應用多重連接依賴性探針擴增技術快速診斷遺傳性壓力敏感性周圍神經(jīng)病

應用多重連接依賴性探針擴增技術快速診斷遺傳性壓力敏感性周圍神經(jīng)病

2遺傳性壓力敏感性周圍神經(jīng)?。℉ereditaryNeuropathywithliabilitytoPressurePalsies，HNPP）一種常染色體顯性遺傳的周圍神經(jīng)病臨床表現(xiàn)：易嵌壓神經(jīng)分布區(qū)域反復發(fā)作的運動及感覺障礙，常與周圍神經(jīng)長期壓迫和輕微損傷相關。神經(jīng)電生理檢查：具有彌漫性周圍神經(jīng)傳導異常，特別是在易卡壓部位。周圍神經(jīng)活檢?？梢姷湫偷呐D腸樣結構。國內(nèi)尚缺乏相關流行病學資料，芬蘭西南部的流行病學調查顯示其人群患病率約16/100000。HNPP發(fā)病機制HNPP的致病基因為周圍髓鞘蛋白22（peripheralMyelinprotein22，PMP22）基因。突變類型：PMP22基因以及附近1.5Mb大片段雜合缺失—85%PMP22基因內(nèi)突變—15%HNPP分子診斷技術檢測技術優(yōu)點缺點熒光原位雜交（FISH）定量分析耗時長、操作繁瑣、通量低Real-timePCR快速、操作簡便、定量分析對DNA質量要求高、通量低MLPA快速、操作簡便、定量分析對DNA質量要求相對低（20-200ng）、通量高MLPA技術簡介多重連接依賴性探針擴增（multiplexligation-dependentprobeamplification，MLPA）是一種新興的基因半定量分析技術。通過利用多重連接依賴性探針可以同時檢測多個目的基因的各外顯子，以對其拷貝數(shù)進行定量分析。具有簡便、快速、高靈敏度及特異度的優(yōu)點。本研究采用MLPA技術對HNPP患者進行快速基因診斷。研究方法8例臨床以及肌電圖診斷為HNPP的患者男：女=6:2；年齡：13-55歲。4名患者有陽性家族史，分別來自兩個家系（如下圖）。簽署知情同意書后，從外周血提取研究對象基因組DNA，運用MLPA技術對位于17p11.2區(qū)域1.5Mb片段上的PMP22基因、TEKT3基因及COX10基因進行拷貝數(shù)分析。臨床資料以及EMG結果注釋：*周圍運動神經(jīng)受累癥狀包括壓迫后出現(xiàn)的垂腕、手指背伸困難、手指不能合攏、垂足、足背屈困難、肌肉萎縮、肌力減退。**周圍感覺神經(jīng)受累癥狀包括壓迫后出現(xiàn)肢體麻木、感覺減退。通過MLPA技術檢測發(fā)現(xiàn)，8名患者中有7名患者存在PMP22基因、TEKT3基因及COX10基因雜合缺失。研究結果8名臨床擬診為HNPP患者的MLPA結果分析HNPP雜合缺失檢出率為87.5%。HNPP臨床癥狀具有多樣性，神經(jīng)電生理和神經(jīng)活檢組織病理檢查常缺乏特異性。因此，基因診斷仍是HNPP診斷的關鍵。研究中，1名患者未發(fā)現(xiàn)PMP22基因雜合缺失，可能系PMP22基因內(nèi)突變，需進一步測序驗證。研究討論研究討論目前已有國外文獻報道一些家系HNPP患者并非通常的1.5Mb大片段缺失，而是出現(xiàn)PMP22基因內(nèi)小片段缺失。但本研究8名患者均未發(fā)現(xiàn)此類基因變異，目前PMP22基因部分外顯子缺失所致的HNPP在國內(nèi)尚未有報道，國內(nèi)是否存在該缺失類型尚需進一