多糖的提取、結(jié)構(gòu)測定和生物活性

多糖的提取、結(jié)構(gòu)測定和生物活性

糖是自然界存在的法人實體。（或）酮糖是與糖苷鍵結(jié)合的聚合物。多糖是一切有生命的有機體必不可少的成分,它與維持生命的種種生理機能有著密切的聯(lián)系。近年來,植物、海洋生物及菌類等來源的多糖已作為有生物活性的天然產(chǎn)物中的一個重要類型出現(xiàn),各種多糖所具有的抗腫瘤、免疫、抗凝血、降血糖和抗病毒活性已相繼被發(fā)現(xiàn)。多糖具有復(fù)雜的結(jié)構(gòu),這是因為它具有許多不同單糖殘基、不同的連接位置和不同類型的糖苷鍵,能形成具有不同的構(gòu)象、不同的相對分子質(zhì)量,以及鏈內(nèi)和鏈間氫鍵的二級結(jié)構(gòu)。由于多糖的生物活性與其純度和化學(xué)結(jié)構(gòu)即糖苷鍵的不同連接方式有著重要的關(guān)系,因此,對多糖的研究開發(fā)包含了多糖的分離、純化、結(jié)構(gòu)測定、活性測定及結(jié)構(gòu)修飾。1提取、分離及其測定含量1.1糖提取和分離1.1.1脂溶性雜質(zhì)的提取許多植物的種子或動物樣品含較多的脂類物質(zhì),因此在提取之前用石油醚、乙醚等溶劑除去脂溶性雜質(zhì);用85%乙醇除去單糖、低聚糖及苷類等干擾性成分。1.1.2混合溶劑提取法多糖通常用水作溶劑來提取,可以用水浸煮提取,也可以用冷水浸提。水提取的多數(shù)是中性多糖,用弱堿性水溶液可以提取含有糖醛酸的多糖,應(yīng)注意的是在酸性條件下可能引起多糖中糖苷鍵的斷裂,提取時應(yīng)盡量避免酸性條件。還可按多糖不同性質(zhì)在粗分階段利用混合溶劑提取法對植物中不同的多糖進行分離,例如用十六烷基三甲基氫氧化銨(CTAB)來沉淀有活性的香菇多糖成分,用氯化鋅從奇果菌屬的一種真菌Grifolafrondosa中提取出6-分支的β-1,3-葡聚糖。根據(jù)多糖的溶解性可以用超濾離心分離法提取多糖。對于蛋白多糖,可利用加酶提取法提取多糖,如在提取液中加入膠酶等單酶或雙酶?；蛘哂脧?fù)合酶法,在水溶液中先加入中性鏈蛋白酶、果膠酶和纖維素酶酶解后提取多糖。利用多糖不溶于高濃度的乙醇的性質(zhì),可用高濃度乙醇沉淀提純多糖,但由于不同性質(zhì)或不同相對分子質(zhì)量的多糖沉淀所需乙醇濃度不同,它也可以用于樣品中不同多糖組分的分級分離。1.1.3去蛋白質(zhì)法用醇析所獲得的粗多糖常含有較多的蛋白質(zhì),需要除蛋白。除蛋白的方法傳統(tǒng)上有Sevag法、三氟三氯乙烷法及三氯乙酸-正丁醇法等。Sevag法是用得最多的方法,該方法是將多糖的水溶液與氯仿混合,并震搖成乳化液,此時蛋白質(zhì)變性成膠狀,離心后蛋白層存在于有機相和水相之間。為了加速蛋白質(zhì)的變性,最好用pH=4~5的緩沖溶液代替水,并加少量正丁醇或正戊醇,或?qū)⒙确隆⒄〈?5∶1)加入糖液1份中振搖后離心去蛋白質(zhì)。另外,也可以利用蛋白酶可水解蛋白質(zhì)的特性,在多糖的水提液中加入中性蛋白酶和糜蛋白酶,與Sevag法結(jié)合進行脫蛋白;或?qū)⒌鞍酌概c三氯乙酸法結(jié)合除蛋白。有機溶劑與去蛋白酶結(jié)合的除蛋白法效率要高得多,節(jié)省許多試劑和資金。但是,加入過多的蛋白酶反而會加重除蛋白的難度。除蛋白的效果可以用茚三酮反應(yīng)檢測,結(jié)果呈陰性;同時在200~280nm處測定除蛋白后樣品的紫外吸收曲線來檢測效果,除掉蛋白質(zhì)的多糖溶液一般在260~280nm的紫外吸收峰會消失,說明多糖不含有蛋白。1.1.4立地條件的優(yōu)化在多糖提取過程中,由于氧化作用會有色素生成,色素的存在會影響多糖的色譜分析和性質(zhì)測定?？梢杂檬称芳壏勰罨钚蕴课?也可以用H2O2對色素的有色基團產(chǎn)生破壞而除去色素;還可以用大孔吸附樹脂柱層析脫去色素,這個方法還可以使多糖混合組分初步分離。1.2化合物縮合的檢測多糖含量是利用糖的還原性進行測定。測定還原性多糖的方法有3,5-二硝基水楊酸鹽(DNS)比色法和Somogyi-Nelson法。另一類測定方法是利用多糖在強酸性條件下脫水生成糠醛或其衍生物,然后再與酚類或胺類化合物縮合,生成有特殊顏色的物質(zhì)這一性質(zhì)進行測定,這類方法有地衣酚-硫酸法、苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法。苯酚-硫酸法是用得較多的方法,苯酚-硫酸試劑可與游離的或寡糖、多糖中的己糖、糖醛酸起顯色反應(yīng),己糖在490nm處有最大吸收,吸收值與糖含量呈線性關(guān)系。此法是先用標(biāo)準(zhǔn)糖制作標(biāo)準(zhǔn)曲線后,再通過多糖的顯色反應(yīng)測定吸光度,然后根據(jù)其在曲線上的位置推算出多糖的濃度從而推算其含量。此法操作簡單、快速、靈敏、重復(fù)性好,對每種糖僅需制作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。蒽酮-硫酸法是另一種常用的方法,其原理是利用糖類遇濃硫酸脫水后生成糖醛或其衍生物,可與蒽酮試劑縮合,反應(yīng)后溶液呈藍綠色,于620nm處有最大吸收,顯色深度與多糖的含量呈線性關(guān)系。2多酚純度2.1粗多糖的純化一般植物組織或動物組織中通常會存在多種多糖,因此要獲取均一多糖需要對多糖混合物進行分級并純化。最簡單有效的方法是利用多糖在乙醇中的溶解度的不同進行分離。向粗多糖飽和水溶液中加入乙醇,使乙醇的最終濃度依次達到40%,60%,70%和80%,離心每次所得沉淀,可將粗多糖分成五個等級。但是,乙醇沉淀不一定得到純的多糖,要得到均一多糖還需要用更加精細的方法,例如色譜、電泳、超濾等技術(shù)進行分離純化。最常用的純化多糖的方法是色譜法,包括離子交換色譜和凝膠色譜等。色譜法是利用填料對不同種類的糖如不同構(gòu)型的吡喃糖苷及呋喃糖苷在吸附作用上的差異,使混合物中各糖分達到彼此分離的目的。根據(jù)不同的多糖特性選用不同的色譜柱。其中,離子交換色譜要注意樹脂類型和粒度、洗脫劑種類、pH值和洗脫速率、分離溫度和分離柱的徑高比等,洗脫劑的選擇可以根據(jù)多糖的酸堿性進行調(diào)節(jié)。凝膠色譜中用的比較多的是交聯(lián)葡聚糖凝膠和聚丙烯酰胺凝膠,凝膠色譜主要是利用了分子篩的原理。影響凝膠分離的因素主要是凝膠類型和粒度、洗脫劑種類、pH值和洗脫速率、分離溫度和分離柱的徑高比等。實驗中對多糖進行分級時,常將粗多糖經(jīng)色譜柱洗脫,按洗脫曲線的不同峰收集不同的組分,從而分級得到各個均一多糖成分。2.2保證觀物的微觀鑒定將粗多糖各組分分離后,還要測定所得的各組分是否均一或純多糖。多糖純度標(biāo)準(zhǔn)不能用通?；衔锏臉?biāo)準(zhǔn)來衡量,因為即使多糖為純品其微觀也并不均一。測定多糖純度方法有功能團分析、比旋光度、紙色譜和高效液相色譜(HPLC)、高壓電泳、超濾離心分析法等,其中色譜法和電泳法較常用,并需用三種以上的純度鑒定方法證明才能保證為純品。其中色譜法常用的有柱色譜和HPLC等。電泳鑒定純度的方法有聚丙烯酰胺凝膠電泳、玻璃纖維紙電泳和醋酸纖維膜電泳等。若為純品,則在色譜柱中洗脫后得單一對稱峰,電泳后會得單一斑點。3多酚性質(zhì)測定3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制多糖的相對分子質(zhì)量測定是研究多糖性質(zhì)的一項較為重要的工作,因為多糖的性質(zhì)往往與它的相對分子質(zhì)量大小有關(guān)。常用于多糖相對分子質(zhì)量測定的方法有凝膠色譜法、蒸汽壓滲透計法、端基法、粘度法、光散射法、滲透壓法和超濾法等。凝膠色譜法是比較常用的方法。以SephadexG-200、G-150或G-75裝柱,用一定離子強度的氯化鈉水溶液進行平衡,然后將各種不同的已知相對分子質(zhì)量的多糖分別相繼上柱,用同一離子強度的氯化鈉水溶液洗脫,分步收集,苯酚-硫酸法監(jiān)測,分別求得洗脫體積(Ve),再將藍色葡聚糖(Mr>200萬)上同一根色譜柱,求出柱的空體積(Vo),根據(jù)Ve/Vo與相對分子質(zhì)量的對數(shù)之間存在著線性關(guān)系,可繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。最后,將待測樣品按上述不變的條件上柱,求得待測多糖的Ve。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線上的Ve/Vo,查得待測多糖的相對分子質(zhì)量對數(shù),便可求出相對分子質(zhì)量。聚丙酰胺凝膠電泳也可用于多糖相對分子質(zhì)量測定。在測定過程中要注意標(biāo)準(zhǔn)品的選擇,盡量使用與被測多糖結(jié)構(gòu)相似的標(biāo)準(zhǔn)品,因為不同結(jié)構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)品雖然其絕對相對分子質(zhì)量相同,但在一定的條件下所表現(xiàn)的相對分子質(zhì)量則有所不同。多糖相對分子質(zhì)量的測定沒有一種絕對的方法,其相對分子質(zhì)量只代表相似鏈長的平均而不是確切的分子大小。往往用不同的方法會得到不同的相對分子質(zhì)量。3.2糖化學(xué)和基礎(chǔ)研究中的應(yīng)用由于分子生物學(xué)和分析技術(shù)的高速發(fā)展,多糖的分離和結(jié)構(gòu)測定也取得了很大進展,糖化學(xué)家們利用化學(xué)、物理和生物學(xué)手段對多糖分子結(jié)構(gòu)和功能進行研究,而高新技術(shù)的發(fā)展使分析手段更快速、高效和靈敏。但化學(xué)分析法仍然是經(jīng)典的方法。3.2.1酸水處理方法酸水解是鑒定多糖的單糖組成常用的方法,現(xiàn)在酸水解法已實現(xiàn)完全自動化。對多糖進行部分的酸水解以了解多糖各個亞單位或片段的連接方式。3.2.2全氧甲基檢測該法可以闡明單糖的連接方式(鍵型)、重復(fù)結(jié)構(gòu)中某種單糖的數(shù)目、末端糖的性質(zhì)及分支點的位置等。但該法不能解決多糖中單糖的連接順序。水解后的甲基化單糖混合物可用層析法分離或制成揮發(fā)性衍生物通過氣相色譜(GC)分析。最近報道,已能測定1~5μg的水平復(fù)雜碳水化合物的糖苷鍵。在該技術(shù)中,糖在全氧甲基之前先用硼氘化鈉還原。在全甲基化前,含有糖醛酸的多糖通過一個陽離子交換樹脂(H+型),使所有的羧基都轉(zhuǎn)變成質(zhì)子型,這樣就有可能使含有糖醛酸的殘基的多糖更完全地甲基化。通過使用在Sep-PakC18管的反相液相色譜,以好的收率回收全氧甲基化產(chǎn)物。多重質(zhì)量色譜法的GC-MS聯(lián)用對微量的、部分氧甲基化的醋酸甘露糖酯的鑒別,發(fā)現(xiàn)靈敏度大約為常用GC-MS的7倍。3.2.3過碘酸鹽氧化開環(huán)多糖因具有鄰二醇、鄰三醇結(jié)構(gòu)而易被過碘酸鹽氧化開環(huán)。通過測定過碘酸鹽的消耗、甲酸的生成和剩余糖的比就可確定多糖中各種單糖的鍵型及其比例。3.2.4赤蘚醇糖苷結(jié)構(gòu)用稀酸在室溫下對多元醇進行部分酸水解,可得到各種赤蘚醇糖苷或丙三醇糖苷,研究這些單糖苷、二糖苷和寡糖苷的結(jié)構(gòu)有助于闡明多糖中單糖的部分連接順序和鍵型。3.2.5堿性抗硝劑堿降解發(fā)生在與單糖的羥基或羧酸連接的酯上,多糖還原端的單糖被逐個剝落,用之可分析多糖的鍵型。3.2.6酶水處理方法酶水解是多糖控制降解的另一種方法,它主要是根據(jù)特定的酶降解特定結(jié)構(gòu)的多糖的特性以闡明多糖的部分結(jié)構(gòu)。3.2.7未知多糖的檢測多糖是許多微生物免疫特異性的決定因子,根據(jù)多糖抗原與蛋白質(zhì)抗體的特異性,只有一定結(jié)構(gòu)的多糖才能與一定類型抗體的蛋白質(zhì)作用,如果能制備對抗未知多糖的抗體,那么這種抗體可用來闡明未知多糖的相似結(jié)構(gòu)。3.2.8物理分析(1)-吡喃糖的鑒定在多糖結(jié)構(gòu)分析上主要是確定吡喃糖的苷鍵構(gòu)型及常規(guī)觀察其他官能團。一般主要觀察730~960cm-1范圍,如對于α-吡喃糖,δC1-H為845cm-1,而β-吡喃糖δC1-H為890cm-1。IR對于多糖上特殊基團的檢測仍然有著重要的作用。(2)多糖結(jié)構(gòu)分析GC分析多糖雖受到樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制,但GC-MS是多糖結(jié)構(gòu)分析不可缺少的工具,常用GC與HPLC結(jié)合來分析多糖水解后單糖的組成及比例。(3)maldi-ms測量相對分子質(zhì)量,和其與其他酶的聯(lián)用MS已成為解決與碳水化合物有關(guān)的結(jié)構(gòu)問題的有力工具。MS在鑒定各種甲基衍生物的碎片、確定各種單糖殘基的連接位置非常有用。近年來,由于電噴霧電離質(zhì)譜(ESI-MS)、基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-MS)和快原子轟擊質(zhì)譜(FAB-MS)的出現(xiàn),MS還可以測定糖鏈的相對分子質(zhì)量及糖鏈的一級結(jié)構(gòu)。ESI-MS因其能形成多電荷離子,故能測量相對分子質(zhì)量近10萬的大分子。ESI-MS易與HPLC、毛細管電泳(CE)、超臨界液相色譜(SFC)等技術(shù)聯(lián)用,大大提高了工作效率、靈敏度和精確度。ESI-MS與碰撞誘導(dǎo)解離(CID)聯(lián)用可得到不同的碎片離子,由此可獲知低于pmol·L-1的寡糖及其復(fù)合物的相對分子質(zhì)量、連接順序及分支等信息。MALDI-MS也是一種類似ESI-MS的軟電離技術(shù),與ESI-MS一樣,這種電離技術(shù)產(chǎn)生的分子離子穩(wěn)定,不易裂解,極適合于測定生物大分子樣品,且準(zhǔn)確度極高。測定的相對分子質(zhì)量與分子形狀無關(guān)(與層析法和電泳法不同),所以很適合測定多糖的相對分子質(zhì)量及大小分布。此外,MALDI方法不受樣品中的無機鹽緩沖液的影響,其靈敏度也是較高的。FAB條件下,開裂總是優(yōu)先發(fā)生在糖苷氧的末端,產(chǎn)生連續(xù)順序降解失掉單糖單位的突出峰。不論是陰性的還是陽性的FAB-MS都能記下來,使低聚糖結(jié)構(gòu)的測定簡易快速。利用FAB-MS可以分析多糖部分水解片段的結(jié)構(gòu)和組成。(4)單糖組成、連接位置和順序用NMR技術(shù)研究糖鏈結(jié)構(gòu)的優(yōu)點是不破壞樣品,糖鏈的結(jié)構(gòu)特征通過化學(xué)位移、偶合常數(shù)、積分面積、NOE及弛豫時間等參數(shù)表達。早期NMR主要用于解決多糖結(jié)構(gòu)中苷鍵的構(gòu)型及重復(fù)結(jié)構(gòu)中單糖的數(shù)目,近年來,NMR技術(shù)的發(fā)展為生物大分子的結(jié)構(gòu)研究創(chuàng)造了良好的條件。1H-NMR和13C-NMR常規(guī)用于確定呈現(xiàn)在重復(fù)單元中不同糖數(shù)目的差向構(gòu)型的測定,氨基和脫氧糖的存在,氧-乙酰基和其他非糖取代基的鑒別。在確定多糖的單糖組成方面,除了通過1H-NMR和13C-NMR化學(xué)位移信息外,還可用1H-1HCOSY、1H-13CCOSY等二維譜;在去頂單糖的類型和構(gòu)型方面,可用1H-1HDQFCOSY、RCT、TOCSY、HOHAHA和HETCOR-HMQC確定。在確定單糖的連接位置和順序時可用1H-NMR方法,如1H-1H遠程偶合4JHCOCH、DIFNOE、1DNOE-ROE、2DNOESY-ROESY、2DTOCSY-ROESY和3DTOCSY-ROESY?？捎玫?3C-NMR方法,如對照已知結(jié)構(gòu)的單糖或寡糖的13C-NMR數(shù)據(jù)、HETCOR-HMQC、HMBC、GIS、SINEPT、DEPT、APT、LRH-13CCONNECTIVITY和13C-NOE/1HNOE,測定T1(糖鏈中單糖的活動自由度與T1有關(guān))等。(5)運行結(jié)果分析,組合進行酶解CE是近年發(fā)展起來的一種糖類分析方法。CE在多糖結(jié)構(gòu)研究中主要用來測定多糖的相對分子質(zhì)量(不同質(zhì)量、不同電荷的分子電泳遷移性能不同)、多糖或寡糖的組成分析、純度鑒定、結(jié)構(gòu)歸屬及單糖差向異構(gòu)體的分離。與寡糖的降解方法聯(lián)用,通過確定寡糖降解片段的結(jié)構(gòu)并根據(jù)結(jié)構(gòu)優(yōu)化原理還能實現(xiàn)寡糖的結(jié)構(gòu)分析。還可對多糖酶解產(chǎn)物進行定量和定性分析。另外,CE-MS聯(lián)用可以對細胞水平的極微量多糖進行精確分析。需要說明的是,CE法分析結(jié)果的重現(xiàn)性較差,在進樣方法和定量分析方面需要在技術(shù)上進一步提高。3.2.9高效的酶學(xué)分析方法生物學(xué)方法主要是酶學(xué)方法,即利用各種特異性糖苷酶水解多糖分子得到寡糖片段,再與其他定性、定量方法聯(lián)用推測多糖的結(jié)構(gòu)。目前,較為先進的酶學(xué)方法是試劑陣列分析方法(RAAM),由Edge等創(chuàng)立。它是利用一系列特定的外切糖苷酶的混合物對多糖或寡糖進行酶解,將酶解所得的片段分離,并通過其流體力學(xué)體積與計算機數(shù)據(jù)庫中的數(shù)據(jù)進行比較,從而大大提高了多糖結(jié)構(gòu)分析速度和精度。另外,還有一種類似固相蛋白測序的技術(shù),它首先將多糖或寡糖固定在一個固定載體上,再依次用糖苷酶作用,對每一種外切酶酶解下來的單糖進行定性、定量分析。3.3多糖的免疫作用隨著人們對多糖研究的深入,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多糖具有許多生物活性作用。從抗癌、提高免疫、抗病毒、抗炎、降血糖、降血脂、抗氧化作用、抗衰老和骨折愈合等方面都呈現(xiàn)出喜人的效果。如在免疫方面,多糖能提高T淋巴細胞轉(zhuǎn)化率,顯著增加小鼠的脾臟和胸腺的重量,提高網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能,從而提高機體的非特異免疫功能。硫酸化多糖具有抗血栓活性。Bendjeddou等發(fā)現(xiàn)從Anacycluspyrethrum,Alpiniagalanga和Citrulluscolocynthis中提取的多糖具有免疫抑制活性作用。在抗癌方面,Kodama等發(fā)現(xiàn)從Grifolafrondosa中提取的多糖具有抗腫瘤活性。茶多糖具有降血糖、降血脂、抗凝血,抗血栓、降血壓、耐缺氧、增加冠狀動脈血流量、防輻射、增強機體免疫力、抗炎、抗癌等多種功效。大豆中提取的多糖具有抗氧化活性。Patel等發(fā)現(xiàn)了可以預(yù)防A型流行性乙型腦炎的多糖疫苗;Gao等發(fā)現(xiàn)靈芝多糖能夠加速小鼠身上醋酸誘導(dǎo)的潰瘍的恢復(fù);Vislobokov等發(fā)現(xiàn)艾菊的膠質(zhì)多糖對神經(jīng)細胞膜上的離子通道具有激活效應(yīng);Reckseidler-Zenteno等發(fā)現(xiàn)類鼻疽伯克霍爾德菌(類鼻疽假單孢菌)的多糖能夠減少血液中的C3b補體因子的沉積的作用。Liu等比較了幾種治療缺鐵性貧血的藥物,發(fā)現(xiàn)用結(jié)合了鐵的多糖復(fù)合物治療缺鐵性貧血能減少胃腸道的反應(yīng),使患者更容易適應(yīng)。Pacciarini等發(fā)現(xiàn)大腸埃希菌中含有的一種多糖具有抑制HIV病毒的傳播作用;Bae等發(fā)現(xiàn)一種從桑黃中提取的多糖具有抑制小鼠前胃癌的作用及抑制小鼠黑素瘤生長的作用。4茯苓多糖的結(jié)構(gòu)及生物學(xué)特性多糖的活性與其結(jié)構(gòu)有著密切的關(guān)系。不同的連接方式影響了多糖的二級及三級結(jié)構(gòu),具有β-1,3連接的葡聚糖,有的活性很高,有的沒有活性。一般來說,主鏈中具有一段長的β-1,3鍵的多糖要比含有1,6鍵為主的多糖有更大的活性。同時發(fā)現(xiàn)許多具有β-1,3鍵的葡聚糖和帶有25%~33%β-1,6鍵的β-1,3葡聚糖具有較大的活性,原因就在于二級結(jié)構(gòu)及三級結(jié)構(gòu)的不同。如香菇多糖是6位存在支鏈的(1,3)-β葡聚糖,其分子的分支程度即β-1,6結(jié)合側(cè)鏈影響著其抗腫瘤活性,它的立體結(jié)構(gòu)為右手三股螺旋,香菇多糖具有顯著的抗腫瘤活性。β-1,3葡聚糖能形成屈曲狀螺旋結(jié)構(gòu),所以具有較高的活性,α-1,3D葡聚糖大多數(shù)形成可拉伸的帶狀結(jié)構(gòu),所以活性較小。從茯苓中得到的茯苓多糖具有β-1,3葡聚糖結(jié)構(gòu),但由于是單一螺旋結(jié)構(gòu)而不具有活性,當(dāng)用化學(xué)方法制備成羧甲基的衍生物時單股螺旋變成了三股螺旋而具有顯著的抗腫瘤活性。不同單糖成分所形成的多糖也具有不同的活性,研究發(fā)現(xiàn)酸性雜多糖大多具有抗補體活性,其酸性部分主要是半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸。糖醛酸殘基可通過經(jīng)典途徑激活補體系統(tǒng),故它是多糖活性的來源。近年來,硫酸化多糖越來越受到人們的關(guān)注,硫酸化多糖具有顯著的免疫活性,Baba等體外實驗證明硫酸右旋糖酐、多硫酸聚戊糖、巖藻依聚糖和角叉菜膠是強大