實(shí)驗(yàn)一、蛋白質(zhì)的兩性電離及等電點(diǎn)測(cè)定

實(shí)

驗(yàn)

一

蛋

白

質(zhì)

兩

性

電

離

與

等

電

點(diǎn)【教學(xué)目標(biāo)】1、獨(dú)立操作，一絲不茍地作實(shí)驗(yàn)。2、仔細(xì)觀察不同階段試劑顏色變化及沉淀的出現(xiàn)和消失，通過現(xiàn)象觀察能分析蛋白質(zhì)兩性電離的性質(zhì)，正確填寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告。3、通過往五支不同pH值溶液的試管內(nèi)加入酪蛋白，觀察沉淀出現(xiàn)的情況，確定其等電點(diǎn)。4、共同討論測(cè)定等電點(diǎn)的原理。一、蛋白質(zhì)的兩性電離

多肽鏈中氨基酸殘基中有可解離基團(tuán)，如：末端-COO-、-NH3+，酸性氨基酸側(cè)鏈-COO-

，Lys的ε-NH3+，Arg的胍基，His的咪唑基。*蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)(pI)當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液處于兼性離子，凈電荷為零，此時(shí)溶液的pH稱為蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。

NH3+NH3+NH2PPP

COOHCOO--COO-正離子兼性離子負(fù)離子

pH＜pIpH=pIpH＞pI+OH-+OH-+H++H+各種蛋白質(zhì)的氨基酸組成不同，解離情況不同，等電點(diǎn)不同。多數(shù)接近5.0。蛋白質(zhì)的性質(zhì)之一：兩性電離與等電點(diǎn)【實(shí)驗(yàn)原理】

蛋白質(zhì)分子是兩性電解質(zhì)。蛋白質(zhì)在溶液的pH值為等電點(diǎn)時(shí)游離為兩性離子，溶解度最低，容易沉淀析出。若在大于或小于等電點(diǎn)的溶液中，因蛋白質(zhì)分子帶有同種電荷而相互排斥，不易產(chǎn)生沉淀?！驹噭?、0.5％酪蛋白醋酸鈉2、0.01％溴甲酚綠指示劑變色范圍是pH3.8～5.4。指示劑的酸色型為黃色，堿色型為藍(lán)色。3、0.02mol／L鹽酸溶液4、0.02mol／L氫氧化鈉溶液5、1.00mol／L乙酸溶液6、0.10mol／L乙酸溶液7、0.01mol／L乙酸溶液【操作】1、蛋白質(zhì)的兩性電離（1）取一支試管，加入0.5％酪蛋白醋酸鈉溶液20滴和0.01％溴甲酚綠指示劑2滴，搖勻。觀察溶液顏色，記錄，并分析原因。（2）用細(xì)滴管緩慢加入0.02mol/L鹽酸溶液，、邊滴邊搖，直至有明顯的大量沉淀發(fā)生，此時(shí)溶液的pH值接近酪蛋白的等電點(diǎn)。觀察溶液顏色的變化，記錄，分析原因。（3）繼續(xù)滴入0.02mol／L鹽酸溶液，觀察沉淀和溶液顏色的變化，記錄，分析原因。（4）再滴入0.02mol／L氫氧化鈉溶液進(jìn)行中和，觀察是否出現(xiàn)沉淀，記錄，解釋原因。當(dāng)繼續(xù)滴入0.02mol／L氫氧化鈉溶液時(shí)，觀察沉淀和溶液顏色的變化。解釋其原因。作好記錄。

結(jié)果及分析操作

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

簡(jiǎn)要分析在酪蛋白溶液中加入指示劑滴入HCL至出現(xiàn)大量沉淀繼續(xù)滴入HCL滴入NaOH溶液繼續(xù)滴入NaOH溶液至沉淀溶解2、酪蛋白等電點(diǎn)的測(cè)定（1）取5支試管，編號(hào)后按下表的順序準(zhǔn)確地加入各種試劑，．然后混合均勻(每管加入酪蛋白醋酸鈉溶液后，須立即搖勻該管)。

試劑(ml)及管號(hào)12345蒸餾水（ml)1.6_3.01.53.40.01mol/L醋酸溶液___2.50.60.10mol/L醋酸溶液_4.01.0__1.0mol/L醋酸溶液2.4____酪蛋白醋酸鈉溶液1.01.01.01.01.0溶液的最終pH3.24.14.75.35.9沉淀出現(xiàn)的多少(2)靜置約20min，觀察每支試管中溶液的混濁度，以-，+，++，+++，++++符號(hào)表示沉淀的多少，將結(jié)果記錄于上表中。（3）該實(shí)驗(yàn)要求各種試劑的濃度和加入量必須相當(dāng)準(zhǔn)確。除了需要精心配制試劑以外，