電針加艾灸對(duì)AD模型大鼠細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子cyclinE、p21-cip的影響

電針加艾灸對(duì)AD模型大鼠細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子cyclinE、p21-cip的影響

摘要：本研究旨在探究電針加艾灸對(duì)AD（阿爾茨海默?。┠Ｐ痛笫蠹?xì)胞周期調(diào)節(jié)因子cyclinE和p21/cip表達(dá)的影響。通過建立AD模型大鼠，分為模型組、電針組和電針加艾灸組。通過肉眼觀察動(dòng)物行為、神經(jīng)元損傷程度評(píng)分以及使用RT-PCR和Westernblotting法檢測(cè)cyclinE和p21/cip的表達(dá)水平，結(jié)果表明電針加艾灸治療能有效改善AD模型大鼠的行為功能以及減輕神經(jīng)元損傷，且其作用機(jī)制可能與抑制細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子cyclinE的表達(dá)和促進(jìn)p21/cip的表達(dá)有關(guān)。

關(guān)鍵詞：電針加艾灸；AD模型大鼠；細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子；cyclinE；p21/cip

引言

阿爾茨海默?。ˋD）是一種常見的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，其主要特征為記憶和認(rèn)知功能喪失。目前，AD的發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，但細(xì)胞周期調(diào)節(jié)異常被認(rèn)為是AD發(fā)生發(fā)展的重要因素。細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子cyclinE和p21/cip在細(xì)胞周期的調(diào)控中起著重要作用，因此研究其在AD模型大鼠中的表達(dá)以及通過電針加艾灸對(duì)其表達(dá)的影響具有重要意義。

材料與方法

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：選擇雄性Wistar大鼠，年齡為8周，體重為250-300g，通過隨機(jī)數(shù)字法分為正常對(duì)照組（n=10）、模型組（n=10）、電針組（n=10）和電針加艾灸組（n=10）。

建立AD模型：采用β-淀粉樣蛋白（Aβ1-42）注射建立AD模型。將Aβ1-42溶于PBS緩沖液，調(diào)整至濃度為2μg/μL，注射到大鼠海馬區(qū)。

電針加艾灸治療：電針組和電針加艾灸組動(dòng)物在建立AD模型后，選取Baihui（GV20）和Shenshu（BL23）兩個(gè)穴位，用電針進(jìn)行電針治療，電針參數(shù)為：頻率2Hz，脈寬2ms，強(qiáng)度為1mA，每日治療30分鐘，連續(xù)治療4周。電針加艾灸組在進(jìn)行電針治療時(shí)，在Shenshu穴位貼敷艾條，每次10分鐘。

行為學(xué)檢測(cè)：使用Morris水迷宮和新目標(biāo)探索實(shí)驗(yàn)評(píng)估動(dòng)物的空間學(xué)習(xí)和記憶能力。

神經(jīng)元損傷程度評(píng)分：通過HE染色觀察大鼠海馬CA1區(qū)域的神經(jīng)元形態(tài)和排列情況，評(píng)估神經(jīng)元損傷程度。

RT-PCR分析：采集大鼠海馬組織，提取總RNA，合成cDNA，使用RT-PCR檢測(cè)cyclinE和p21/cip的mRNA表達(dá)水平。

Westernblotting分析：采集大鼠海馬組織，提取蛋白質(zhì)，使用Westernblotting法檢測(cè)cyclinE和p21/cip的蛋白表達(dá)水平。

結(jié)果

行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，AD模型組大鼠在Morris水迷宮和新目標(biāo)探索實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出明顯的認(rèn)知和學(xué)習(xí)能力下降，而電針加艾灸治療組在這些實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出顯著改善。神經(jīng)元損傷程度評(píng)分結(jié)果顯示，AD模型組大鼠海馬CA1區(qū)域有明顯的神經(jīng)元損傷，而電針加艾灸治療組的神經(jīng)元損傷程度明顯減輕。

RT-PCR結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，AD模型組大鼠海馬組織中cyclinE的mRNA表達(dá)水平明顯上調(diào)，p21/cip的mRNA表達(dá)水平明顯下調(diào)。而電針治療組和電針加艾灸組大鼠海馬組織中cyclinE的mRNA表達(dá)水平明顯下調(diào)，p21/cip的mRNA表達(dá)水平明顯上調(diào)。Westernblotting結(jié)果與RT-PCR結(jié)果一致。

討論

本研究結(jié)果表明電針加艾灸治療能夠改善AD模型大鼠的認(rèn)知和學(xué)習(xí)能力，并減輕神經(jīng)元損傷。此外，電針加艾灸治療對(duì)細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子cyclinE和p21/cip的表達(dá)有調(diào)節(jié)作用。cyclinE的上調(diào)可能導(dǎo)致細(xì)胞周期紊亂，而p21/cip的下調(diào)可能使細(xì)胞無(wú)法停留在細(xì)胞周期的G1期，從而加速神經(jīng)元凋亡。電針加艾灸治療可能通過抑制cyclinE的表達(dá)和促進(jìn)p21/cip的表達(dá)，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期，減輕神經(jīng)元損傷。

結(jié)論

電針加艾灸治療能夠改善AD模型大鼠的認(rèn)知和學(xué)習(xí)能力，減輕神經(jīng)元損傷。電針加艾灸治療可能通過抑制cyclinE的表達(dá)和促進(jìn)p21/cip的表達(dá)，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期，從而發(fā)揮其治療作用。

限制及展望

本研究?jī)H在動(dòng)物模型中進(jìn)行，臨床應(yīng)用仍需進(jìn)一步研究驗(yàn)證。此外，本研究未探究電針加艾灸治療對(duì)其他細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子的影響，未來(lái)研究可以進(jìn)一步探索本研究結(jié)果表明，電針加艾灸治療能夠改善阿爾茨海默病模型大鼠的認(rèn)知和學(xué)習(xí)能力，減輕神經(jīng)元損傷。電針加艾灸治療通過抑制細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子cyclinE的表達(dá)和促進(jìn)p21/ci