病原微生物實驗室生物安全管理手冊

微生物實驗室生物平安管理手冊***疾病預防控制中心生物平安管理體系文件目錄序號名稱備注1實驗室人員和工程準入制度2人員培訓考核制度3人員健康監(jiān)護制度4生物平安檢查制度5實驗室人員生物平安行為標準6事件、傷害、事故和職業(yè)性疾病報告制度7實驗室生物危險標識使用規(guī)定8實驗室內(nèi)務管理制度9實驗室菌毒種和生物樣本平安保管和檔案管理制度10實驗室廢棄物管理制度11實驗室消毒隔離制度12實驗室應急處置預案13實驗活動生物平安標準操作規(guī)程實驗室人員和工程準入制度1.目的標準生物平安二級實驗室的使用和管理;保證操作人員;實驗對象和環(huán)境平安;確保檢測結果準確可靠..2.適用范圍適用于生物平安二級實驗室平安運轉及在此環(huán)境下的所有檢測工作..3.職責進入生物平安二級實驗室從事檢測工作的所有人員嚴格按照本規(guī)定執(zhí)行..4.具體要求：4.1概述4.1.1生物平安二級實驗室用于對檢驗者和環(huán)境有中度潛在危險樣品的各項實驗;必須符合以下規(guī)定：4.1.1.1具備操作資質的人員可在生物平安二級實驗室內(nèi)工作;其他任何人未經(jīng)許可禁止進入實驗室..4.1.1.2在實驗室內(nèi)的一切活動;必須遵照生物平安手冊的規(guī)定進行..4.1.1.3實驗室內(nèi)污染的空氣需通過高效過濾器前方能排出室外..4.1.1.4實驗室內(nèi)產(chǎn)生的污水;必須經(jīng)過消毒前方可進入公共污水系統(tǒng)..4.1.1.5實驗室的所有廢棄品;必須通過高壓滅菌后才能處理和清洗..必須攜出實驗室的中間實驗材料、更換維修的儀器設備、也只有在確保無病原微生物污染的條件下;才能攜出實驗室..4.1.1.6實驗室內(nèi)準備二級全排式生物平安柜;所有可能造成污染的能夠置于生物平安柜內(nèi)的實驗操作;置其內(nèi)進行;以保證實驗室內(nèi)空間的平安..4.1.2實驗室運行的平安性要求本手冊規(guī)定的各項要求;首先是為了保證實驗室的平安運行;包括防止實驗室工作人員的感染、防止實驗室操作的病原微生物對環(huán)境的污染、防止檢測樣品的污染;保證實驗結果的準確可靠..4.1.3實驗室工作的質量要求本手冊規(guī)定的各項要求;同時也是為了保證實驗室的工作質量;即：實驗產(chǎn)生的各項結果和數(shù)據(jù);必須準確可靠：實驗室出具的檢驗報告;必須明確完整..4.2實驗室操作規(guī)程4.2.1啟動實驗室開始工作前半小時..開啟實驗室主電源;使實驗室及生物平安柜投入運行..開啟順序：①開啟屋迎風機②開啟全排風③開啟空調(diào)④開啟平安柜⑤翻開房間紫外線燈..4.2.2個人防護工作人員按照以下要求進行個人防護;才能進入實驗室區(qū)域：1在更衣室中換穿工作服和工作鞋..2在清潔區(qū)內(nèi);根據(jù)實驗要求做好防護..3實驗中需使用腐蝕性試劑時;在膠乳手套外加帶一次性塑料手套；需要進行可能造成污染材料飛濺的操作時;需加戴防護面罩..4.2.3進入實驗室4.2.3.1工作人員進入實驗室時;每進入一道門;應將此門關好;再開啟下一道門..4.2.3.2進入實驗室后;關閉房間紫外線燈..4.2.3.3檢查實驗室運轉是否正常..4.2.3.4做好開始實驗的各項準備..4.2.4啟用標本、試劑一切準備工作就緒后;才將標本和試劑從冰箱中取出;直接放入生物平安柜中..用完立即歸位;使其在冰箱外停留的時間盡可能短..4.2.5操作4.2.5.1嚴格按照試劑使用說明進行操作..洗滌時防止液體材料飛濺..吸取、稀釋液體時;將吸管插入試管底部;用吸球緩慢吸取;防止產(chǎn)生汽泡或汽溶膠..4.2.5.2離心時;應使用雙蓋封閉式離心機和全封閉試管;每管離心液總量低于最高容量1個刻度單位：平衡時不得有液體滲陋到管套中;離心機使用后立即用消毒液擦洗消毒..4.2.6觀察結果不翻開容器的觀察允許在生物平安柜外進行;否則;必須在生物平安柜內(nèi)觀察結果..4.2.7準予攜出實驗室的材料確保不含感染性的實驗材料;才可以從實驗室攜出..容器外表應用75%乙醇消毒..4.2.8實驗室清潔每一實驗步驟完成后;均應清理臺面..所有用過的試劑均應歸復原位；使過的吸管等長形器材放入儲存污物的盒內(nèi)；鋒利品放入專用的污物盒；紙巾軟物品放入污物袋；在臺面上噴灑75%乙醇;保持20分鐘;然后以紙巾擦干..實驗室的其他外表;也應經(jīng)常用75%乙醇擦拭..4.2.9污染物品處理放置污染物品的容器裝滿時;應更換新的容器..實驗結束后;對用過的污染物品進行高壓消毒..4.2.10更換工作服..工作完畢的更衣順序是;先用消毒液浸泡手套5分鐘;然后依次除去口罩、防護服、鞋套;放入高壓消毒袋內(nèi);再次浸泡手套后除去手套;用75%酒精棉球擦面部裸露部位..4.2.11實驗室消毒每次工作完畢;生物平安柜內(nèi)用75%酒精擦拭臺面;消毒液消毒地面;開啟紫外線燈照射1小時后;逐一關閉實驗室送風和通風設備{關閉順序與開啟順序相反}..4.3實驗記錄與實驗報告4.3.1實驗記錄在實驗室內(nèi);實驗記錄應使用鉛筆書寫..記錄內(nèi)容應簡明扼要;包括實驗日期;實驗目的和實驗的根本條件等提示記憶的內(nèi)容;并較詳細地記載觀察到的實際現(xiàn)象及數(shù)據(jù)結果..要求字跡應清晰;數(shù)字成行成列;以防止錄入錯誤..4.3.2實驗記錄帶出實驗室將上述記錄在紙張上的實驗記錄應用80福爾馬林;密閉熏蒸消毒6小時前方可帶出實驗室..或閣著實驗室玻璃窗由清潔區(qū)工作人員抄錄一份..4.3.3實驗記錄錄入計算機實驗記錄必須在實驗結束后24小時內(nèi)錄入計算機..記錄準確的實驗報告和錄入時間..再按照由實驗室?guī)С龅臅鴮懹涗?準確地記載實驗結果和數(shù)據(jù)..錄入后;書寫記錄保存1周;以備查驗..實驗記錄錄入后;一般不得修改..因數(shù)據(jù)記錄錯誤;錄入錯誤;或實際觀察到的實驗結果改變;必須更改記錄時;不要刪除已經(jīng)錄入的描述和數(shù)據(jù);而應錄入新的描寫和數(shù)據(jù);并注明更改原因..4.3.4實驗室記錄備份每月一次;將上月計算機的實驗記錄做出備份;備份的實驗記錄不得修改..實驗室負責人應定期檢查實驗記錄;核對備份與原始的實驗記錄;對記錄中的缺陷提出修改意見..4.3.5實驗記錄的保存年限實驗記錄保存一年..已使用的實驗記錄出具報告;發(fā)表論文;或以其他方式引用;在使用后再保存一年..如無特殊必要;備份的實驗記錄一般永久保存..4.3.6出具實驗報告在需要出具正式實驗報告的場合;報告由實驗者填寫署名;交實驗室負責人記錄核對后簽字;再由單位簽發(fā)人簽字并加蓋公章發(fā)出..4.4標本保管規(guī)則4.4.1標本進入實驗室4.4.1.1出實驗室采集的標本;本實驗室統(tǒng)一登記編號;能反映出標本的來源、種類、性質、目的等相關信息..4.4.1.2有關單位送檢的標本由實驗室統(tǒng)一登記編號;注明送檢單位、送檢時間、種類、性質、實驗目的等相關信息..4.4.2標本的保管根據(jù)標本的性質、目的進行保存;每分標本分兩份;一份檢測時使用;另一份備用..標本因各種原因損失時;啟用后備標本;并重新備份..4.4.3標本的銷毀確定不用的標本;采用高壓滅菌后燃燒的方式銷毀..4.5實驗室裝備保養(yǎng)4.5.1實驗室定期保養(yǎng)實驗室的定期保養(yǎng)按照提供實驗室設備廠商的規(guī)定進行;主要是對機械和電器局部進行維護..4.5.2實驗室儀器設備的保養(yǎng)和維護實驗室內(nèi)的儀器設備的保養(yǎng)由實驗室工作人員進行..維護有專業(yè)人員進行..生物平安柜的濾器必須按說明書規(guī)定的時間定期由專業(yè)人員更換;其它儀器設備也應根據(jù)實際需要清潔保養(yǎng)..4.5.3實驗室儀器設備的維修更換儀器設備需要更新;需要離開實驗室進行維修;或損壞需要更換;以及必須臨時進入實驗室使用;使用完畢后必須撤出實驗室的貴重儀器;在撤出實驗室之前必須以恰當?shù)姆绞絿栏裣?方可處理或重新投入使用..4.6意外情況處理4.6.1實驗室意外事件的處理原則4.6.1.1造成或可能造成實驗室污染;但未造成人身傷害的實驗室報告;由實驗室負責人處理..例如實驗過程中..由于標本、試劑益處濺落造成操作臺或地面的污染等;應立即噴灑消毒液并覆蓋浸透消毒液的紙巾;待消毒液徹底浸泡30分鐘后;對污染的物品進行清理..清理后的物品高壓滅菌..并填寫生物平安2級實驗室意外情況登記與處理記錄表;實驗室負責人應指導這些處理活動;并檢查處理效果..4.6.1.2實驗室事故可能造成氣溶膠污染;如壓力容器或管道破裂、離心機事故等;應立即關閉實驗室;張貼禁止入內(nèi)的標識..用消毒液噴霧和紫外線照射污染的區(qū)域;24小時再進行終末消毒;實驗室負責人除立即采取對應措施外;應向上級部門報告;并填寫意外情況登記與處理記錄表..4.6.1.3實驗室工作人員在沒有強毒微生物時;在實驗室內(nèi)受到意外傷害;如割傷、燒傷、燙傷等;在實驗室內(nèi)昏倒或發(fā)生身體嚴重不適;也有實驗室負責人處理..令受到傷害的人員立即停止工作;用消毒液清洗未破損的平凡外表;傷口以碘伏消毒;眼睛用無菌生理鹽水沖洗..由在同一實驗室內(nèi)人員或派人迅速著裝進入實驗室;去除造成傷害的原因;清理實驗材料;幫助受傷人員緊急處理并撤離實驗室..受到傷害的人員應進行治療并休息;在身體狀況未恢復之前;不得重新進入實驗室工作..實驗室在經(jīng)過整理;消除了造成傷害的故障之后;方可重新使用..4.6.1.4傷害事故可能導致被強毒微生物感染;例如針頭刺破、銳器割傷、黏膜暴露等途徑接觸到感染性液體;或在操作過程中發(fā)生培養(yǎng)物、污染材料濺落身體外表;意外接種等情況;首先進行局部處理;用肥皂和水清洗污染的皮膚;擠壓傷口盡可能擠出損傷處的血液;用肥皂和清水沖洗;用消毒液浸泡或涂抹消毒;并包扎傷口..暴露的黏膜應盡快用生理鹽水或清水沖洗干凈..實驗室負責人應向上級部門報告;對受傷害者進行隔離觀察;同時根據(jù)情況預防性用藥;并寫出職業(yè)暴露后預防感染的評價和處理方案..4.6.2實驗室人員的隔離觀察發(fā)生可疑的實驗室感染事故時;應對被感染的人員進行隔離觀察..如果判定為法定的傳染病感染;應按傳染病防治法的規(guī)定報告;同時給予有效的隔離治療人員培訓考核制度1.目的標準實驗室相關人員的培訓考核2.適用范圍適用于生物平安涉及的所有工作人員3、人員培訓考核制度3.1.實驗室工作人員的培訓新工作人員進入實驗室前;必須經(jīng)過培訓;取得進入實驗室工作的資格..培訓由實驗室負責人組織進行;并指定熟悉實驗室工作的人員擔任輔導..培訓內(nèi)容包括：1相關檢驗的國家診斷標準、處理原則以及本手冊內(nèi)容..2實驗室所有設備的使用方法..3個人防護方法..4實驗室根本技術..5實驗室消毒凈化的方法..3.2.實驗室工作人員的資格考試新工作人員經(jīng)過培訓后;由實驗室負責人組織考核..通過考核后;還須與有資格的工作人員一同工作3個月;才能獲得獨立進行實驗室操作的正式資格..人員健康監(jiān)護制度1.目的標準實驗室相關人員的健康監(jiān)護2.適用范圍適用于生物平安涉及的所有工作人員3、人員健康監(jiān)護制度3.1工作人員從事工作前必須進行HIV抗體和甲肝、乙肝、丙肝等肝炎病毒標記物的檢測;每半年進行一次HIV抗體復檢;并保存血樣一年以上..3.2工作人員應每年進行一次體檢;并將可能涉及生物平安危害的體檢結果存檔;以便判斷生物平安危害是否發(fā)生..3.3實驗室應建立人員健康監(jiān)護檔案;檔案內(nèi)容包括既往病史、檢測結果、免疫接種史等;以便對從事涉及生物平安危害人員的健康狀況進行跟蹤..3.4實驗室工作人員的適合工作狀態(tài)實驗室工作人員必須在身體狀況良好的情況下;才能進入實驗室工作..出現(xiàn)以下情況;不應進入實驗室：身體出現(xiàn)開放性損傷；患發(fā)熱性疾?。焊忻?、上呼吸道感染；其他導致抵抗力下降的狀況：妊娠、在實驗室內(nèi)連續(xù)工作4小時以上或其他原因造成的疲勞狀態(tài)..生物平安檢查制度1.目的標準實驗室生物平安;保證設備正常運行..2.適用范圍適用于生物平安涉及的儀器設備比方生物平安柜等3、生物平安檢查制度實驗室內(nèi);每2個月以細菌培養(yǎng)的方式進行平安性檢測..生物平安柜內(nèi)放置平板培養(yǎng)基2個;實驗室4角和中間各放置1個;半污染區(qū)放置2個..將平皿敞開5分鐘;然后蓋上;每平板菌落數(shù)平均不得超過2個;超過標準;需要對實驗室或污染部位進行甲醛熏蒸消毒..實驗室人員生物平安行為標準1.目的標準實驗室人員的生物平安行為標準2.適用范圍適用于生物平安涉及的所有工作人員3生物平安組織管理與行為標準3.1組織框架圖單位法人{或授權}負責人↓實驗室負責人↓生物平安員↓實驗室工作人員3.2各類人員相應行為標準3.2.1單位法人{或授權}負責人1負責組織生物平安實驗室的立項、選址;施工隊的資質驗證..2負責成立生物平安委員會負責生物平安;制定管理制度;監(jiān)督有關法規(guī)和操作規(guī)程的執(zhí)行情況..3負責組織對造成外環(huán)境污染、實驗室污染、人身傷害事故的調(diào)查與處理..3.2.2實驗室負責人1組織制定平安手冊、操作規(guī)程等文件..2按照上述文件要求組織實驗室的各項工作;保證實驗室運行的平安和實驗室工作質量的準確可靠..3組織進入生物平安二級實驗室的人員進行業(yè)務培訓;保證工作人員熟知微生物的操作規(guī)程和技術;掌握實驗室設備的特殊要求并熟練操作;對培訓的結果進行考核;決定進入實驗室工作人員的資格..3.2.3生物平安員1對技術方法、化學品、材料與設備定期進行內(nèi)部平安檢查;確保其符合國家和地方的有關平安與衛(wèi)生政策與標準..一旦發(fā)現(xiàn)不平安因素;立即停止工作并上報實驗室負責人..2與有關人員討論研究平安政策的問題..3確認所有工作人員都具有進入實驗室工作的資格..4為所有人員提供連續(xù)性的平安要教育與指導..5針對操作程序、技術方法和各種條件要求的變更;以及新設備的引進;為全體工作人員提供最新的平安文獻和信息資料..6定期檢查實驗室的各項技術參數(shù);組織對實驗室裝備的常規(guī)保養(yǎng)..7所有可能涉及潛在傳染性或有毒物質泄露的意外事件與事故;即使沒有人員受傷或暴露;也要予以調(diào)查;并向實驗室負責人員和平安委員會報告調(diào)查結果和提出建議..8當任何實驗室工作人員的疾病或缺勤與工作有關;并被記錄為可能的實驗室獲得性感染時;協(xié)助隨訪調(diào)查其疾病或缺勤情況..9確保在發(fā)生傳染性物質濺灑其他事件時;監(jiān)督消毒凈化程序得到正確執(zhí)行；并對這類意外事件和事故進行詳細的書面記錄..10確保任何需要修理和維護的儀器設備在消毒與凈化之前方可運出實驗室..生物平安員由主管檢驗師以上的人員承當;必須具備如下資質：具有實際工作的經(jīng)驗；對操作的微生物有全面、完整的了解；具有組織實驗室工作的能力；對工作有高度的責任心..3.2.4實驗室工作人員1生物平安二級實驗室;只允許進行實驗室目的規(guī)定的操作;與此無關的活動一律不得進行..2必須按規(guī)定進行個人防護;方得進入實驗室..3保持實驗室環(huán)境的整潔;每項工作完成之后;必須清理和清潔臺面;離開實驗室4注意個人的健康狀況;出現(xiàn)身體不適情況;應及時向實驗室負責人報告..5實驗室內(nèi)禁止飲食、吸煙、訪客和喧嘩..實驗室工作人員的技術要求1必須了解實驗室平安原理;熟悉本手冊的各項規(guī)定;熟記緊急情況下的正確應對措施..2掌握病原微生物操作的根本要求;正確、平安地實用標本;防止污染;以獲得準確、可靠的實驗結果..3必須熟悉相關實驗的國家標準;能夠完成標準所規(guī)定的任務..4一旦發(fā)生意外;立即向生物平安員匯報..4、個人防護程序4.1個人防護用品的使用要求4.1.1口罩：應使用N95型口罩或12---16層棉紗口罩;最好使用防濺口罩{如31860型}如有胡須應刮去;使用應始終保持口罩與臉緊貼..一次性使用口罩應在使用后4小時丟棄;不能重復使用;不能與他人共同使用..如口罩遭到分泌物飛濺或弄濕;應嚴格洗手后;帶上清潔手套更換..4.1.2防護面罩：實驗人員在進行工作時應佩帶防護面罩;防護面罩要求透亮度好;有較好的防飛濺功能;重復使用前應進行徹底消毒..4.1.3防護服：實驗人員工作時應穿戴一次性防護服..最好是連體式;防水及抗靜電性能好;無過濾作用..袖口、腳踝口應為彈性收口;面部、腰部應有彈性收口或拉繩收口..4.1.4手套和鞋套：鞋套應為一次性防水鞋套..手套為一次性膠乳手套;須戴兩副;外層手套應根據(jù)需要及時更換..4.2個人防護用品的穿戴順序4.2.1進入清潔區(qū)前穿上普通白大衣和實驗室專用鞋..4.2.2進入清潔區(qū)時穿戴一次性口罩;手術帽;一次性隔離衣、兩副膠乳手套和兩副一次性鞋套..注意將手套和鞋套分別套在袖口和褲口外..4.2.3戴N95口罩及防護面罩、穿防水隔離服、防水鞋套、再戴外層手套..4.3個人防護用品脫卸順序4.3.1完成實驗后;在半污染區(qū)先用75%乙醇溶液消毒外層手套;然后脫掉外層手套{在脫另一只手套時;手指只能接觸手套的里部}..4.3.2著內(nèi)層手套依次脫掉防護面罩、N95口罩、防水鞋套及防水隔離服{脫隔離服時;不要接觸隔離服的外外表;應從里反脫;以保里面超外}..將脫掉的物品放入專用消毒袋中就地高壓消毒..防護面罩等重復使用的物品立即放入消毒液內(nèi);按有關規(guī)定消毒處理..4.3.3脫掉外層一次性鞋套;用75%乙醇溶液消毒內(nèi)層手套..4.3.4戴者手套脫掉一次性口罩、手術帽、內(nèi)層鞋套、然后脫掉一次性隔離衣及手套;放入消毒袋高壓消毒..4.3.5用消毒巾擦拭面部;用碘伏徹底消毒雙手;并用流動水沖洗..事件、傷害、事故和職業(yè)性疾病報告制度1、目的糾正檢驗工作中的過失;及時處理責任事故;吸取事故的教訓;確保檢驗設備和人員的平安..2、范圍適用于檢驗工作中出現(xiàn)的事故分析報告、調(diào)查和處理..3、職責3.1事故責任部門負責人填寫事故報告單;報告事故發(fā)生的原因及采取的措施..3.2業(yè)務質量管理科和有關科室負責人協(xié)助中心負責人做好事故的調(diào)查處理工作..4、工作程序4.1事故分類凡違反各項規(guī)定所造成的事故均為責任事故;按其經(jīng)濟損失和人身傷害和大小分為以下幾種：大小事故界限表損失情況小事故一般事故大事故重大事故經(jīng)濟損失≤100元100~1000元1000~10000元≥10000元人身傷亡一人受傷;休工≤3日一人受傷;休工3日以上兩人受傷或一人受傷;休工1-6個月三人以上受傷;休工一年以上;或一人致殘或死亡..4.2事故的處理4.2.1事故發(fā)生后;應立即采取有效措施;防止事態(tài)擴大;搶救受傷人員和儀器設備;報告上級領導..4.2.2事故發(fā)生3日內(nèi);事故責任人寫出事故發(fā)生原因、經(jīng)過及教訓、責任;并由發(fā)生事故科室填寫事故報告單;報業(yè)務質量管理科和行政管理科..4.2.3事故發(fā)生后5日內(nèi);由業(yè)務質量管理科和行政管理科協(xié)助中心負責人主持召開事故分析會;對事故進行分析并對事故責任人作出處理..事故責任科室采取糾正措施;防止類似事故再發(fā)生..4.2.4重大事故發(fā)生后一周內(nèi);由中心負責人向上級主管部門送交事故處理專題報告..4.2.5事故報告處理單等記錄材料由業(yè)務質量管理科歸檔保存..大事故和重大事故記入事故責任人技術檔案..實驗室生物危險標識使用規(guī)定1.目的標準生物平安二級實驗室的使用和管理..2.適用范圍適用于生物平安二級實驗室..3.具體要求：3.1在具有生物平安二級實驗室門口加貼專門的生物平安警示標識;以防止無關人員進入相關區(qū)域;造成感染的危險..3.2在有可能對人員造成威脅的生物標本儲存處加貼生物平安警示標識;以防無關人員將危險標本帶入平安區(qū)域對人員造成威脅..實驗室內(nèi)務管理制度1.目的確保生物平安二級實驗室的正常運行、實驗人員、物品和環(huán)境的平安2.適應范圍適應于生物平安二級實驗室..3.職責進入生物平安二級實驗室工作的所有工作人員嚴格遵照本管理制度執(zhí)行..4.根本制度4.1在主實驗室設置清潔區(qū)、半污染區(qū)和污染區(qū)..入口處貼有醒目的生物危險標志..4.2非實驗室有關人員和物品不得進入..4.3實驗室內(nèi)不得進食和飲水;或者進行其他與實驗無關的活動..4.4實驗室工作人員、外來合作者、進修和學習人員在進入實驗室及其崗位之前必須經(jīng)過實驗室負責人的批準..4.5實驗過程中;嚴格按有關操作程序操作;降低剪除和氣溶膠的產(chǎn)生..4.6用移液器吸取液體;嚴禁口吸..4.7實驗室的工作人員必須是經(jīng)受過專業(yè)培訓的技術人員..在獨立進行工作前還需在中高級實驗室技術人員指導下進行上崗培訓;到達合格標準;方可開始工作..4.8實驗室的工作人員必須被告知實驗室工作的潛在危險并接受實驗室平安教育;自愿從事實驗室工作..4.9實驗室的工作人員必須遵守實驗室的所有制度、規(guī)定和操作規(guī)程..4.10實驗室的工作人員在開始工作前必須留本底血清進行有關的檢測;以后定期復檢..如有疫苗必須進行免疫注射..4.11所有培養(yǎng)物、廢棄物在運出實驗室前必須經(jīng)可行的消毒方法進行消毒..4.12工作前應消毒;活性物質濺出后要隨時消毒..5.實驗室特殊管理制度5.1進行感染性實驗室時;應禁止他人進入實驗室;或必須經(jīng)實驗室負責人同意方可入內(nèi);免疫耐受或正在使用免疫抑制劑的人員不許進入實驗室;或必須經(jīng)實驗室負責同意方可入內(nèi)..5.2實驗室人員進入實驗室前必須進行有效的培養(yǎng)和模擬訓練..掌握預防暴露和暴露后的消毒處理程序..5.3實驗室人員應接受必要的免疫接種和相應的抗體水品測定..5.4實驗室事故處理：工作人員在操作過程中發(fā)生意外;如針刺和切傷、皮膚污染、感染性標本濺及體表和口鼻眼內(nèi)、衣物污染實驗臺面等均視為平安事故;應視事故類型的不同情況;立即進行緊急處理..具體措施按《實驗室應急處置預案》執(zhí)行..5.5填寫意外情況登記與處理記錄表;并按規(guī)定報告給有關部門..5.6處特殊情況外;禁止在實驗室內(nèi)使用銳器..5.7剩余的標本應密封后置于適當條件下保存..5.8實驗過程中應使用鑒定合格的二級生物平安柜..5.9實驗設備在運出修理或維修前必須嚴格消毒;方可運出..實驗室菌毒種和生物樣本平安保管和檔案管理制度1.目的標準實驗室菌毒種和生物樣本的保管和檔案管理2.適用范圍實驗室菌毒種和生物樣本的處理和檔案管理3、實驗室菌毒種和生物樣本的保管3.1按國家規(guī)定可以保存的菌毒種;由指定的專人負責登記、保存和管理..按期傳代、鑒定;必須在無菌室或接種罩內(nèi)進行;并做好有關記錄..在保存過程中發(fā)現(xiàn)菌毒種變異或死亡;應及時上報科長和中心主任..3.2本區(qū)檢出的地方菌毒株應及時上報;因工作需要暫時保存的菌毒株也應按上級規(guī)定的時間進行銷毀處理..新發(fā)現(xiàn)的菌毒株;要做好原始記錄;并上報主管部門復核確認..3.3菌毒種必須每種設一記錄卡;其內(nèi)容包括：名稱、編號、來源、別離日期、引進日期、鑒定日期、鑒定結果、鑒定者、審核者、傳代情況、所用培養(yǎng)基、保存方法、溫度、使用轉移及銷毀情況、保存者、部門負責人等..3.4向上級主管部門申請索取菌毒種和向下級有關部門發(fā)放菌毒種時;應有2人參加辦理;嚴格執(zhí)行國家有關規(guī)定;手續(xù)要完備;并認真做好記錄備查..3.5一、二類菌毒種;應派專人向提供單位領取;不得郵寄；三類菌毒種的郵寄必須持有郵寄單位證明;并按照菌毒種郵寄與包裝的有關規(guī)定辦理..3.6未經(jīng)上級批準;任何單位及個人不得以工作之便;進行國際間各類菌毒種交流;做好菌毒種平安防范工作..4、檔案管理制度4.1、非實驗室人員不得隨意查看實驗室記錄4.2、實驗室人員負責妥善保存各種樣品登記本、報告單及實驗室原始記錄;不得擅自修改和銷毀4.3、專人負責保管感染者檔案4.4、未經(jīng)領導批準不得向無關人員或單位提供任何實驗室及感染者信息4.5、HIV抗體初篩實驗室檢測的陽性結果不是最終結果;須進一步確認;確認前不得出具陽性報告及告知受檢者本人或有關單位實驗室廢棄物管理制度1.目的標準廢棄物處理2.適用范圍鋒利器具和其他廢棄物的處理..3.具體方法：3.1鋒利器具的處理3.1.1鋒利器具;如針、注射器等;除特殊情況外;禁止在實驗室使用;盡可能用塑料器材代替玻璃器材..3.1.2注射和吸取感染性材料時;盡可能使用一次性注射器..用過的針頭禁止折段、剪段、折段、重新蓋帽或從注射器上取下;禁止用手直接操作..用過的針頭、注射器直接放入防刺破的盛廢棄銳器的容器中..非一次性銳器必須放置在堅壁容器中;進行高壓消毒處理..3.1.3盡可能使用帶針頭套的的注射器、無針頭的系統(tǒng)和其他平安裝置..3.1.4打碎的玻璃器具;禁止用手直接清理;必須使用其他工具;如掃把、簸箕、夾子或鑷子等..盛污染針、銳器及碎玻璃的容器在丟棄前必須徹底消毒..3.2廢棄物的處理3.2.1實驗后的廢棄物如不及時處置則會污染環(huán)境;從而對人造成危害;因此有關人員必須嚴格按照規(guī)定執(zhí)行..3.2.2實驗樣本在處理和進行實驗室檢測時產(chǎn)生的廢棄物;如一次性針頭、離心管、平皿等應放入適當?shù)娜萜骱蛧栏穹缆┑母邏捍鼉?nèi);待實驗結束后立即就地高壓消毒..3.2.3實驗過程中產(chǎn)生的污染性液體物質、廢棄的液體標本等放在盛有消毒液的嚴格防滲漏的專用容器中;并及時加蓋..3.2.4進行實驗所必須使用的容器;如針頭、一次性注射器、玻璃器具、手術刀片等;放入專用的堅壁容器內(nèi);加蓋密封..3.2.5以上所有盛裝廢棄物的容器;在每次實驗結束后;就地高壓消毒..3.2.6高壓鍋應有專人負責;嚴格按使用說明操作;確保在121條件下;高壓30分鐘;以到達消毒要求..所有實驗產(chǎn)生的廢棄物;必須經(jīng)嚴格高壓消毒前方能運出實驗區(qū);并送至指定地點集中燃燒處理..十一、實驗室消毒隔離制度1.目的標準微生物實驗室和生物平安二級實驗室的消毒隔離工作..2.適用范圍微生物實驗室和生物平安二級實驗室..3.職責所有工作人員都必須遵從本規(guī)程..4.具體步驟4.1實驗室根本要求4.1.1實驗室相對獨立;實驗室核心區(qū)包括實驗間及緩沖間;明確劃分清潔區(qū)、半污染區(qū)和污染區(qū);并有明顯標識..4.1.2各區(qū)域交叉處應設置有效氯2000的含氯消毒劑溶液浸濕的腳墊..4.1.3實驗室內(nèi)所有物品應專用;須帶出時必須嚴格消毒..4.1.4實驗人員進入實驗室應穿戴好個人防護用品;如隔離衣、防護眼睛、口罩、一次性手套等..實驗過程中注意自身防護;并防止操縱過程中的交叉污染..4.1.5培養(yǎng)基、組織、體液等必須放在防漏密閉的容器中儲運..4.1.6血清學試驗、樣品的處理和分裝應在BSL-2平安柜內(nèi)進行..4.1.7樣品離心使用密封的離心杯;以防濺出..4.1.8實驗過程中使用的器材、實驗廢棄物均應按廢棄物處理程序進行消毒處理..4.1.9當傳染性標本溢出或濺出后;應有專業(yè)人員立即消毒和清理..4.1.10實驗完畢;先消毒物體外表;再按規(guī)定程序脫下個人防護用品放入包裝袋內(nèi)就地高壓消毒;并進行空氣消毒..4.1.11離開實驗室前;必須按有關規(guī)定消毒雙手..4.2消毒方法4.2.1儀器等外表消毒：工作結束后;用含有效氯1000的消毒液或75%乙醇溶液擦拭消毒;作用20分鐘以上..4.2.2實驗器材的分類消毒：將使用后的銳器方入防刺破、防滲漏的密閉專用銳器處置盒內(nèi);121℃高壓消毒30分鐘..其他器材方入有效氯為2000mg/L的含氯消毒液內(nèi)浸泡1小時以上..處理時應防止皮膚損傷..4.2.3工作臺等物體外表消毒：工作完畢;用含有效氯2000mg/L的消毒液或75％乙醇溶液擦拭消毒;作用20分鐘以上..4.2.4個人防護用品消毒：實驗結束;將隔離衣、口罩、帽子、手套、鞋套等121℃高壓消毒30分鐘..防護鏡浸泡在75％乙醇或有效氯為1000mg/L的含氯消毒劑中;作用30-60分鐘..4.2.5手的消毒：用典伏或75％的乙醇擦拭;作用1-3分鐘..4.2.6空氣消毒：每次實驗前后用紫外燈照射消毒;每次不少于1小時;每立方米空間安裝紫外燈瓦數(shù)≥1.5W;距紫外燈1米處照射強度≥70W/㎡..4.2.7這張消毒：應用80ml/m3福爾馬林;密閉熏蒸消毒6小時前方可帶出..4.2.8地面消毒：工作結束;應用含有有效2000mg/L的消毒液噴灑拖地..4.2.9廢棄物的處理：實驗的廢棄物應放入適當?shù)娜萜鲀?nèi);就地121℃高壓消毒30分鐘;消毒后的廢棄物集中收集、燃燒處理..5.實驗室高壓消毒平安操作5.1使用前應了解并掌握高壓鍋的原理及操作規(guī)則;以及不正確使用而導致的災難性后果..5.2按照操作規(guī)程使用高壓鍋5.2.1接通電源;合上高壓滅菌器左側總電源開關..5.2.2注入加熱用水;注水至加熱器罩的水位水準器配件尖端浸入水中為止..5.2.3設定滅菌溫度;先按“編集〞鍵;然后按上下鍵調(diào)節(jié)到滅菌所需溫度;然后按“實行〞鍵;把所設溫度存進程序..5.2.4設定滅菌時間;先按“編集〞鍵;然后按上下鍵調(diào)節(jié)到滅菌所需時間;然后按“實行〞鍵;把所設時間存進程序..5.2.5按“實行〞鍵執(zhí)行滅菌程序;此時“滅菌〞燈閃爍..5.2.6當滅菌程序執(zhí)行完成;滅菌程序自動停止運行..5.2.7在確認壓力表的顯示壓力降到0刻度時;翻開高壓滅菌器頂蓋;取出滅菌樣品..5.3高壓鍋操作人員在使用高壓鍋時不得離開崗位；在日常使用過程中;必須嚴格按照操作規(guī)程執(zhí)行;并按照規(guī)定進行設備的維護..每1年保養(yǎng)一次;每月檢測一次消毒效果..5.4高壓鍋的物品不得放的過滿;否則影響滅菌效果..放好被消毒滅菌的物品后;高壓鍋的蓋子或門必須擰緊..5.5定期檢查高壓鍋;以確保其正常工作;防止意外事故發(fā)生;保證消毒滅局效果..5.6高壓滅菌平安操作步驟5.6.1在滅菌前將雙層的高壓滅菌帶包好;廢物在滅菌袋中的體積不能超過袋子體積的3/4;滅菌袋用橡皮帶捆好;但不能扎得太死;否則蒸汽不能進入所料袋內(nèi)影響滅菌效果..5.6.2實驗產(chǎn)生的所有廢物應該及時就地滅菌處理..如果滅菌器正在使用或優(yōu)于其它原因不能馬上使用;則廢物必須放在滅菌袋內(nèi)捆好并放在實驗室內(nèi);在存放期間確保袋子無損壞..5.6.3當高壓鍋消毒滅菌盜時間后;取出物品放在廢物收集處..5.6.4當開始滅菌時必須確信滅菌國內(nèi)水量適宜;高壓溫度和時間設置正確..滅菌應保持在121℃30分鐘;時間和溫度不得超過設定值;否則滅菌袋會融化;清理困難..十二、實驗室應急處置預案1．目的標準緊急情況的處理工作..2．適用范圍微生物實驗室和微生物平安二級實驗室..3．職責遇有緊急情況所有工作人員嚴格按此規(guī)程處理..4．具體要求：4.1造成或可能造成實驗室污染;但未造成人身傷害的實驗室事故;由實驗室負責人處理..例如實驗過程中;由于標本、試劑溢出濺落造成操作臺或地面的污染等;應立即噴灑消毒液并覆蓋浸透消毒液的紙巾;等消毒液徹底浸泡30分鐘后;對污染的物品進行處理..清理后的物品高壓滅菌..并填寫生物平安二級實驗室意外情況登記與處理記錄表;實驗室負責人應指導這些處理行動;并檢查處理效果..4.2在沒有強毒微生物時;再實驗室內(nèi)受到意外傷害;例如割傷、燒傷、燙傷等;由實驗室負責人處理..令受到傷害的人員立即停止工作;用消毒液清洗未破損的皮膚外表;傷口以碘伏消毒;眼睛用洗眼器反復沖洗..有在同一實驗室內(nèi)工作人員或派人迅速著裝進入實驗室;去除造成傷害的原因;清理實驗材料;幫助受傷人員緊急處理并撤離實驗室..受到傷害的人員應立即就醫(yī);并將受傷原因及接觸微生物的情況通報負責人..對其進行恰當而完整的病史記錄..在其身體狀況未恢復之前;不得重新進入實驗室工作..實驗室在經(jīng)過整理;消除了造成傷害的故障之后;方可重新使用..4.3傷害事故可能導致被強毒微生物感染;例如針頭刺破、銳器割傷、粘膜暴露等途徑接觸到感染性液體;首先進行局部處理;用肥皂和水清洗污染的皮膚;擠壓傷口盡可能擠出損傷處的血液;用肥皂或清水沖洗;用消毒液浸泡或涂抹消毒;并包扎傷口..在操作過程中發(fā)生培養(yǎng)物、污染材料濺落身體外表等情況;首先使用噴淋裝置;盡快將污染物沖洗掉;然后再進行局部處理..暴露的粘膜應盡快用生理鹽水或清水沖洗干凈..實驗室負責人應向上級部門報告;對受傷害者進行隔離觀察;同時根據(jù)情況預防性用藥;并寫出職業(yè)暴露后預防感染的評價和處理方案..4.4實驗室事故可能造成氣溶膠污染;如壓力容器或管道破裂等;立即關閉實驗室;疏散現(xiàn)場的所有人員;對所有暴露人員提出相應的醫(yī)學建議..立即通知實驗室負責人及生物平安員..至少在1小時內(nèi);任何人員不得進入現(xiàn)場;以便氣溶膠的消散記空氣中較重微粒的沉降..張貼禁止入內(nèi)的警示標志..在生物平安員的監(jiān)督下進行消毒、凈化處理；執(zhí)行這項工作時應當穿戴適宜的防護服及呼吸防護用具..實驗室負責人員除立即采取對應措施外;應向上級部門報告;填寫意外情況登記與處理記錄表..4.5培養(yǎng)物等傳染性物質的破碎被傳染性物質物質污染的小玻璃瓶及其他容器破碎時;用布或紙巾覆蓋;此后將消毒劑傾倒其上;放置30分鐘..其后即可去除掉;玻璃碎片應當用鑷子清理..污染區(qū)域應當用消毒劑清洗..破碎物品清理時如果使用了簸箕;應將其進行高壓滅菌或用有效的消毒劑浸泡24小時..清理使用過的布、紙巾、抹布及拖把;放入污染廢棄物容器中..上述步驟均應佩戴手套..4.6如果實驗室的紀錄表格、其他印刷品或書面材料遭到污染;在妥善轉抄后或烤后;應當將其棄入污染廢棄物容器..4.7試管破碎于密閉式平安離心杯中所有密閉式平安離心杯在生物平安過程中裝載和卸載..如果疑心發(fā)生了破損;應當將其蓋子擰松；此后;將整個離心杯高壓滅菌..4.8蓄意破壞鞏固、厚重的門、牢靠的鎖具以及限制出入;都是適宜的防范措施..發(fā)現(xiàn)蓄意破壞情況后報告實驗室負責人及生物平安員;視破壞種類按照上述方法進行處理;并詳細填寫意外情況登記與處理記錄表..十三、實驗活動生物平安標準操作規(guī)程一艾滋病初篩檢測實驗操作規(guī)程1.目的保證艾滋病病毒抗體ELISA實驗的準確性..2.適用范圍艾滋病病毒抗體ELISA實驗..3.具體要求3.1樣品采集樣品采集安試劑盒要求采集..采血時注意平安;用一次性注射器謹慎操作;防止發(fā)生刺傷和造成外界污染..血樣如即時用可存于普通冰箱;如要長期保存;別離血清置于-20℃及以下..同時做好記錄..3.2樣品運送樣品轉送;除特殊需要外;必須是血清或血漿;置于帶有蓋帽的試管內(nèi);或將塑料試管用酒精燈封死;防止樣品流出..試管上標明姓名、時間、編號;將試管放入專門帶蓋的容器內(nèi);容器的材料要易于消毒處理;在所放試管周圍上下墊有軟性物質;以免碰碎;容器外標有HIV檢測專用字樣和生物危害標志..路途較遠或氣候炎熱時;容器應置于4℃以下運送..這樣同時附送檢單..3.3樣品登記和處理3.3.1收到樣品后;及時填寫標本登記記錄表;送樣人、收樣人簽字;如已進行過初檢;登記初檢結果和實驗方法及所用試劑情況..3.3.2對從其他實驗室送來的樣品;檢查并注明送檢單與標本記錄的符合、樣品管破損、溢漏等情況..如有溢漏應立即將尚存的血樣移出;并對管壁和盛器消毒..檢查并記錄樣品的質量有無嚴重溶血、細菌污染、血脂過多以及黃疸等情況..3.3.3對實驗室自采的樣品;最好將血液先放置1-2個小時;再用3000離心15分鐘;吸出上清液備用;如在幾天內(nèi)檢測可放在2-8℃冰箱中;如要貯存;置于-20℃冰箱..3.4實驗準備3.4.1將試劑從冰箱中取出;按試劑盒要求時間恢復室溫..3.4.2檢查并記錄冰箱、溫箱溫度..3.4.3按照試劑盒要求準備實驗原始記錄表;標明空白、陰性對照、陽性對照、外部質控血清以及檢測樣本的位置：登記日期和實驗起止時間;記錄環(huán)境條件及試劑盒廠家、批號、效期：整個實驗過程中每一步操作都要在原始記錄表上詳細登記..3.4.4按照試劑盒的要求配置洗液及其他所需要的試劑..3.5加樣和稀釋根據(jù)樣品數(shù)量將適宜數(shù)量的酶標板條固定在板架上;為了不損壞洗扳機;每道上的酶標板條必須保持完整{缺乏局部可用廢棄的微孔添充};檢查加樣器加樣刻度是否與試劑盒要求的加樣量相符;按照原始記錄表說明的位置參加各種質控品和檢測樣品;注意：空白只加標本稀釋液..加樣量和稀釋度嚴格按照試劑盒說明書規(guī)定的操作;一般先加樣品稀釋液后再參加樣品..加樣要準確;小心不要使吸頭碰著酶標板空上是包被抗原..為保證加樣的準確;最好使用多孔道加樣器;使用時注意防止吸頭間的交叉污染..3.6溫育貼好封板膜;按照試劑盒要求的溫度和時間進行溫育;最好選擇濕育方法..3.7洗板開啟洗板機前;先檢查洗板機廢液瓶是否已排空;開啟后先用蒸餾水沖洗管道;再換上洗液瓶..按照試劑盒的要求;選擇、修改洗扳方式、洗滌次數(shù)和浸泡時間;根據(jù)所用酶標板的條數(shù)確定洗板道數(shù);根據(jù)酶標板的位置調(diào)節(jié)洗頭的位置;然后開始洗板;洗板結束后用蒸餾水沖洗管道..3.8加酶結合物對于二步法ELISA實驗需加酶結合物;按試劑盒要求完成..3.9加底物洗好板后應立即加底物;需加自配的底物應現(xiàn)配現(xiàn)用..3.10終止反響在規(guī)定的時間內(nèi)用試劑盒中的或根據(jù)要求自行配置的終止液終止反響..3.11酶標儀讀物按照試劑盒的要求選擇濾光片;確定空白孔位置;選擇適宜達的打印報告格式;讀數(shù)并打印結果..3.12所用儀器在使用后及時填寫使用記錄..3.13結果判斷計算3.13.1根據(jù)試劑盒說明書要求的陰陽對照OD值范圍判斷實驗的準確性;陰陽性對照OD值在范圍之內(nèi);試驗方可成立;超出范圍;試驗失敗;整個實驗重做..3.13.2在指控圖上標出外部指控血清的S/CO值;判斷實驗結果是否被接受..3.13.3以上兩個條件俊被接受后;根據(jù)試劑盒要求計算cutoff值..小于cutoff值的標本為陰性;大于或等于cutoff值得標本為陽性;在cutoff±10%的標本為灰色帶反響..陽性及灰色反響區(qū)標本;用原有的試劑盒另一種試劑重復試驗..3.14結果登記和報告將試驗結果登記在級路標和標本試劑表上;將OD值打印結果貼在原始記錄表上;檢查原始記錄表是否填寫完整;操作者;復核者簽字..陰性結果出具HIV抗體篩查報考;陰性結果填寫HIV抗體篩查陽性送檢單..3.15標本留存轉送陰性標本收集血清冷凍保存一年..并填寫陰性血清保存記錄表;陽性標本收集血清封口包好;冷藏運送送確認實驗室..4.支持性文件全國艾滋病監(jiān)測工作標準艾滋病實驗室平安操作及防護措施二、結核桿菌實驗室生物平安規(guī)程1.實驗室管理制度1實驗室入口處必須貼上生物危險標志;注明危險因子;生物平安級別;試驗室負責人和相關負責人姓名和..2實驗室應有明顯的區(qū)域劃分;清潔區(qū);辦污染區(qū)和污染區(qū)..3無論進入實驗室時間長短;必須填寫工作日志..要嚴格遵守實驗室的一切操作規(guī)程..4進行結核菌操作時;需有兩名工作人員同時進入實驗室;盡量防止單獨工作..5在對大批量的痰標本和菌株進行別離培養(yǎng)和藥敏試驗前;英語中心新主任和實驗室主任討論;必要時加強預防措施..6試驗室人員應做結核菌素試驗;試驗結果為陰性時;應接種卡介苗;并做好登記記錄..7外來進修;參觀人員必須學習實驗室的一切