檢查病人的診斷，獲得性B抗原紅細胞出現(xiàn)常常有腸道細菌能夠進入血循環(huán)的疾病，但是也發(fā)現(xiàn)過無任何疾病的獻血者出現(xiàn)了獲得性B抗原紅細胞；獲得性B紅細胞常常同時有T和Tn等多凝集紅細胞出現(xiàn)；病人血清檢測自身紅細胞，本身抗-B不與自身紅細胞上獲得性B抗原反應，不出現(xiàn)凝集反應；與某些單克隆抗體抗-B試劑凝集，與另一些單克隆抗-B試劑不反應，這根據(jù)有關的單克隆抗體特征而定，一般生產(chǎn)廠家要加以說明；調(diào)整人血清抗-B試劑PH至6.0時，即不與獲得性B細胞反應，酸化的單克隆抗體試劑（PH6.0）也減少或消失與獲得性B紅細胞反應；如果病人是分泌型，其唾液只含有A物質(zhì)和H物質(zhì)，而無B血型物質(zhì)；使用乙酸酐（aceticanhydride）處理獲得性B紅細胞，能夠明顯減弱其反應性，而正常B紅細胞則不受此影響。在乙酸酐處理獲得性B紅細胞同時，A抗原性增強。（1）獲得性B紅細胞

血清與B型、AB型紅細胞反應很強；紅細胞與抗-A試劑反應很強，同時與人血清抗-B出現(xiàn)很弱凝集反應，提示該人紅細胞有獲得性B抗原。一些細菌的脫乙酰基酶使A型抗原表位單糖N-乙酰半乳糖脫乙酰，使之成為半乳糖胺，類似于B型抗原表位的半乳糖，即該半乳糖胺為獲得性B抗原表位，也只有A型人紅細胞能出現(xiàn)獲得性B抗原，確定A型紅細胞出現(xiàn)獲得性B抗原的條件和根據(jù)有下列幾點：（2）獲得性類A抗原

造血干細胞的體細胞突變可以造成部分紅細胞持續(xù)性Tn抗原激活（Tnactived），Tn的抗原表位是N-乙?；肴樘前?，類同A抗原。O型和B型紅細胞Tn激活后，表現(xiàn)如同獲得性A抗原，與人血清和部分單抗抗-A試劑反應。A基因編碼的酶生成的正常的A抗原與該類A抗原（Tn）之區(qū)別為，可以用蛋白酶降解Tn分子，消除與抗-A反應性，而正常A抗原不受影響，或是增強反應。應該強調(diào),Tn激活同T激活一樣,所引起的血凝為最多的凝集現(xiàn)象之一。Tn屬紅細胞隱蔽抗原，正常情況不暴露，在病理理情況下隱蔽抗原暴露，而人血清中都會有自然發(fā)生的抗-Tn和抗-T，因此，紅細胞隱蔽抗原暴露后與ABO所有血型的血清標本或人血清血型試劑都會出現(xiàn)凝集反應。（3）混合視野凝集

偶爾在標本中存在確切的兩群紅細胞，即標本中一部分紅細胞凝集，另一部分不凝集，呈混合視野凝集。這種現(xiàn)象可因幾種原因發(fā)生：非O型人近期輸用了O型血；病人接受了與自己ABO血型不一樣的骨髓移植；來自嵌合體的單合子的相嵌紅細胞（mosaicRBC）或者雙合子的交移體紅細胞（chimaeras）。由于輸血所致的混合視野凝集現(xiàn)象只能持續(xù)到輸入的紅細胞存活期結束；骨髓移植后，混合視野凝集現(xiàn)象在病人自身紅細胞生成結束消散，也可能持續(xù)存在；有相嵌和交移紅細胞的人混合視野凝集持續(xù)終生。A3細胞與抗A試劑應呈典型的混合視野現(xiàn)象，當凝集的細胞被除去后，再加入抗-A1試劑，原未凝集的紅細胞仍出現(xiàn)混合視野凝集現(xiàn)象。（4）抗體包被紅細胞

患新生兒溶血?。℉DN）嬰兒，或處在自身免疫或同種異體免疫狀況的成人，其紅細胞嚴重地包被IgG抗體分子，與含有一定蛋白濃度的試劑產(chǎn)生凝集，經(jīng)常是蛋白濃度18%~22%的抗D試劑和蛋白濃度6%~12%的抗-A、抗-B試劑發(fā)生這種自發(fā)凝集，在45℃進行放散試驗，可以從紅細胞上解離掉這些抗體，此后，即可用抗-A、抗-B很容易地檢測這些紅細胞血型。含冷抗體IgM自身凝集素的紅細胞標本在鹽水中也發(fā)生凝集，這類冷抗體可能由37℃孵育和37℃洗滌被清除掉，也可由DTT等巰基化合物消除掉。（5）B(A)表型

此型人具有B基因和特別高水平的半乳糖基轉(zhuǎn)移酶，該酶卻能轉(zhuǎn)移A型決定基糖，N乙酰基半乳糖至巖藻糖分子上。應用一般的人血清和大多數(shù)單克隆抗體ABO血型試劑，檢測B(A)型人為B型，而再用某些抗A的單克隆抗體（如MHO4）檢測，卻出現(xiàn)弱的凝集反應，不同細胞株的抗-A單克隆抗體，對B(A)型紅細胞出現(xiàn)不同反應格局，大部分不出現(xiàn)凝集，少數(shù)的單抗出現(xiàn)弱反應，一般都弱于2+，凝集塊很易消散。B(A)型人血清對A1和A2紅細胞都凝集，而其它A血型人血清中可能凝集A1紅細胞，卻不凝集A2紅細胞，AB型中A抗原血型（AsubB）人的血清中有N-乙?；肴樘敲福鳥(A)型人則無此酶。應用兩類抗-A單抗，即會有凝集B(A)和不凝集B(A)的單克隆抗體試劑，可以區(qū)分B(A)表型所致的ABO正反定型不合。在臨床輸血工作中，受血者B(A)型人要以B型人對待。反定型的意外反應結果04

免疫抑制病或經(jīng)受免疫治療的病人血清；新生兒血清；以及正常的老年人血清都可能抗-A、抗-B很弱，甚至消失。因此，要注意病人的年齡和診斷。（1）抗體太弱或消失。

如果正定型正確，而檢測血清中抗-A、抗-B，即反定型出現(xiàn)意外結果，或出現(xiàn)明確錯誤的凝集反應，可以按以下步驟分析和進行實驗。

非正常高濃度的抗-A、抗-B可以引起前帶現(xiàn)象，導致錯誤的陰性反應。將血清稀釋或用EDTA（2.5%）處理血清，可消除前帶現(xiàn)象