皮膚性病科麻風(fēng)桿菌及麻風(fēng)檢查技術(shù)操作規(guī)范

皮膚性病科麻風(fēng)桿菌及麻風(fēng)檢查技術(shù)操作規(guī)范一、皮膚切刮涂片檢查二、組胺試驗(yàn) 三、出汗試驗(yàn) 四、立毛肌試驗(yàn) 一、皮膚切刮涂片檢查【適應(yīng)證】麻風(fēng)病【禁忌證】無(wú)特殊禁忌?！静僮鞣椒俺绦颉?.皮膚取材法(1)取材部位皮膚經(jīng)碘酒、75%乙醇或碘伏消毒后，左手捏緊皮膚，使之缺血，右手持消毒的11號(hào)手術(shù)刀切長(zhǎng)約5mm，深2?3mm切口。(2)以刀尖來(lái)回3-4次刮取切口邊緣和底部組織液，在刀尖上見(jiàn)到少量組織液時(shí)，立即涂抹在干凈載玻片上成直徑5?7mm圓形涂膜。(3)面部切口創(chuàng)面僅用消毒棉球止血5min，肢體部位可加膠布固定或用創(chuàng)可貼止血。(4)皮膚取材部位一般取4?6處，常規(guī)部位為左右眶上、左右耳垂加兩處皮損，皮損應(yīng)取病情最活動(dòng)處。取材完畢后，涂片在火焰上烘干固定，送實(shí)驗(yàn)室染色鏡檢。染色方法染色時(shí)可用加溫法或不加溫法，加溫法用時(shí)較短。(1)加溫法①將已固定的載玻片放在染色架上，滴加苯酚復(fù)紅染液覆蓋整個(gè)涂膜，用酒精燈在載玻片背面加溫15min，以染液勿沸騰為度，載玻片上染液干涸時(shí)要隨時(shí)添加染液。②傾去苯酚復(fù)紅染液，用自來(lái)水從載玻片的一端輕輕沖洗(勿直接沖洗涂膜），再加1%鹽酸乙醇作用15?30s，輕輕晃動(dòng)載玻片使之脫色。如涂膜較厚，脫色時(shí)間可稍延長(zhǎng)，待涂膜呈淡紅色為度。③在玻片上加0.3%亞甲藍(lán)（美藍(lán)）染液30?60s，用自來(lái)水從載玻片的一端輕輕沖洗。待載玻片干后鏡檢。亞甲藍(lán)復(fù)染的時(shí)間應(yīng)視涂膜的厚薄而定。涂膜厚時(shí)染色時(shí)間應(yīng)短，防止背景過(guò)深，鏡檢時(shí)視野透光不良，難以檢出紅染的抗酸桿菌而影響鏡檢結(jié)果。應(yīng)使涂膜的背景為淺藍(lán)色為宜。（2）不加溫法①在室溫條件下，在第一步染色中，滴加苯酚復(fù)紅染液30min，無(wú)須加溫，余染色步驟與加溫法同。②不加溫法染色，染色條件和結(jié)果都比較穩(wěn)定，值得提倡。理想的染片，應(yīng)該是背景淺藍(lán)色，在一個(gè)油鏡視野內(nèi)有數(shù)個(gè)炎癥細(xì)胞，提示組織液取材符合真皮深度，抗酸桿菌呈現(xiàn)鮮紅色。細(xì)菌密度標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算Ridley推薦的一種10倍分級(jí)法，可大體反映皮損內(nèi)細(xì)菌密度，在現(xiàn)場(chǎng)防治和科研中被廣泛應(yīng)用。陰性:檢査100個(gè)以上油鏡視野未査到菌。1十:平均100個(gè)視野査到1?10條菌。2十：平均10個(gè)視野査到1?10條菌。3十：平均每個(gè)視野査到1?10條菌。4十：平均每個(gè)視野査到10?100條菌。5十：平均每個(gè)視野査到100?1000條菌。6十：平均每個(gè)視野査到1000條以上菌。4.細(xì)菌密度指數(shù)（BI）的計(jì)算BI=各涂膜細(xì)菌密度（+）數(shù)的總和/涂膜數(shù)【注意事項(xiàng)】1.取材部位要選取活動(dòng)性皮損，如結(jié)節(jié)、斑塊、紅斑、彌漫性浸潤(rùn)等。2.取材的深度一定要夠，一般為2?3mm，要捏緊皮損，防止出血，刀尖要確認(rèn)刮到組織液后再涂片。因取材深度不夠而取組織液太少，不能形成符合規(guī)定的涂膜是產(chǎn)生査菌假陰性的主要原因。3.組織液取材勿含血液，否則會(huì)影響鏡檢結(jié)果，也是出現(xiàn)査菌假陰性的主要原因。4.抗酸染液一定要新鮮配制，一般勿超過(guò)1年。麻風(fēng)診斷中已經(jīng)有因染液過(guò)期出現(xiàn)查菌假陰性而漏診的情況。5.染色要按規(guī)定操作方法進(jìn)行，要根據(jù)涂膜的厚薄調(diào)整染色的時(shí)間。涂膜太厚，亞甲藍(lán)染色時(shí)間太長(zhǎng)是涂片藍(lán)色背景太深而出現(xiàn)假陰性結(jié)果的常見(jiàn)原因。6.完整菌指菌體完整、染色均勻的正常形、超過(guò)1/2的短桿形及延仲形細(xì)菌。非完整菌為菌體斷裂、染色不均勻的顆粒形、小于1/2的斷裂形、雙球形、念珠形等。7.細(xì)菌形態(tài)對(duì)判斷麻風(fēng)早期療效和復(fù)發(fā)很有用，在疑似復(fù)發(fā)的患者的涂片中見(jiàn)到較多的完整菌，則基本可確定麻風(fēng)復(fù)發(fā)。經(jīng)過(guò)有效治療的患者，麻風(fēng)菌均呈現(xiàn)顆粒狀，無(wú)完整菌存在。二、組胺試驗(yàn)【適應(yīng)證】麻風(fēng)病?！窘勺C】對(duì)所試藥物高度過(guò)敏者?！静僮鞣椒俺绦颉?.用碘酒、75%乙醇或碘伏消毒后，在正常和麻風(fēng)皮損處分別皮內(nèi)注射1：1000的磷酸組胺溶液各0.1ml。2.約30s后，于正常皮膚注射處周?chē)霈F(xiàn)第一個(gè)紅斑，直徑約10mm；再過(guò)30s，在上述紅斑周?chē)霈F(xiàn)第二個(gè)紅斑，直徑30?40mm，邊緣彌漫；最后在紅斑中央出現(xiàn)風(fēng)團(tuán)a此為完整的三聯(lián)反應(yīng)。表明受試皮膚的神經(jīng)功能正常。3.三聯(lián)反應(yīng)的原理是最初出現(xiàn)的紅斑是皮膚毛細(xì)血管受組胺刺激而擴(kuò)張所致，最后出現(xiàn)的風(fēng)團(tuán)是繼毛細(xì)血管擴(kuò)張后，血漿滲出引起的局部水腫。重要的是第二個(gè)紅斑，是小動(dòng)脈擴(kuò)張所致。由于小動(dòng)脈擴(kuò)張的前提是支配其血管的末梢神經(jīng)要正常，并能通過(guò)軸突反射而傳導(dǎo)沖動(dòng)才能完成，因此特別有意義。在神經(jīng)切斷，或用普魯卡因封閉神經(jīng)后，就不會(huì)有第二個(gè)紅斑。麻風(fēng)患者由于皮損處末梢神經(jīng)受到破壞，所支配的小動(dòng)脈不能擴(kuò)張，也不出現(xiàn)第二個(gè)紅斑，稱(chēng)三聯(lián)反應(yīng)不完整?！咀⒁馐马?xiàng)】1.在炎性紅斑處不宜做此試驗(yàn)，以免判斷失誤。2.組胺三聯(lián)反應(yīng)的不完整，不是麻風(fēng)病所特有的，許多周?chē)窠?jīng)病變都町出現(xiàn)。3.皮損處的改變要與正常皮膚處對(duì)照觀察。三、出汗試驗(yàn)【適應(yīng)證】麻風(fēng)病?！窘勺C】對(duì)所試藥物高度過(guò)敏者?！静僮鞣椒俺绦颉?.淀粉法(1)在正常皮膚和皮損處用碘酒和75%乙醇消毒后，再各涂碘酒，待干后，分別皮內(nèi)注射1:1000的毛果蕓香堿溶液各0.1ml，擦干針尖處滲液，立即撒上薄層干燥淀粉。(2)3?5min后，正常皮膚部位淀粉處出現(xiàn)藍(lán)色小點(diǎn)或小片，表示出汗正常。(3)如果皮損處汗腺破壞或泌汗神經(jīng)破壞，泌汗功能障礙，則碘無(wú)法與淀粉發(fā)生作用，不出現(xiàn)藍(lán)點(diǎn)或藍(lán)色小片。2.試紙法(1)皮內(nèi)注射毛果蕓香堿后，用棉球擦去針眼處滲液，2mm后，將溴酚藍(lán)紙按在針眼處，輕輕加壓，15s后將紙取下，如有出汗則在溴酚藍(lán)紙上顯示針尖或稍大的藍(lán)色小點(diǎn)。(2)此法的試驗(yàn)結(jié)果比較精確(3)溴酚藍(lán)紙的制備。取溴酚藍(lán)0.1g溶于95%乙醇溶液10ml內(nèi)配成1%溴酚藍(lán)溶液；用滴管將1%溴酚藍(lán)溶液滴在濾紙上，待自然干燥后成黃色的濾紙，剪成1cmX1cm大小備用?！咀⒁馐马?xiàng)】宜在對(duì)側(cè)相應(yīng)或鄰近的正常皮膚處作對(duì)照，皮損處的變化要與正常皮膚處仔細(xì)觀察對(duì)比。四、立毛肌試驗(yàn)【適應(yīng)證】麻風(fēng)病?！窘勺C】對(duì)所試藥物高度過(guò)敏者。【操作方法及程序】1.在正常和皮損處先以碘酒和75%乙醇消毒后，分別于皮內(nèi)注射1:10萬(wàn)的苦味酸煙堿溶液0.1ml。2.正常皮膚的末梢神經(jīng)未受