復(fù)元膠囊對氣虛血瘀證大鼠血液高凝狀態(tài)的調(diào)節(jié)作用

復(fù)元膠囊對氣虛血瘀證大鼠血液高凝狀態(tài)的調(diào)節(jié)作用

氣虛血瘀證是一組復(fù)雜的臨床癥狀，包括多系統(tǒng)疾病。中醫(yī)理論認(rèn)為:氣為血之帥,氣之與血,如影隨形,氣行則血行,氣虛則血瘀?！秲?nèi)經(jīng)》開創(chuàng)了氣血理論,王清任《醫(yī)林改錯》提出了氣虛血瘀學(xué)說,近年來通過對臨床研究、實(shí)驗(yàn)動物模型、生物學(xué)基礎(chǔ)的研究,提出氣虛血瘀證存在血液濃、黏、凝、聚傾向,微循環(huán)障礙,凝血功能亢進(jìn),血管內(nèi)皮細(xì)胞受損和血栓栓塞性等病理特點(diǎn)。本文從分子水平觀察血漿纖維蛋白原(Fg)、P-選擇素(P-sel)、D-二聚體(D-D)與氣虛血瘀證的關(guān)系以及具有益氣活血、補(bǔ)肝益腎的復(fù)元膠囊對凝血與纖溶功能的調(diào)節(jié)和改善作用,為補(bǔ)腎活血中藥防治氣虛血瘀證提供理論基礎(chǔ)。1材料和方法1.1動物合格號SD大鼠,16月齡,雌雄各半,體重600～800g,重慶醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供,動物合格證號:SCXK(渝)2007-0001。1.2當(dāng)前重慶社會以當(dāng)前重慶藥物為復(fù)元膠囊,由黃芪、淫羊藿、川芎、當(dāng)歸、枸杞等組成,具有補(bǔ)腎益氣活血的功效,由重慶希爾安藥廠生產(chǎn)。芪參膠囊,由黃芪、丹參、人參、三七、水蛭等組成,具有益氣活血,化瘀止痛之功效,由河南省新誼藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn),批號:20103354。1.3試劑和機(jī)器ELISA試劑盒由上海源葉生物制劑公司提供。生產(chǎn)批號:20101227。ACL200型自動凝血分析儀。1.4方法1.4.1大鼠的造模及分組將90只大鼠隨機(jī)分出20只為空白對照組。其余70只為模型組?？瞻讓φ战M正常飲食,模型組按照氣虛血瘀模型建立大鼠模型。方法是:①游泳:將大鼠置于涼水(14～16℃)中游泳,疲勞時(shí)撈出水面(疲勞標(biāo)準(zhǔn)以大鼠第一次自然下沉為度),每日1次。②饑餓和高脂飲食:每只鼠按照大鼠體重40g/kg標(biāo)準(zhǔn)提供高脂飼料(每5kg普通飼料加豬油lkg),每天早上8:00點(diǎn)給予全天量的2/3,晚上8:00給予全天量的1/3。③寒濕:大鼠游泳完后,放置在通風(fēng)的環(huán)境中自然晾干,不給予保溫措施和擦拭水跡。連續(xù)4w,即出現(xiàn)精神萎頓、嗜睡、毛發(fā)枯黃脫落、輕度稀便、尾尖至根部出現(xiàn)輕度瘀血點(diǎn)等癥狀。1個月后隨機(jī)抽取10只空白對照組和10只模型組大鼠下腔靜脈血測定血液流變學(xué),見表1。將剩余的60只模型組大鼠隨機(jī)分為復(fù)元膠囊低、中、高劑量組、芪參膠囊組及模型組,每組10只。根據(jù)Meeh-Rubner氏公式計(jì)算給藥劑量,芪參膠囊組給予515.7mg·kg-1.d-1,復(fù)元膠囊高、中、低劑量按3∶1∶1/3,分別給予0.15、0.45和1.35g·kg-1.d-1。模型組和空白組均給予生理鹽水10ml/d灌胃,1次d,連續(xù)4w。1.4.2elisa雙抗體夾心法給藥1個月后,取大鼠下腔靜脈血,枸櫞酸鈉抗凝,離心后取血漿置于-20℃的冰箱里保存。有ELISA雙抗體夾心法檢測血漿P-sel和D-D的含量,嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。用凝血酶法(ACL200型自動凝血分析儀)測定血漿Fg的含量。指標(biāo)測定在重慶醫(yī)科大學(xué)眼科實(shí)驗(yàn)室完成。1.5統(tǒng)計(jì)處理采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件,計(jì)量資料用xˉ±sxˉ±s表示,采用LSD-t檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較。2結(jié)果2.1p-sel和d-d含量表1可見,復(fù)元膠囊低、中、高劑量組,芪參膠囊組治療1個月后與模型組相比較,血漿Fg,P-sel,D-D含量均偏低(P<0.05)。其中復(fù)元膠囊中、高劑量組與復(fù)元膠囊低劑量組比較,血漿Fg,P-sel,D-D含量差異顯著(P<0.05),但是復(fù)元膠囊中劑量和高劑量組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),各組大鼠大鼠Fg、P-sel及D-D的變化。2.2兩組大鼠的血液流變科學(xué)模型組與空白對照組比較,血液流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)均偏高(P<0.05),模型組大鼠血液流變學(xué)變化見表2。3復(fù)元膠囊對血小板fg、p-sel、d-d的影響高凝狀態(tài)是指多種病理因素引起的機(jī)體血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、血小板、凝血、纖溶以及體內(nèi)抗凝系統(tǒng)等功能失調(diào),血液的凝固性增高,有利于血栓形成的病理狀態(tài)。已有研究表明,氣虛血瘀證的病理生理變化與促凝因子增加,抗凝因子及纖溶活性物質(zhì)減少有關(guān)。Fg是血中含量豐富的一種糖蛋白,在凝血、止血過程中有重要的作用,Fg主要是通過以下途徑參與凝血調(diào)節(jié):①在凝血酶的作用下,肽鏈離解,分子結(jié)構(gòu)改變導(dǎo)致聚合反應(yīng),形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的纖維蛋白多聚體。②與血小板膜糖蛋白的Ⅱb/Ⅲa結(jié)合,介導(dǎo)血小板聚集反應(yīng)而影響血流黏滯度。血小板活化與血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷是血栓形成的始發(fā)環(huán)節(jié),P-sel則是一種富含半胱氨酸、高度糖化的整合蛋白質(zhì),它只在活化的血小板表面上表達(dá),并可釋放到血漿中,這是血漿P-sel的主要來源?，F(xiàn)在認(rèn)為P-sel可作為體內(nèi)血小板活化程度和血栓形成的標(biāo)志物。D-D是交聯(lián)纖維蛋白纖溶酶水解后降解的終末產(chǎn)物中的一種特殊碎片,其含量的增高可作為體內(nèi)血栓形成的分子標(biāo)志之一,提示體內(nèi)存在繼發(fā)性纖溶活性的增高。已有研究表明,氣虛血瘀患者血漿D-D含量高于正常人。本研究揭示了氣虛血瘀證大鼠存在高凝狀態(tài)和繼發(fā)性纖溶亢進(jìn),復(fù)元膠囊低、中、高劑量組,芪參膠囊組都能降低血漿Fg,P-sel,D-D含量,但是復(fù)元膠囊中、高劑量組的效果更為明顯。復(fù)元膠囊高劑量組與中劑量組差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,故治療量為中劑量即可,以免引起胃腸道不適及毒副作用。中醫(yī)認(rèn)為,“諸臟之陽,全賴腎陽以熙之,諸臟之陰,全賴腎陰以濡之”,故腎為人之根本。腎精不足可導(dǎo)致腎氣虧虛,無力溫煦,臟腑四肢百骸失其濡養(yǎng),功能失調(diào),并影響氣血