ABO血型鑒定正反不符及其原因

ABO血型正反定型不符及其原因

目錄CONTENTS01ABO血型正反定型結(jié)果不相符合的原因03正定型的意外反應(yīng)結(jié)果02正反定型不符的原因查找和處理04反定型的意外反應(yīng)結(jié)果

除對(duì)新生兒只檢測(cè)其紅細(xì)胞抗原，即只進(jìn)行正定型外，臨床常規(guī)檢測(cè)ABO血型，必須正反定型，正定型是檢測(cè)紅細(xì)胞抗原，反定型是檢測(cè)血清中抗體，判定ABO血型，結(jié)果相符。病人或者獻(xiàn)血者（待輸血液）ABO正反定型結(jié)果不相符合，要詳細(xì)記錄實(shí)驗(yàn)，不能確定ABO血型，記錄該標(biāo)本血型結(jié)果有疑問(wèn)。如果是待輸血的標(biāo)本，該袋血就不能發(fā)出使用，應(yīng)換一袋正反定型相符的血液，或者在時(shí)間允許情況下，重新進(jìn)行試驗(yàn)，如確定是否試驗(yàn)操作錯(cuò)誤等原因，即已經(jīng)明確該袋血ABO正反定型相符，可以重新考慮使用該袋血。除此之外，不管是什么原因，只要是ABO正反定型不符的血，都不能用于臨床輸血。如受血者（病人）標(biāo)本ABO正反定型不符，必須首先為該受血者準(zhǔn)備RhD同型的O型血，以應(yīng)病人治療急需。然后進(jìn)行研究，查找該受血者ABO正反定型不符的原因。ABO血型正反定型

結(jié)果不相符合的原因01實(shí)驗(yàn)操作者本身技術(shù)上的錯(cuò)誤所造成受檢的血液標(biāo)本問(wèn)題所致BA1）假陰性結(jié)果：①試管中沒(méi)有加入抗體試劑或血清，只加入了紅細(xì)胞。②沒(méi)能識(shí)別溶血也是陽(yáng)性反應(yīng)。③血清或試劑與紅細(xì)胞比例不當(dāng)。④離心速度、時(shí)間不夠。⑤使用了失效的或錯(cuò)誤的抗體或/和紅細(xì)胞試劑。⑥試驗(yàn)結(jié)果記錄和解釋錯(cuò)誤。2）假陽(yáng)性結(jié)果：①離心速度過(guò)大和離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。②使用了受到細(xì)菌污染的抗體試劑、紅細(xì)胞試劑或生理鹽水。③使用不干凈的玻璃試管等試驗(yàn)器皿。④試驗(yàn)結(jié)果記錄和解釋錯(cuò)誤。一、實(shí)驗(yàn)者操作或技術(shù)錯(cuò)誤二、血液標(biāo)本的問(wèn)題

出現(xiàn)混合視野凝集現(xiàn)象，病人血液中不只是一個(gè)ABO血型的紅細(xì)胞，如將O型紅細(xì)胞，或O型造血細(xì)胞輸給A型人。病人接受了ABO血型不相容的骨髓細(xì)胞移植，并產(chǎn)生了耐受。比如，A型病人接受了O型人的骨髓后，血循環(huán)中有O型紅細(xì)胞，但血清中只存在抗-B。病人近期接受了大量ABO血型相容但不同型的紅細(xì)胞，如非O型人接受了O型紅細(xì)胞，或骨髓移植病人血液循環(huán)中有多于一個(gè)ABO型別的紅細(xì)胞。

纖維蛋白聚集的紅細(xì)胞小凝塊被誤認(rèn)為是血液凝集，或血漿標(biāo)本或未完全消除纖維蛋白影響的的血清標(biāo)本，易出現(xiàn)小凝塊，可能被誤判為紅細(xì)胞凝集。213

出現(xiàn)混合視野凝集現(xiàn)象，是因?yàn)槟承┻z傳性的異常，如A3亞型紅細(xì)胞，非同卵雙胞的嵌合紅細(xì)胞。二、血液標(biāo)本的問(wèn)題

近期輸用了血型不相容的血液成分，以及大量血漿置換的病人血清中都可能出現(xiàn)意外抗體。該血液成分中抗體含有不相容的ABO抗體，如A型病人輸用了O型人的血小板制劑，同時(shí)病人也獲得了血小板制劑中血漿成分中的抗-A。近期接受了靜脈注射免疫球蛋白制品，或者含高濃度高效價(jià)ABO抗體的其他血漿或血液制品后的病人血漿中也含有非相容性ABO抗體。非正常的紅細(xì)胞凝集反應(yīng)現(xiàn)象，如獲得性B抗原紅細(xì)胞、B(A)、cisAB等。546

血清樣品中含有抗-A、抗-B以外的其它紅細(xì)胞抗體，反復(fù)輸血及多次妊娠史的人血清中可能含有的ABO血型以外的同種異型抗體，如完全抗體抗-M使M抗原陽(yáng)性的反定型試劑紅細(xì)胞都凝集。有些人血清中含高效價(jià)冷自身抗體抗-I，或冷同種異型抗體抗-M與抗原陽(yáng)性的反定型紅細(xì)胞在4℃發(fā)生反應(yīng)。二、血液標(biāo)本的問(wèn)題

4～6月齡內(nèi)嬰兒的血清ABO抗體是陰性或很弱。一般對(duì)嬰兒不檢測(cè)血清ABO抗體反定型，因?yàn)閶雰翰粌H是抗體弱，而且其大部分抗體是是被動(dòng)地來(lái)自母體。嬰兒在3至6個(gè)月才開(kāi)始生成自己的ABO血型抗體。

ABO抗原性表達(dá)弱或太弱，ABO亞型紅細(xì)胞和ABO基因變異的個(gè)體紅細(xì)胞，或一些患白血病或其它惡性疾病的病人紅細(xì)胞，應(yīng)用抗-A、抗-B試劑未能出現(xiàn)預(yù)期的強(qiáng)陽(yáng)性凝集反應(yīng)，或沒(méi)見(jiàn)陽(yáng)性凝集。79

血漿或血清標(biāo)本中有PH值依賴型的自身抗體，在反應(yīng)液中EDTA作用下與紅細(xì)胞出現(xiàn)假陽(yáng)性凝集反應(yīng)，或出現(xiàn)錢串狀聚集紅細(xì)胞。8二、血液標(biāo)本的問(wèn)題

使用未洗滌的紅細(xì)胞標(biāo)本，懸浮紅細(xì)胞的血清或血漿中含有針對(duì)抗-A、抗-B試劑中染色劑或其它成分的抗體，引起假的陽(yáng)性反應(yīng)。

血清中有不正常濃度和不正常比例的大分子蛋白成分，或者是血液中高分子蛋白增多引起非特異凝集，可能出現(xiàn)緡錢狀紅細(xì)胞非特異性聚集現(xiàn)象。使用未洗滌的紅細(xì)胞標(biāo)本，懸浮紅細(xì)胞的血清或血漿中含高濃度A或B血型物質(zhì)，中和了抗體試劑，出現(xiàn)了假陰性反應(yīng)。1012

使用未洗滌紅細(xì)胞、血清中會(huì)有非正常的高濃度蛋白質(zhì)，或者病人輸用了大分子溶液，都可能出現(xiàn)非特異凝集。臍帶血中Wharton氏膠也可能導(dǎo)致臍帶血紅細(xì)胞發(fā)生非特異凝集。11二、血液標(biāo)本的問(wèn)題

異常高效價(jià)的補(bǔ)體結(jié)合抗體抗-A、抗-B，可能促進(jìn)大量的C1結(jié)合到紅細(xì)胞膜上，遮蔽了紅細(xì)胞A和B抗原位點(diǎn)，以致凝集反應(yīng)不能發(fā)生，已有文獻(xiàn)報(bào)道這種現(xiàn)象發(fā)生在無(wú)EDTA的血清標(biāo)本的ABO反定型試驗(yàn)。

病人血清中高活性、高濃度冷自身抗體嚴(yán)重致敏（包被）自身紅細(xì)胞，以至自發(fā)地發(fā)生凝集，而不是抗體試劑的特異性免疫反應(yīng)作用所致。141315

因治療需要在無(wú)菌環(huán)境下生活的兒童，有些血液中缺少抗-B抗體。二、血液標(biāo)本的問(wèn)題

接受馬科動(dòng)物提純的免疫球蛋白制品治療的病人，有的缺少抗-A抗體。

免疫抑制疾病或經(jīng)免疫抑制治療的病人血清中ABO抗體減少或消失。老年人隨年齡增高，生理性的ABO抗體減弱。171618

繼發(fā)于遺傳性免疫缺陷癥，或因疾病治療出現(xiàn)了嚴(yán)重的低伽馬球蛋白血癥，或者因多次血漿白蛋白置換治療，病人血漿中抗體被稀釋也可產(chǎn)生低伽馬球蛋白血癥。二、血液標(biāo)本的問(wèn)題

血清標(biāo)本中如果含有試劑紅細(xì)胞保護(hù)劑成份相應(yīng)的抗體，則可能發(fā)生與ABO血型抗原抗體反應(yīng)無(wú)關(guān)的紅細(xì)胞凝集反應(yīng)。

紅細(xì)胞多凝集現(xiàn)象，遺傳性或獲得性紅細(xì)胞膜改變，隱蔽的自身抗原暴露，也稱T-激活紅細(xì)胞，因?yàn)槿搜逯卸己羞@些暴露的抗原的自然發(fā)生的抗體，故ABO血型相容的血清和T-激活紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)。單克隆抗體血型試劑不發(fā)生這類反應(yīng)。2019正反定型不符的原因查找和處理02（1）基本程序

首先重復(fù)試驗(yàn)，如果先前試驗(yàn)中紅細(xì)胞懸浮在血清或血漿中，則改為洗滌后的紅細(xì)胞并懸浮在鹽水中，進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)。如果重復(fù)試驗(yàn)仍是正反定型不符，則繼續(xù)下列試驗(yàn)：010203040506

重取標(biāo)本：重新采集獻(xiàn)血員和受血者的血液新鮮標(biāo)本，這樣可能解決標(biāo)本采集或標(biāo)記的錯(cuò)誤或原標(biāo)本受污染所致的錯(cuò)誤結(jié)果。

查詢病人既往史，輸血史，骨髓移植史和用藥史等。

多次洗滌標(biāo)本紅細(xì)胞或試劑紅細(xì)胞，除去可能引起意外陽(yáng)性反應(yīng)的血漿中的或試劑紅細(xì)胞保存液中化學(xué)成分。應(yīng)換用新配制的或確定為無(wú)細(xì)菌污染的生理鹽水洗滌懸浮紅細(xì)胞。

應(yīng)用抗-AB，抗-A1或抗-H檢測(cè)紅細(xì)胞。

如果懷疑血清中有抗-A1，則用數(shù)份A1和A2紅細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行檢驗(yàn)。

室溫孵育30分鐘后，離心觀察凝集結(jié)果，能檢測(cè)弱的抗原抗體反應(yīng)，但要用O型和自身紅細(xì)胞做對(duì)照，以排除抗-I或抗-H等抗體的干擾?？?I和抗-H是對(duì)絕大部分成人紅細(xì)胞都反應(yīng)的凝集素。07

分析O型篩選細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果，確定是否是同種異型或自身冷抗體干擾正反定型結(jié)果。（2）ABO抗原弱或缺失所致正反定型不符合

合格的抗-A和抗-B試劑檢測(cè)A和B型人紅細(xì)胞，正定型絕大多數(shù)檢測(cè)都呈3+和4+的凝集強(qiáng)度；

反定型血清用合格的試劑紅細(xì)胞檢測(cè)絕大部分呈2+至4+的凝集強(qiáng)度。

正反定型不相符結(jié)果表現(xiàn)為沒(méi)有出現(xiàn)應(yīng)該出現(xiàn)的凝集，或出現(xiàn)不該出現(xiàn)的反映格局；

對(duì)于反應(yīng)的凝集強(qiáng)度低的標(biāo)本，也要引起警惕，分析原因，而沒(méi)有分析清楚原因的獻(xiàn)血員（待輸血液）應(yīng)該被認(rèn)作是非正常紅細(xì)胞，避免作為合格血液。

例如某人血清對(duì)B紅細(xì)胞試劑呈強(qiáng)凝集，對(duì)A紅細(xì)胞不凝集，但其紅細(xì)胞又不被抗-A和抗-B試劑凝集，該人可能是A血型人。

具有某些遺傳變異基因的個(gè)體或者某些相關(guān)疾病的病人紅細(xì)胞都可能表達(dá)很弱的A或B抗原。有助于增加對(duì)這些弱抗原檢出的方案有：1）將抗-A，抗-B和抗-AB試劑與洗滌過(guò)紅細(xì)胞在室溫孵育30分鐘，可以增強(qiáng)抗體與少量抗原的結(jié)合。在4℃的孵育可能進(jìn)一步增加抗體的結(jié)合。但一定要嚴(yán)格查看和遵照試劑的使用說(shuō)明書，可能所要求的是相反的使用溫度，該廠家試劑不能在低溫度，而相反要求在較高些溫度下使用。2）酶處理病人紅細(xì)胞：木瓜酶、無(wú)花果酶和菠蘿蛋白酶處理紅細(xì)胞能夠增強(qiáng)抗-A、抗-B反應(yīng)。有時(shí)，對(duì)經(jīng)酶處理過(guò)的紅細(xì)胞，經(jīng)室溫30分鐘孵育抗-A、抗-B才能夠反應(yīng)。同時(shí)必須設(shè)立對(duì)照：酶處理O型細(xì)胞，以確定ABO反應(yīng)特異性。有助于增加對(duì)這些弱抗原檢出的方案有：3）用人血清抗-A、抗-B進(jìn)行吸收放散試驗(yàn)檢測(cè)紅細(xì)胞弱A和弱B抗原。不是所有單克隆抗體試劑都適宜做吸收放散試驗(yàn)，只有已經(jīng)經(jīng)過(guò)系統(tǒng)驗(yàn)證的單克隆抗-A、抗-B（明確其細(xì)胞株名）才能應(yīng)用于此試驗(yàn)。抗-A1植物凝集素不適于做吸收放散試驗(yàn)，因?yàn)榉派⒁褐休^高濃度植物血凝素能夠引起非特異性反應(yīng)。本試驗(yàn)要同時(shí)做O型血吸收、放散試驗(yàn)作為對(duì)照，如果O型血放散液也與A和B型血凝集，則病人紅細(xì)胞放散液與A和B血的凝集反應(yīng)無(wú)關(guān)，結(jié)果無(wú)效，這是ABO系統(tǒng)以外的反應(yīng)。

4）檢測(cè)唾液中A、B和H血型抗原物質(zhì)和檢測(cè)Lewis血型，也有利于分析ABO血型正反定型不符。AB抗原減弱白血病、骨髓增生異常綜合征、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、再生障礙性貧血、細(xì)菌感染MN抗原減弱細(xì)菌感染、骨髓增生異常綜合征、白血病（Tn，Tk激活）i增強(qiáng)珠蛋白生成障礙性貧血、鐮刀細(xì)胞病、HEMPAS、Diamind-Blackfan貧血、成髓細(xì)胞或鐵粒幼紅細(xì)胞生成、難治性貧血獲得性A（Tn）骨髓增生異常綜合征、急性髓細(xì)胞白血病獲得性B細(xì)菌感染、胃腸道損傷或惡性病變獲得性T、Tk細(xì)胞感染獲得性K抗原屎腸球菌獲得性Jkb抗原屎腸球菌或微球菌感染缺失Cromer，Yt，Dombrock，JMH、Emm抗原陣發(fā)性夜間性血紅蛋白尿靶抗原（Rh，Kell，Kidd，LW）減弱自身免疫性溶血性貧血LW霍奇金病，淋巴瘤，白血病，肉瘤I，Rh，S，s，U，Kp*，Jk*，Xg°或En"減弱遺傳性口型細(xì)胞增多癥、橢圓紅細(xì)胞增多癥與抗原表達(dá)變化相關(guān)的疾病正定型的意外反應(yīng)結(jié)果031獲得性B紅細(xì)胞2獲得性類A抗原4抗體包被紅細(xì)胞3混合視野凝集5B(A)表型

如果反定型結(jié)果正確，與正定型結(jié)果出現(xiàn)不符時(shí)，其原因可能是：①與ABO基因變異有關(guān)

②與ABO基因變異無(wú)關(guān)

檢查病人的診斷，獲得性B抗原紅細(xì)胞出現(xiàn)常常有腸道細(xì)菌能夠進(jìn)入血循環(huán)的疾病，但是也發(fā)現(xiàn)過(guò)無(wú)任何疾病的獻(xiàn)血者出現(xiàn)了獲得性B抗原紅細(xì)胞；獲得性B紅細(xì)胞常常同時(shí)有T和Tn等多凝集紅細(xì)胞出現(xiàn)；病人血清檢測(cè)自身紅細(xì)胞，本身抗-B不與自身紅細(xì)胞上獲得性B抗原反應(yīng)，不出現(xiàn)凝集反應(yīng)；與某些單克隆抗體抗-B試劑凝集，與另一些單克隆抗-B試劑不反應(yīng)，這根據(jù)有關(guān)的單克隆抗體特征而定，一般生產(chǎn)廠家要加以說(shuō)明；調(diào)整人血清抗-B試劑PH至6.0時(shí)，即不與獲得性B細(xì)胞反應(yīng)，酸化的單克隆抗體試劑（PH6.0）也減少或消失與獲得性B紅細(xì)胞反應(yīng)；如果病人是分泌型，其唾液只含有A物質(zhì)和H物質(zhì)，而無(wú)B血型物質(zhì)；使用乙酸酐（aceticanhydride）處理獲得性B紅細(xì)胞，能夠明顯減弱其反應(yīng)性，而正常B紅細(xì)胞則不受此影響。在乙酸酐處理獲得性B紅細(xì)胞同時(shí)，A抗原性增強(qiáng)。（1）獲得性B紅細(xì)胞

血清與B型、AB型紅細(xì)胞反應(yīng)很強(qiáng)；紅細(xì)胞與抗-A試劑反應(yīng)很強(qiáng)，同時(shí)與人血清抗-B出現(xiàn)很弱凝集反應(yīng)，提示該人紅細(xì)胞有獲得性B抗原。一些細(xì)菌的脫乙?；甘笰型抗原表位單糖N-乙酰半乳糖脫乙酰，使之成為半乳糖胺，類似于B型抗原表位的半乳糖，即該半乳糖胺為獲得性B抗原表位，也只有A型人紅細(xì)胞能出現(xiàn)獲得性B抗原，確定A型紅細(xì)胞出現(xiàn)獲得性B抗原的條件和根據(jù)有下列幾點(diǎn)：（2）獲得性類A抗原

造血干細(xì)胞的體細(xì)胞突變可以造成部分紅細(xì)胞持續(xù)性Tn抗原激活（Tnactived），Tn的抗原表位是N-乙?；肴樘前?，類同A抗原。O型和B型紅細(xì)胞Tn激活后，表現(xiàn)如同獲得性A抗原，與人血清和部分單抗抗-A試劑反應(yīng)。A基因編碼的酶生成的正常的A抗原與該類A抗原（Tn）之區(qū)別為，可以用蛋白酶降解Tn分子，消除與抗-A反應(yīng)性，而正常A抗原不受影響，或是增強(qiáng)反應(yīng)。應(yīng)該強(qiáng)調(diào),Tn激活同T激活一樣,所引起的血凝為最多的凝集現(xiàn)象之一。Tn屬紅細(xì)胞隱蔽抗原，正常情況不暴露，在病理理情況下隱蔽抗原暴露，而人血清中都會(huì)有自然發(fā)生的抗-Tn和抗-T，因此，紅細(xì)胞隱蔽抗原暴露后與ABO所有血型的血清標(biāo)本或人血清血型試劑都會(huì)出現(xiàn)凝集反應(yīng)。（3）混合視野凝集

偶爾在標(biāo)本中存在確切的兩群紅細(xì)胞，即標(biāo)本中一部分紅細(xì)胞凝集，另一部分不凝集，呈混合視野凝集。這種現(xiàn)象可因幾種原因發(fā)生：非O型人近期輸用了O型血；病人接受了與自己ABO血型不一樣的骨髓移植；來(lái)自嵌合體的單合子的相嵌紅細(xì)胞（mosaicRBC）或者雙合子的交移體紅細(xì)胞（chimaeras）。由于輸血所致的混合視野凝集現(xiàn)象只能持續(xù)到輸入的紅細(xì)胞存活期結(jié)束；骨髓移植后，混合視野凝集現(xiàn)象在病人自身紅細(xì)胞生成結(jié)束消散，也可能持續(xù)存在；有相嵌和交移紅細(xì)胞的人混合視野凝集持續(xù)終生。A3細(xì)胞與抗A試劑應(yīng)呈典型的混合視野現(xiàn)象，當(dāng)凝集的細(xì)胞被除去后，再加入抗-A1試劑，原未凝集的紅細(xì)胞仍出現(xiàn)混合視野凝集現(xiàn)象。（4）抗體包被紅細(xì)胞

患新生兒溶血?。℉DN）嬰兒，或處在自身免疫或同種異體免疫狀況的成人，其紅細(xì)胞嚴(yán)重地包被IgG抗體分子，與含有一定蛋白濃度的試劑產(chǎn)生凝集，經(jīng)常是蛋白濃度18%~22%的抗D試劑和蛋白濃度6%~12%的抗-A、抗-B試劑發(fā)生這種自發(fā)凝集，在45℃進(jìn)行放散試驗(yàn)，可以從紅細(xì)胞上解離掉這些抗體，此后，即可用抗-A、抗-B很容易地檢測(cè)這些紅細(xì)胞血型。含冷抗體IgM自身凝集素的紅細(xì)胞標(biāo)本在鹽水中也發(fā)生凝集，這類冷抗體可能由37℃孵育和37℃洗滌被清除掉，也可由DTT等巰基化合物消除掉。（5）B(A)表型

此型人具有B基因和特別高水平的半乳糖基轉(zhuǎn)移酶，該酶卻能轉(zhuǎn)移A型決定基糖，N乙?；肴樘侵翈r藻糖分子上。應(yīng)用一般的人血清和大多數(shù)單克隆抗體ABO血型試劑，檢測(cè)B(A)型人為B型，而再用某些抗A的單克隆抗體（如MHO4）檢測(cè)，卻出現(xiàn)弱的凝集反應(yīng)，不同細(xì)胞株的抗-A單克隆抗體，對(duì)B(A)型紅細(xì)胞出現(xiàn)不同反應(yīng)格局，大部分不出現(xiàn)凝集，少數(shù)的單抗出現(xiàn)弱反應(yīng)，一般都弱于2+，凝集塊很易消散。B(A)型人血清對(duì)A1和A2紅細(xì)胞都凝集，而其它A血型人血清中可能凝集A1紅細(xì)胞，卻不凝集A2紅細(xì)胞，AB型中A抗原血型（AsubB）人的血清中有N-乙酰基半乳糖酶，而B(niǎo)(A)型人則無(wú)此酶。應(yīng)用兩類抗-A單抗，即會(huì)有凝集B(A)和不凝集B(A)的單克隆抗體試劑，可以區(qū)分B(A)表型所致的ABO正反定型不合。在臨床輸血工作中，受血者B(A)型人要以B型人對(duì)待。反定型的意外反應(yīng)結(jié)果04

免疫抑制病或經(jīng)受免疫治療的病人血清；新生兒血清；以及正常的老年人血清都可能抗-A、抗-B很弱，甚至消失。因此，要注意病人的年齡和診斷。（1）抗體太弱或消失。

如果正定型正確，而檢測(cè)血清中抗-A、抗-B，即反定型出現(xiàn)意外結(jié)果，或出現(xiàn)明確錯(cuò)誤的凝集反應(yīng)，可以按以下步驟分析和進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

非正常高濃度的抗-A、抗-B可以引起前帶現(xiàn)象，導(dǎo)致錯(cuò)誤的陰性反應(yīng)。將血清稀釋或用EDTA（2.5%）處理血清，可消除前帶現(xiàn)象