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PAGEIIPAGE腌制食品中亞硝酸鹽的測(cè)定摘要:腌制食品是中國(guó)傳統(tǒng)的發(fā)酵食品,如酸菜、各種腌制水產(chǎn)品等為廣大消費(fèi)者所喜愛(ài)。發(fā)酵不僅能提高食物的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,而且對(duì)增加風(fēng)味,提升感官性能等方面有重要作用。但由于經(jīng)過(guò)加工,腌制食品的亞硝酸鹽含量普遍過(guò)量,長(zhǎng)期食用會(huì)對(duì)人類(lèi)健康造成嚴(yán)重危害。本文以通過(guò)實(shí)驗(yàn),對(duì)梅菜、酸白菜和皮蛋這幾種常見(jiàn)的腌制食品進(jìn)行測(cè)定,測(cè)定腌制食物中亞硝酸鹽的含量,為食品安全尋找一定的依據(jù)。關(guān)鍵詞:腌制食品;亞硝酸鹽;測(cè)定

目錄1前言 11.1亞硝酸鹽概念 11.2亞硝酸鹽的危害 12實(shí)驗(yàn)方法與測(cè)定 22.1亞硝酸鹽測(cè)定 22.2具體實(shí)驗(yàn)過(guò)程 32.2.1實(shí)驗(yàn)材料 32.2.2實(shí)驗(yàn)處理 33實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論 33.1測(cè)定結(jié)果 33.2討論 4參考文獻(xiàn) 5致謝 7PAGE51前言1.1亞硝酸鹽概念亞硝酸鹽,主要是對(duì)某一類(lèi)無(wú)機(jī)化合物的總稱(chēng),它通常是指亞硝酸鈉。亞硝酸鈉一般為白色或者淡黃色,它是一種粉末或顆粒狀物質(zhì),微咸,容易溶于水。在人類(lèi)的生存環(huán)境中,大量存在著硝酸鹽及亞硝酸鹽,它是自然界里最為常見(jiàn)的含氮化合物。[1]在人體內(nèi)微生物的作用下,硝酸鹽可被還原,最后變?yōu)橐环NN-亞硝基化合物的前體物質(zhì),也就是亞硝酸鹽。它與普通食鹽相比,外觀和味道都極為相似,在建筑業(yè)以及工業(yè)中被廣泛使用,在肉類(lèi)的制作工程中,只要嚴(yán)格控制使用量,也是可以被當(dāng)作發(fā)色劑使用的。在實(shí)際生活中,因過(guò)度食用亞硝酸鹽而導(dǎo)致的食物中毒的情況時(shí)有發(fā)生,一般攝入量在0.3~0.5克就有可能引發(fā)中毒,達(dá)到3克就有可能致使人類(lèi)死亡?,F(xiàn)如今,許多人針對(duì)亞硝酸鹽的毒性做了相關(guān)研究,研究發(fā)現(xiàn)它的毒性產(chǎn)生原因主要有以下幾個(gè)方面:第一、由于一次性攝入的亞硝酸鹽含量過(guò)大,從而導(dǎo)致急性中毒。第二、雖說(shuō)未一次性攝入亞硝酸鹽過(guò)量,但由于長(zhǎng)期食用可能會(huì)導(dǎo)致消化系統(tǒng)發(fā)生癌變,比如導(dǎo)致胃癌或者食道癌。第三、亞硝酸鹽可以通過(guò)胎盤(pán)被胎兒吸收,從而對(duì)胎兒產(chǎn)生制畸作用,尤其是不足六個(gè)月的胎兒,他們對(duì)亞硝酸鹽極為敏感,當(dāng)母體一次性攝入的亞硝酸鹽超過(guò)正常范圍,一般達(dá)到0.2~0.5克就有可能使胎兒發(fā)生急性中毒,該病癥通常被稱(chēng)為高鐵血紅蛋白癥,又被叫做腸原性紫給癥,當(dāng)情況特別嚴(yán)重時(shí)甚至?xí)?dǎo)致死亡。[2]在日常生活中,食用的食品中若含有大量的亞硝酸鹽容易導(dǎo)致亞硝酸鹽的急性中毒,雖然在臨床上所表現(xiàn)出來(lái)的癥狀嚴(yán)重程度不同,但是在整體上而言,急性中毒發(fā)病急切,病情也比較兇險(xiǎn),死亡率也比較高,在臨床上它主要有如下特點(diǎn):(1)病發(fā)時(shí)全身的皮膚和粘膜表現(xiàn)為青紫色,程度不一;(2)嘔吐、腹痛、腹瀉、腹脹等;(3)輕者反應(yīng)會(huì)變得遲鈍、精神較萎靡、容易變得煩躁不安,嚴(yán)重者會(huì)嗜睡、神志變的不清醒,甚至導(dǎo)致驚厥昏迷;(4)容易產(chǎn)生心悸、頭暈、脈搏跳動(dòng)速度明顯加快,在心尖區(qū)可以聽(tīng)見(jiàn)收縮期雜音,或者出現(xiàn)肺水腫的現(xiàn)象,嚴(yán)重急性中毒患者甚至?xí)霈F(xiàn)呼吸衰竭現(xiàn)象。[3]因食用過(guò)量的亞硝酸鹽而發(fā)生急性中毒的情況極為常見(jiàn),其主要原因一般都是要么食用了沒(méi)有腌好的蔬菜或放置時(shí)間太長(zhǎng)的腌菜,要么是食用了已經(jīng)變質(zhì)的蔬菜,又或者是錯(cuò)將煙硝酸鹽當(dāng)作食鹽服用等等。最為常見(jiàn)的一般都是食用了含大量亞硝酸鹽的酸菜或其它腌制品而導(dǎo)致發(fā)生急性中毒。蔬菜通常能富集硝酸鹽,一般而言,蔬菜中富集的硝酸鹽不會(huì)直接對(duì)人體健康造成傷害,因?yàn)樗谝欢ǖ暮糠秶鷥?nèi)是無(wú)毒的,只有當(dāng)微生物將其還原成亞硝酸鹽時(shí),才會(huì)對(duì)人體造成傷害。如果蔬菜被硝酸鹽污染的很?chē)?yán)重,那么硝酸鹽就更有可能轉(zhuǎn)化成為亞硝酸鹽,并且生成的亞硝酸鹽的含量也比較高。事實(shí)上,在我國(guó)蔬菜被硝酸鹽污染的情況是很?chē)?yán)重的。[4]1.2腌制食品中亞硝酸鹽來(lái)源現(xiàn)在某些重要課題仍然是把研究食品中的亞硝酸鹽含量當(dāng)作熱點(diǎn)問(wèn)題,通常食物中所含有的亞硝酸鹽主要是來(lái)自?xún)蓚€(gè)方面:來(lái)源之一是由于在加工食品的過(guò)程中加入了亞硝酸鈉,另一個(gè)可能的來(lái)源是由于氮肥的影響,食物里所含有的硝酸菌類(lèi)微生物作用于這些氮肥,使其被還原成為亞硝酸鹽,這樣導(dǎo)致的結(jié)果就是食物中所含亞硝酸鹽的量明顯增加。另外其它研究也表明,在檢查亞硝酸鹽的含量時(shí)僅能檢測(cè)出實(shí)際添加量的20%~30%,這是因?yàn)槠渲泻艽笠徊糠值膩喯跛猁}已經(jīng)被蛋白質(zhì)以及脂肪吸收,這就使得在進(jìn)行亞硝酸鹽含量檢測(cè)的前處理操作時(shí),所有的亞硝酸鹽不能都被提取出來(lái)。[5][6]在腌制臘肉或者酸白菜等食物的過(guò)程中,通常會(huì)發(fā)生一系列不同的生化反應(yīng),如微生物會(huì)發(fā)生發(fā)酵、高離子濃度也會(huì)產(chǎn)生滲透壓作用、蛋白質(zhì)也會(huì)發(fā)生分解等等。這個(gè)生理生化過(guò)程是極其復(fù)雜的。[7]就好像臘肉或者酸白菜這類(lèi)的腌制食物,它們?cè)陔缰七^(guò)程中極易富集硝酸鹽,而在硝酸還原酶和某些有害微生物的作用下,這些富集的硝酸鹽又很容易還原成亞硝酸鹽,其最終結(jié)果便是大大提高了亞硝酸鹽的含量。2實(shí)驗(yàn)方法與測(cè)定2.1亞硝酸鹽測(cè)定一般情況下我們常用的檢測(cè)亞硝酸鹽的方法是第二法分光廣度法,這一方法是參考來(lái)自中華人民共和國(guó)標(biāo)準(zhǔn)所發(fā)布的《食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測(cè)定》中的內(nèi)容,而這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)是2008年12月3日由國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)及衛(wèi)生部頒布的。[8](1)方法原理:首先將試驗(yàn)樣品沉淀除去蛋白質(zhì)和脂肪,然后在弱酸溶液中將對(duì)氨基苯磺酸和亞硝酸鹽進(jìn)行重氮化反應(yīng),接著再與N-1蔡基乙二胺發(fā)生偶合作用從而生成紫紅色物質(zhì),最后將得到的結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行定量比較。(2)所用試劑:在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中均使用蒸餾水,如果沒(méi)有進(jìn)行說(shuō)明,則代表所用試劑都為分析純?cè)噭?。乙酸鋅溶液(220g/L):精確稱(chēng)量硫酸鋅220g,將其用體積為30mL的冰乙酸進(jìn)行溶解,待完全溶解后再用蒸餾水稀釋到1000mL。亞鐵氰化鉀溶液(106g/1):精確稱(chēng)量亞鐵氰化鉀106g,將其用適量蒸餾水進(jìn)行溶解并稀釋到1000mL。飽和硼砂溶液(50g/1):精確稱(chēng)量硼酸鈉5.0g,將其用100mL熱的蒸餾水溶解,于室溫中冷卻后備用。對(duì)氨基苯磺酸溶液(4g/1):精確稱(chēng)量對(duì)氨基苯磺酸0.4g,用100mL濃度為20%的HCl將其充分溶解,得到的溶液裝入棕色瓶中并放置陰涼處保存。鹽酸蔡基乙二胺溶液(2g/L):精確稱(chēng)量鹽酸蔡基乙二胺0.2g,將其用100mL蒸餾水溶解,充分溶解后放置于棕色瓶中并放置陰涼處保存。亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液:精確稱(chēng)量亞硝酸鈉0.100g,要求該硝酸鈉在110~120攝氏度下,于干燥器中干燥至重量保持不變,用一定體積的蒸餾水將其充分溶解,并將該溶液轉(zhuǎn)移到500mL的容量瓶里,最后緩慢加入蒸餾水直至到達(dá)刻度線處,搖勻,該配制好的溶液1mL就相當(dāng)于亞硝酸鈉200ug。亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用溶液:在使用該溶液前,先取5mL的亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液,將其轉(zhuǎn)移到200mL的容量瓶?jī)?nèi),再緩慢滴加蒸餾水直至到達(dá)刻度線處,搖勻,該配制好的溶液1mL就相當(dāng)于亞硝酸鈉200ug。(3)儀器:小型粉碎機(jī);水浴鍋;752型分光光度計(jì)UV-1800產(chǎn)自島津貿(mào)易(上海)有限公司。(4)操作步驟1)樣品處理:精密稱(chēng)量試樣50g放置于打碎機(jī)內(nèi),將其打碎成勻漿。取打碎好的勻漿5.000將其轉(zhuǎn)移到500mL的燒杯內(nèi),接著向燒杯內(nèi)加入硼砂飽和溶液12.5mL,充分?jǐn)嚢柚辆鶆?,將其轉(zhuǎn)入500mL的容量瓶?jī)?nèi)并用大概300mL溫度為70攝氏度的水洗滌,然后在沸水中水浴加熱15分鐘,加熱完后放置冷水中冷卻,最后將其靜置直至溫度降到室溫。2)提取液凈化:一邊對(duì)上述步驟所得到的提取液進(jìn)行轉(zhuǎn)動(dòng),一邊緩慢加入亞鐵氰化鉀溶液5mL,搖勻。接著向該提取液中加入乙酸鋅溶液5mL,目的是將蛋白質(zhì)進(jìn)行沉淀,加蒸餾水至刻度處,搖勻后靜置0.5h,然后將上層脂肪除去,剩下的清液用濾紙進(jìn)行過(guò)濾,隨后丟掉30mL初始濾液,將剩下的濾液留作備用。3)亞硝酸鹽測(cè)定:取50mL的帶塞比色管,用移液管吸取濾液40.0mL并將其轉(zhuǎn)移到比色管內(nèi),再分別吸取亞硝酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.00mL,0.20mL,0.40mL,0.60mL,0.80mL,1.00mL,1.50mL,2.00mL,2.50mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液,(相當(dāng)于0.0ug,1.0ug,2.0ug,3.0ug,4.0ug,5.0ug,7.5ug,10.0ug,12.5亞硝酸鈉),分別置于50mL帶塞比色管中。分別吸取2g/mL的鹽酸蔡乙二胺溶液2mL,將其轉(zhuǎn)移到試樣管和標(biāo)準(zhǔn)管內(nèi),緩慢滴加蒸餾水至刻度線處,搖勻后靜靜放置15分鐘,取2cm的比色杯并通過(guò)零管來(lái)調(diào)節(jié)零點(diǎn),在528nm的波長(zhǎng)處測(cè)得吸光度的大小,將結(jié)果繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線,與此同時(shí),還必須進(jìn)行空白實(shí)驗(yàn)。2.2具體實(shí)驗(yàn)過(guò)程2.2.1實(shí)驗(yàn)材料從家樂(lè)福超市中采購(gòu)三種較為常見(jiàn)的腌制食品,分別是梅菜、皮蛋和酸白菜,這三種腌制食品都是由本地生產(chǎn)的。2.2.2實(shí)驗(yàn)處理首先從梅菜、酸白菜及皮蛋中均勻取樣,將所取樣品都切成小塊,然后混勻。精確稱(chēng)量每種樣品各200g并將其倒入榨汁機(jī)中,然后向榨汁機(jī)內(nèi)倒入200mL的水,將其攪拌成勻漿,然后將勻漿倒入500mL的燒杯中留作備用。精確稱(chēng)取40g的勻漿,將其轉(zhuǎn)移到50mL的小燒杯內(nèi),然后分3次用70攝氏度的一定體積的熱水將該勻漿轉(zhuǎn)移到250mL的容量瓶中,加入飽和硼砂溶液6mL,搖勻。然后向其中再放入經(jīng)過(guò)處理的活性炭2g,將其搖晃均勻。接著向其中加入亞鐵氰化鉀溶液和硫酸鋅溶液各2mL,該溶液為蛋白質(zhì)沉淀劑,搖晃該混合液3~5min,接著向其中加入蒸餾水稀釋到刻度線處,搖晃均勻后再用真空泵進(jìn)行過(guò)濾,將過(guò)濾所得的濾液用于亞硝酸鹽的測(cè)定。3實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論3.1測(cè)定結(jié)果利用這種方法分別測(cè)量3種樣品的亞硝酸鹽含量,所得結(jié)果如表1所示,從表1中的數(shù)據(jù)我們可以知道,梅菜中的亞硝酸鹽含量為1.0566mg/Kg,酸白菜和皮蛋中的含量分別為2.8791和1.2166mg/Kg,經(jīng)過(guò)比較發(fā)現(xiàn),其中酸白菜中含有的亞硝酸鹽相對(duì)來(lái)說(shuō)比較高,但這三類(lèi)腌制品中所含的亞硝酸鹽均滿(mǎn)足GB2760的規(guī)定。圖1實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果平行1平行2測(cè)定結(jié)果梅菜1.06241.05081.0566酸白菜2.88202.87622.8791皮蛋1.21021.22301.2166要想做好食品檢驗(yàn)工作,其中一項(xiàng)很重要的內(nèi)容就是檢測(cè)并分析食品中所含有的添加劑,隨著食品工業(yè)的迅猛發(fā)展,在食品中所添加的添加劑的數(shù)量以及種類(lèi)越來(lái)越多,甚至可以這么說(shuō),現(xiàn)代的食品工業(yè)就是由食品添加劑成就的。[9][10]現(xiàn)如今,我國(guó)在食品中所加入的添加劑的種類(lèi)數(shù)量就占據(jù)全世界添加數(shù)量的4/5,多達(dá)2000余種,通常情況下,若添加劑的使用量在正常范圍內(nèi),它是不會(huì)對(duì)人體造成傷害的,但是當(dāng)其超過(guò)正常范圍時(shí),就不能保證食品的安全了。在對(duì)肉類(lèi)罐頭以及肉制品進(jìn)行加工時(shí),發(fā)現(xiàn)廣泛使用了亞硝酸鈉,但國(guó)家衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)對(duì)其做了相關(guān)規(guī)定,要求15mg/Kg是它的最大使用量,它的殘留量是以亞硝酸鈉的含量來(lái)確定的,要求在肉制品中其檢出量不能高于30mg/Kg,在蛋類(lèi)中的檢出量不能高于2mg/Kg,在咸菜中的檢出量不能高于4mg/Kg。本次研究主要測(cè)定了三種腌制食品中的亞硝酸鹽,這三種腌制食品分別是梅菜、酸白菜以及皮蛋,其中亞硝酸鹽的測(cè)定結(jié)果均滿(mǎn)足國(guó)家食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的要求。3.2討論通過(guò)以上的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,一般常見(jiàn)的腌制食品中所含有的亞硝酸鹽均在安全范圍內(nèi),它們都滿(mǎn)足國(guó)家食品衛(wèi)生的要求。當(dāng)然本次實(shí)驗(yàn)處理過(guò)程中比較簡(jiǎn)單,有可能會(huì)損失一些,這對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能會(huì)造成一些影響。[11]食品在腌制過(guò)程中,通常會(huì)發(fā)生一系列不同的生化反應(yīng),如微生物會(huì)發(fā)生發(fā)酵、高離子濃度也會(huì)產(chǎn)生滲透壓作用、蛋白質(zhì)也會(huì)發(fā)生分解等等。這個(gè)生理生化過(guò)程是極其復(fù)雜的。就好像臘肉或者酸白菜這類(lèi)的腌制食物,它們?cè)陔缰七^(guò)程中極易富集硝酸鹽,而在硝酸還原酶和某些有害微生物的作用下,這些富集的硝酸鹽又很容易還原成亞硝酸鹽,其最終結(jié)果便是大大提高了亞硝酸鹽的含量。當(dāng)然,不同的處理方式和不同的時(shí)段對(duì)亞硝酸鹽的含量也會(huì)產(chǎn)生影響,因此在日常的食用過(guò)程中也可以適當(dāng)減少亞硝酸鹽的攝入。[12][13]舉例來(lái)說(shuō),在對(duì)蔬菜進(jìn)行腌制時(shí),其中的亞硝酸鹽含量通常會(huì)發(fā)生如下變化:首先亞硝酸鹽含量上升,直至到達(dá)一個(gè)頂峰,隨后再慢慢下降,最終達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)。而對(duì)于新鮮的蔬菜,其中基本上不含有亞硝酸鹽,在腌制蔬菜的早期階段,因?yàn)槌3S性S多雜菌在蔬菜中生長(zhǎng),它能將其中含有的硝酸鹽還原成為亞硝酸鹽,這就導(dǎo)致腌制食品中所含有的亞硝酸鹽大大增多,與此同時(shí),其中所含有的乳酸菌也在不斷的生長(zhǎng)中,它們也會(huì)生產(chǎn)酸性物質(zhì)。而因?yàn)樗嵝晕镔|(zhì)所營(yíng)造的酸性環(huán)境對(duì)雜菌的生長(zhǎng)是不利的,同時(shí)它也會(huì)導(dǎo)致亞硝酸鹽的分解,這兩個(gè)因素將導(dǎo)致在腌制食品的早期階段,所產(chǎn)生的亞硝酸鹽的量比較多,而被分解的比較少,這就使腌制食品中的亞硝酸鹽的含量不斷增加,主要呈現(xiàn)出上升趨勢(shì),直到積累到一定程度達(dá)到頂峰,這個(gè)頂峰就被稱(chēng)為亞硝峰。[14]而在其之后,因?yàn)槿樗峋拇罅可L(zhǎng)繁殖導(dǎo)致乳酸的產(chǎn)生增多,這將會(huì)使雜菌的生存環(huán)境的酸性變得更強(qiáng),在此酸性條件下一方面亞硝酸鹽會(huì)逐漸開(kāi)始分解,另一方面因?yàn)殡s菌在酸性環(huán)境中不利于生長(zhǎng),這也將導(dǎo)致它們沒(méi)有更多的能力生成亞硝酸鹽,其最終結(jié)果便是所生成的亞硝酸鹽變少,其濃度不斷降低,直至降到一個(gè)基本穩(wěn)定的狀態(tài),這個(gè)狀態(tài)下的濃度就是亞硝酸鹽的最終濃度。只有當(dāng)人們了解了在腌制過(guò)程中食品中所含有的亞硝酸鹽的變化情況,才能更好的減少?zèng)]有必要攝入到人體中的亞硝酸鹽。[15]盡管在現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)許多亞硝酸鹽的替代品物質(zhì),這些替代品雖然安全健康,但是它們的性能并不完全一樣,要想找到性能也一致的替代品是極其困難的。[16]所以,現(xiàn)在的首要問(wèn)題是尋找出能夠替代亞硝酸鹽的物質(zhì),這個(gè)替代品既要能提高食品的營(yíng)養(yǎng),又希望能減少食品中亞硝酸鹽的殘留量,這些要求將會(huì)成為食品行業(yè)在未來(lái)研究亞硝酸鹽的主要目的。參考文獻(xiàn)[1]劉廣福,王碩,朱興旺,張?jiān)瑒⑽计?,谷巖,邱兆軍.接種發(fā)酵和自然發(fā)酵酸菜的亞硝酸鹽含量對(duì)比分析[J].中國(guó)釀造,2013,07:74-76.[2]崔松林.乳酸菌接種發(fā)酵酸菜的亞硝酸鹽含量影響因素研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,14:4415-4417.[3]李健,黎晨晨,劉寧,任惠峰.微波法提取酸菜中硝酸鹽及亞硝酸鹽工藝研究[J].哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2009,06:685-687+693.[4]姜雪晶,孫慶申,吳桐,韓德權(quán).混和乳酸菌發(fā)酵對(duì)酸菜品質(zhì)的影響[J].食品與發(fā)酵工業(yè),,:1-9.[5]蒲朝文,夏傳福,謝朝懷,李科武,封雷,汪渝,何軍.醬腌菜腌制過(guò)程中亞硝酸鹽含量動(dòng)態(tài)變化及消除措施的研究[J].衛(wèi)生研究,2001,06:352-354.[6]安洪欣.關(guān)于超聲波法輔助提取酸菜中的硝酸鹽、亞硝酸鹽的方法分析[J].黑龍江科技信息,2012,05:76+20.[7]馬占玲.白菜和酸菜中亞硝酸鹽含量的變化規(guī)律[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,11:6505-6506+6509.[8]武俊瑞,張苗,蔡淼,李欣,楊臣辰,岳喜慶.自然發(fā)酵酸菜發(fā)酵液中化學(xué)成分測(cè)定[J].食品科學(xué),2012,16:117-119.[9]周鳳超,李影,王鵬,關(guān)海寧,郭麗,刁小琴.植物乳桿菌發(fā)酵酸菜的研究[J].食品工業(yè),2012,11:83-86.[10]趙建武,張風(fēng)齋.船員食用酸菜引起亞硝酸鹽中毒33例報(bào)告[J].海軍醫(yī)學(xué),1996,03:280-281.[11]孟良玉,蘭桃芳,何余堂.酸菜中亞硝酸鹽含量變化規(guī)律及降低措施的研究[J].中國(guó)釀造,2005,11:9-10.[12]雷恩春,張

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