分子生物學(xué)期末試題

分子生物學(xué)期末考試試題一、名詞解釋1、反式作用因子：能直接或間接地識(shí)別或結(jié)合各類順式作用元件核心序列，參與調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄效率的蛋白質(zhì)。2、基因家族：3、C值矛盾：C值是指真核生物單倍體的DNA含量，一般的，真核生物的進(jìn)化程度越高，C值越大，但在一些兩棲類生物中，其C值卻比哺乳動(dòng)物大的現(xiàn)象。原因是它含有大量的重復(fù)序列，而且功能DNA序列大多被不編碼蛋白質(zhì)的非功能DNA所隔開。4、核型：指一個(gè)物種所特有的染色體數(shù)目和每一條染色體所特有的形態(tài)特征。5、RNAediting：轉(zhuǎn)錄后的RNA在編碼區(qū)發(fā)生堿基的突變、加入或丟失等現(xiàn)象。二、判斷：1、真核生物所有的mRNA都有polyA結(jié)構(gòu)。（X）組蛋白的mRNA沒有2、由于密碼子存在搖擺性，使得一種tRNA分子常常能夠識(shí)別一種以上同一種氨基酸的密碼子。（√）3、大腸桿菌的連接酶以ATP作為能量來源。（X）以NAD作為能量來源4、tRNA只在蛋白質(zhì)合成中起作用。（X）tRNA還有其它的生物學(xué)功能，如可作為逆轉(zhuǎn)錄酶的引物5、DNA聚合酶和RNA聚合酶的催化反應(yīng)都需要引物。（X）RNA聚合酶的催化反應(yīng)不需要引物6、真核生物蛋白質(zhì)合成的起始氨基酸是甲酰甲硫氨酸（X）真核生物蛋白質(zhì)合成的起始氨基酸是甲硫氨酸7、質(zhì)粒不能在宿主細(xì)胞中獨(dú)立自主地進(jìn)行復(fù)制（X）質(zhì)粒具有復(fù)制起始原點(diǎn)，能在宿主細(xì)胞中獨(dú)立自主地進(jìn)行復(fù)制8、RNA因?yàn)椴缓蠨NA基因組，所以根據(jù)分子遺傳的中心法則，它必須先進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，才能復(fù)制和增殖。（X）不一定，有的RNA病毒可直接進(jìn)行RNA復(fù)制和翻譯9、細(xì)菌的RNA聚合酶全酶由核心酶和ρ因子組成。（X）細(xì)菌的RNA聚合酶全酶由核心酶和σ因子組成10、核小體在復(fù)制時(shí)組蛋白八聚體以全保留的方式傳遞給子代。（√）11、色氨酸操縱子中含有衰減子序列（√）12、SOS框是所有din基因（SOS基因）的操縱子都含有的20bp的lexA結(jié)合位點(diǎn)。（√）三、填空：1、原核生物的啟動(dòng)子的四個(gè)保守區(qū)域?yàn)檗D(zhuǎn)錄起始點(diǎn)、-10區(qū)、-35區(qū)、-10區(qū)與-35區(qū)的距離。2、根據(jù)對(duì)DNA序列和蛋白質(zhì)因子的要求，可以把重組分為同源重組、位點(diǎn)專一性重組/特異位點(diǎn)重組、轉(zhuǎn)座重組、異常重組四類。3、研究啟動(dòng)子功能的主要方法是啟動(dòng)子的突變，研究酶與啟動(dòng)子間識(shí)別與結(jié)合的方法有足跡法和堿基修飾法。4、真核生物中反式作用因子的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域有螺旋－轉(zhuǎn)角－螺旋(HTH)、堿性－螺旋-環(huán)-螺旋(bHLH)、鋅指(zincfinger)、堿性－亮氨酸拉鏈(bZIP)。5、根據(jù)DNA復(fù)性動(dòng)力學(xué)，DNA序列可以分成哪四種類型？單一序列、輕度重復(fù)序列、中度重復(fù)序列、高度重復(fù)序列四、選擇題（10分，每題1分）1、在真核基因表達(dá)調(diào)控中，(B)調(diào)控元件能促進(jìn)轉(zhuǎn)錄的速率。A、衰減子B、增強(qiáng)子C、repressorD、TATABox2、核基因mRNA、的內(nèi)元拼接點(diǎn)序列為(D)。A、AG…GUB、GA…UGC、UG…GAD、GU…AG3、下列何種因子不會(huì)誘變DNA(D)A、亞硝酸B、UVC、丫啶橙D、飽和脂肪乳劑4、RNA聚合酶1的功能是(C)A轉(zhuǎn)錄tRNA和5sRNA基因；B轉(zhuǎn)錄蛋白質(zhì)基因和部分snRNA基因；C只轉(zhuǎn)錄rRNA基因；D轉(zhuǎn)錄多種基因5、如果一段DNA產(chǎn)生了＋1的譯碼突變，可以加以校正的是（D）A突變型氨酰tRNA合成酶B有突變型反密碼子的tRNAC有切割一個(gè)核苷酸的酶D有四個(gè)堿基長(zhǎng)的反密碼子的tRNA6、參與重組修復(fù)的酶系統(tǒng)中，具有交換DNA鏈活性的是（D）ADNA聚合酶=1\*ROMANIBRecB蛋白CRecC蛋白DRecA蛋白7、原核RNApol識(shí)別的啟動(dòng)子位于：(A)A、轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)的上游；B、轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)的下游；C、轉(zhuǎn)錄終點(diǎn)的下游；D、無一定位置；8、在研究原核翻譯過程中，可用不同的抑制劑研究翻譯諸階段，其中鏈霉素可抑制：(C)A、起始B、延長(zhǎng)C、肽基有P位移至A位D、核糖體移位9、在什么情況下，乳糖操縱子的轉(zhuǎn)錄活性最高（A）A高乳糖，低葡萄糖B高乳糖，高葡萄糖C低乳糖，低葡萄糖D低乳糖，高葡萄糖10、設(shè)密碼子為5’XYZ3’，反密碼子為5’ABC3’，則處于擺動(dòng)位置上的堿基為（C）AX-CBY-BCZ-A五、簡(jiǎn)答：1.敘述由一段DNA序列形成多種蛋白產(chǎn)物的機(jī)制。答：由一段DNA形成多種蛋白產(chǎn)物的可能機(jī)制有：閱讀框不同、抗終止作用、可變剪切和RNA編輯。重疊基因在фX174中最早發(fā)現(xiàn)，兩個(gè)鄰近的基因以一種巧妙的方式發(fā)生重疊，轉(zhuǎn)錄出來的mRNA以不同的閱讀框閱讀并被表達(dá)，產(chǎn)生兩種以上的蛋白產(chǎn)物。在λ噬菌體中有不同時(shí)期表達(dá)的操縱子，如左向早期操縱子可以轉(zhuǎn)錄出兩種mRNA，這是由于依賴于ρ因子的終止作用以及早期基因編碼的抗終止蛋白的抗終止作用造成的。抗終止蛋白與RNA聚合酶結(jié)合后修飾了酶的構(gòu)象，使其不再識(shí)別弱終止子，從而使一段DNA可以轉(zhuǎn)錄出多種mRNA，從而產(chǎn)生兩種以上的蛋白產(chǎn)物。真核生物的hnRNA含有內(nèi)含子，通過剪接可將其出去形成Mrna,但有的高等真核細(xì)胞存在可變剪接，即來自一個(gè)基因的RNA，其某個(gè)內(nèi)含子的5‘供體在不同的條件下和不同內(nèi)含子的3’受體進(jìn)行剪接，從而將來自一個(gè)基因的mRNA前體剪接產(chǎn)生多種mRNA，翻譯出不同的蛋白質(zhì)。另外，在真核生物中存在RNA編輯，將mRNA在轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行插入、缺失或核苷酸的替換，改變DNA模板的遺傳信息，從而翻譯出氨基酸序列不同的多種蛋白質(zhì)。各種二核苷酸對(duì)的排列順序不同，對(duì)雙螺旋結(jié)構(gòu)的影響不同。請(qǐng)問那種的Tm最低？答：的Tm值最低。含這種二核苷酸的序列有那些，為什么？（7分）答：含有A/T的主要有復(fù)制起始點(diǎn)、原核生物啟動(dòng)子的-10區(qū)、真核生物啟動(dòng)子的TATA框，此外，還有生物體選擇以UAA作為最有效的終止密碼子。DNA在復(fù)制和轉(zhuǎn)錄時(shí)要在起始原點(diǎn)和啟動(dòng)子區(qū)形成起始復(fù)合物，復(fù)制起始點(diǎn)、原核生物啟動(dòng)子的-10區(qū)、真核生物啟動(dòng)子的TATA框富含AT對(duì)，二者之間有兩條氫鍵，在此處易于解開雙鏈，容易形成起始復(fù)合物，使復(fù)制和轉(zhuǎn)錄過程順利進(jìn)行。生物體選擇以UAA作為最有效的終止密碼子，因?yàn)樵?4的密碼子中，假使UAA具有和它配對(duì)的反密碼子，所形成的產(chǎn)物在生理?xiàng)l件下也是不穩(wěn)定的，有利于肽鏈的釋放，而且UAA很少發(fā)生無義抑制突變，有利于肽鏈的正常終止。3、詳述大腸桿菌色氨酸操縱子的調(diào)控機(jī)理。（12分）答：大腸桿菌色氨酸操縱子的轉(zhuǎn)錄受阻遏和衰減兩種機(jī)制的控制，前者通過阻遏蛋白和操縱基因的作用控制轉(zhuǎn)錄的起始，后者通過前導(dǎo)序列形成特殊的空間結(jié)構(gòu)控制轉(zhuǎn)錄起始后是否進(jìn)行下去。1）色氨酸操縱子的可阻遏系統(tǒng)：在阻遏系統(tǒng)中，起負(fù)調(diào)控的調(diào)節(jié)基因的產(chǎn)物是一個(gè)無活性的阻遏蛋白，色氨酸是輔阻遏物；當(dāng)色氨酸不足時(shí)，阻遏蛋白無活性，不能和操縱基因結(jié)合，色氨酸操縱子能夠轉(zhuǎn)錄；當(dāng)色氨酸充足時(shí)，阻遏蛋白和它結(jié)合而被激活，從而結(jié)合到操縱基因上，而色氨酸操縱子的操縱基因位于啟動(dòng)基因內(nèi)，因此，活性阻遏物的結(jié)合排斥了RNA聚合酶的結(jié)合，從而抑制了結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)。2）色氨酸操縱子的衰減調(diào)控在色氨酸操縱子的操縱基因和第一個(gè)結(jié)構(gòu)基因之間有一段前導(dǎo)序列L，在前導(dǎo)序列上游部分有一個(gè)核糖體結(jié)合位點(diǎn)，后面是以起始密碼AUG開頭的14個(gè)氨基酸的編碼區(qū)，編碼區(qū)有兩個(gè)緊密相連的色氨酸密碼子，后面是一個(gè)終止密碼子UGA，在開放閱讀框下游有一個(gè)不依賴ρ因子的終止子，是一段富含G/C的回文序列，可以形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，因此可以在此處終止轉(zhuǎn)錄。另外前導(dǎo)序列包含4個(gè)能進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)的片斷1區(qū)、2區(qū)、3區(qū)和4區(qū)。它們能以1、2和3、4或2、3的方式進(jìn)行配對(duì)，從而使前導(dǎo)序列形成二級(jí)結(jié)構(gòu)的變化。在細(xì)菌中，翻譯與轉(zhuǎn)錄偶連，一旦RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄出trpmRNA中的前導(dǎo)肽編碼區(qū)，核糖體便立即結(jié)合上去翻譯這一序列。當(dāng)細(xì)胞中缺乏色氨酸時(shí)，Trp-tRNATrp的濃度很低，核糖體翻譯前導(dǎo)肽至兩個(gè)連續(xù)的色氨酸密碼子處就陷入停頓，這時(shí)核糖體只占據(jù)1區(qū)，由RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄的2區(qū)和3區(qū)便可配對(duì)，4區(qū)游離在外，這樣就不能形成終止子結(jié)構(gòu)，RNA聚合酶就可以一直轉(zhuǎn)錄下去，最后完成trp全部結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄，得到完整的mRNA分子。當(dāng)細(xì)胞中存在色氨酸時(shí)，就有一定濃度的Trp-tRNATrp，核糖體便能順利通過兩個(gè)連續(xù)的色氨酸密碼子而翻譯出整個(gè)前導(dǎo)肽，直到前導(dǎo)肽序列后面的終止密碼子UGA處停止。此時(shí)，核糖體占據(jù)了1區(qū)和2區(qū)，結(jié)果3區(qū)和4區(qū)配對(duì)，形成轉(zhuǎn)錄終止子結(jié)構(gòu)，使RNA聚合酶終止轉(zhuǎn)錄。實(shí)現(xiàn)衰減調(diào)控的關(guān)鍵在于時(shí)間和空間上的巧妙安排。在空間上，兩個(gè)色氨酸密碼子的位置很重要，不可隨意更改；在時(shí)間上，核糖體停頓于兩個(gè)色氨酸密碼子上時(shí)，序列4應(yīng)當(dāng)還未轉(zhuǎn)錄出來。分子生物學(xué)試卷一、名詞解釋（共10題，每題2分，共20分）1、質(zhì)粒：2、目的基因：3、轉(zhuǎn)錄：4、染色體：5、原核生物：6、基因組：7、翻譯：8、復(fù)制：9、基因表達(dá)：10、HGP二、填空題（共28空，每空1.5分，共42分）1、DNA與RNA在組成成分上的基本區(qū)別包括，DNA含有、，而RNA含有、。2、RNA主要包括、、、共三種。3、真核生物基因組的基本特征包括、、、。而原核生物基因組的基本特征包括、、、。4、DNA復(fù)制是一個(gè)的過程，即子代分子的來自親代，而是新合成的。這個(gè)復(fù)制特點(diǎn)保的。5、基因工程包括五個(gè)基本流程：、、、和。6、病毒根據(jù)其遺傳物質(zhì)可分為：病毒和病毒。7、基因表達(dá)主要生成：、。三、簡(jiǎn)答題：（共3題，每題6分，共18分）PCR技術(shù)有哪三大基本環(huán)節(jié)？tRNA和DNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)各有何基本特點(diǎn)？逆轉(zhuǎn)錄過程的基本原理是什么？有何醫(yī)學(xué)意義？四、問答題：（共2題，每題10分，共20分）1、真核生物與原核生物基因表達(dá)調(diào)控各自有何基本特點(diǎn)？其意義是什么？2、何謂人類基因組計(jì)劃，其意義如何？江西省高等教育考試(非主干課程)分子生物學(xué)試卷參考答案一、名詞解釋(共10題,每題2分,共20分)1、細(xì)菌核外環(huán)狀DNA2、生物技術(shù)中的應(yīng)用基因3、RNA的合成過程4、核內(nèi)遺傳信息貯存形式5、早期細(xì)胞類型6、一物種全部基因之和7、蛋白質(zhì)合成過程8、DNA合成過程9、轉(zhuǎn)錄加翻譯的信息實(shí)現(xiàn)過程10、人類基因組計(jì)劃二、填空(共28空,每空1.5分,共42分)1、脫氧核糖，T，核糖，U2、tRNA,mRNA,Rrna,3、斷裂基因,基因家族,重復(fù)序列多,細(xì)胞器基因;操縱子,連續(xù)基因,重復(fù)序列少,無細(xì)胞器基因4、半保留,一半,另一半,高保真性5、分,切接,轉(zhuǎn),篩,6、DNARNA7、RNA蛋白質(zhì)三、簡(jiǎn)答(共3題,每題6分,共18分)1、變性,退火,延伸,(各2分)2、tRNA含氨基酸臂與反密碼環(huán).(3分)DNA含兩條平行螺旋鏈與堿基互補(bǔ)(3分)3、逆轉(zhuǎn)錄酶以病毒RNA為模板合成cDNA進(jìn)一步在縮主細(xì)胞轉(zhuǎn)變成前病毒(4分)并予進(jìn)一步說明醫(yī)學(xué)意義(2分)四、問答(共2題,每題10分,共20分)1、特點(diǎn):從兩類調(diào)控的環(huán)節(jié)與主要環(huán)節(jié)與方式加以區(qū)別(6分)前者環(huán)節(jié)多于后者,后者以操縱子模式并進(jìn)一步說明意義(4分)2、對(duì)人類自身基因序列等的研究(4分),其意義可從基礎(chǔ),醫(yī)學(xué),藥學(xué)等方面說明(6分)分子生物學(xué)試題及答案分子生物學(xué)試題及答案

一、名詞解釋

1．cDNA與cccDNA：cDNA是由mRNA通過反轉(zhuǎn)錄酶合成的雙鏈DNA；cccDNA是游離于染色體之外的質(zhì)粒雙鏈閉合環(huán)形DNA。

2．標(biāo)準(zhǔn)折疊單位：蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)單元α－螺旋與β－折疊通過各種連接多肽可以組成特殊幾何排列的結(jié)構(gòu)塊，此種確定的折疊類型通常稱為超二級(jí)結(jié)構(gòu)。幾乎所有的三級(jí)結(jié)構(gòu)都可以用這些折疊類型，乃至他們的組合型來予以描述，因此又將其稱為標(biāo)準(zhǔn)折疊單位。

3．CAP：環(huán)腺苷酸（cAMP）受體蛋白CRP（cAMPreceptorprotein），cAMP與CRP結(jié)合后所形成的復(fù)合物稱激活蛋白CAP（cAMPactivatedprotein）

4．回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互補(bǔ)序列，常是限制性酶切位點(diǎn)。

5．micRNA：互補(bǔ)干擾RNA或稱反義RNA，與mRNA序列互補(bǔ)，可抑制mRNA的翻譯。

6．核酶：具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工過程中起到自我催化的作用。

7．模體：蛋白質(zhì)分子空間結(jié)構(gòu)中存在著某些立體形狀和拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)頗為類似的局部區(qū)域

8．信號(hào)肽：在蛋白質(zhì)合成過程中N端有15~36個(gè)氨基酸殘基的肽段，引導(dǎo)蛋白質(zhì)的跨膜。

9．弱化子：在操縱區(qū)與結(jié)構(gòu)基因之間的一段可以終止轉(zhuǎn)錄作用的核苷酸序列。

10．魔斑：當(dāng)細(xì)菌生長(zhǎng)過程中，遇到氨基酸全面缺乏時(shí)，細(xì)菌將會(huì)產(chǎn)生一個(gè)應(yīng)急反應(yīng)，停止全部基因的表達(dá)。產(chǎn)生這一應(yīng)急反應(yīng)的信號(hào)是鳥苷四磷酸(ppGpp)和鳥苷五磷酸（pppGpp）。PpGpp與pppGpp的作用不只是一個(gè)或幾個(gè)操縱子，而是影響一大批，所以稱他們是超級(jí)調(diào)控子或稱為魔斑。

11．上游啟動(dòng)子元件：是指對(duì)啟動(dòng)子的活性起到一種調(diào)節(jié)作用的DNA序列，-10區(qū)的TATA、-35區(qū)的TGACA及增強(qiáng)子，弱化子等。

12．DNA探針：是帶有標(biāo)記的一段已知序列DNA，用以檢測(cè)未知序列、篩選目的基因等方面廣泛應(yīng)用。

13．SD序列：是核糖體與mRNA結(jié)合序列，對(duì)翻譯起到調(diào)控作用。

14．單克隆抗體：只針對(duì)單一抗原決定簇起作用的抗體。

15．考斯質(zhì)粒：是經(jīng)過人工構(gòu)建的一種外源DNA載體，保留噬菌體兩端的COS區(qū)，與質(zhì)粒連接構(gòu)成。

16．藍(lán)-白斑篩選：含LacZ基因（編碼β半乳糖苷酶）該酶能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)產(chǎn)生藍(lán)色，從而使菌株變藍(lán)。當(dāng)外源DNA插入后，LacZ基因不能表達(dá)，菌株呈白色，以此來篩選重組細(xì)菌。稱之為藍(lán)-白斑篩選。

17．順式作用元件：在DNA中一段特殊的堿基序列，對(duì)基因的表達(dá)起到調(diào)控作用的基因元件。

18．Klenow酶：DNA聚合酶I大片段，只是從DNA聚合酶I全酶中去除了5’3’外切酶活性

19．錨定PCR：用于擴(kuò)增已知一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分別用多聚dC和已知的序列作為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

20．融合蛋白：真核蛋白的基因與外源基因連接，同時(shí)表達(dá)翻譯出的原基因蛋白與外源蛋白結(jié)合在一起所組成的蛋白質(zhì)。

二、填空

1．

DNA的物理圖譜是DNA分子的（限制性內(nèi)切酶酶解）片段的排列順序。

2．

RNA酶的剪切分為（自體催化）、（異體催化）兩種類型。

3．原核生物中有三種起始因子分別是（IF-1）、（IF-2）和（IF-3）。

4．蛋白質(zhì)的跨膜需要（信號(hào)肽）的引導(dǎo)，蛋白伴侶的作用是（輔助肽鏈折疊成天然構(gòu)象的蛋白質(zhì)）。

5．啟動(dòng)子中的元件通?？梢苑譃閮煞N：（核心啟動(dòng)子元件）和（上游啟動(dòng)子元件

）。

6．分子生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容主要包含（結(jié)構(gòu)分子生物學(xué)）、（基因表達(dá)與調(diào)控）、（DNA重組技術(shù)）三部分。

7．證明DNA是遺傳物質(zhì)的兩個(gè)關(guān)鍵性實(shí)驗(yàn)是（肺炎球菌感染小鼠）、（T2噬菌體感染大腸桿菌）這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)中主要的論點(diǎn)證據(jù)是：（生物體吸收的外源DNA改變了其遺傳潛能）。

8．hnRNA與mRNA之間的差別主要有兩點(diǎn)：（hnRNA在轉(zhuǎn)變?yōu)閙RNA的過程中經(jīng)過剪接，）、

（mRNA的5′末端被加上一個(gè)m7pGppp帽子，在mRNA3′末端多了一個(gè)多聚腺苷酸(polyA)尾巴）。

9．蛋白質(zhì)多亞基形式的優(yōu)點(diǎn)是（亞基對(duì)DNA的利用來說是一種經(jīng)濟(jì)的方法）、（可以減少蛋白質(zhì)合成過程中隨機(jī)的錯(cuò)誤對(duì)蛋白質(zhì)活性的影響）、（活性能夠非常有效和迅速地被打開和被關(guān)閉）。

10．蛋白質(zhì)折疊機(jī)制首先成核理論的主要內(nèi)容包括（成核）、（結(jié)構(gòu)充實(shí)）、（最后重排）。

11．半乳糖對(duì)細(xì)菌有雙重作用；一方面（可以作為碳源供細(xì)胞生長(zhǎng)）；另一方面（它又是細(xì)胞壁的成分）。所以需要一個(gè)不依賴于cAMP—CRP的啟動(dòng)子S2進(jìn)行本底水平的永久型合成；同時(shí)需要一個(gè)依賴于cAMP—CRP的啟動(dòng)子S1對(duì)高水平合成進(jìn)行調(diào)節(jié)。有G時(shí)轉(zhuǎn)錄從（S2）開始，無G時(shí)轉(zhuǎn)錄從（S1）開始。

12．DNA重組技術(shù)也稱為（基因克?。┗颍ǚ肿涌寺。?。最終目的是（把一個(gè)生物體中的遺傳信息DNA轉(zhuǎn)入另一個(gè)生物體）。典型的DNA重組實(shí)驗(yàn)通常包含以下幾個(gè)步驟：

①提取供體生物的目的基因（或稱外源基因），酶接連接到另一DNA分子上（克隆載體），形成一個(gè)新的重組DNA分子。

②將這個(gè)重組DNA分子轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞并在受體細(xì)胞中復(fù)制保存，這個(gè)過程稱為轉(zhuǎn)化。

③對(duì)那些吸收了重組DNA的受體細(xì)胞進(jìn)行篩選和鑒定。

④對(duì)含有重組DNA的細(xì)胞進(jìn)行大量培養(yǎng)，檢測(cè)外援基因是否表達(dá)。

13、質(zhì)粒的復(fù)制類型有兩種：受到宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)合成的嚴(yán)格控制的稱為（嚴(yán)緊型質(zhì)粒），不受宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)合成的嚴(yán)格控制稱為（松弛型質(zhì)粒）。

14．PCR的反應(yīng)體系要具有以下條件：

a、被分離的目的基因兩條鏈各一端序列相互補(bǔ)的DNA引物（約20個(gè)堿基左右）。

b、具有熱穩(wěn)定性的酶如：TagDNA聚合酶。

c、dNTP

d、作為模板的目的DNA序列

15．PCR的基本反應(yīng)過程包括：（變性）、（退火）、（延伸）三個(gè)階段。

16、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的基本過程通常包括：

①將克隆的外源基因?qū)氲揭粋€(gè)受精卵或胚胎干細(xì)胞的細(xì)胞核中；

②接種后的受精卵或胚胎干細(xì)胞移植到雌性的子宮；

③完成胚胎發(fā)育，生長(zhǎng)為后代并帶有外源基因；

④利用這些能產(chǎn)生外源蛋白的動(dòng)物作為種畜，培育新的純合系。

17．雜交瘤細(xì)胞系的產(chǎn)生是由（脾B）細(xì)胞與（骨髓瘤）細(xì)胞雜交產(chǎn)生的，由于（脾細(xì)胞）可以利用次黃嘌呤，（骨細(xì)胞）提供細(xì)胞分裂功能，所以能在HAT培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。

18．隨著研究的深入第一代抗體稱為（多克隆抗體）、第二代（單克隆抗體）、第三代（基因工程抗體）。

19．目前對(duì)昆蟲病毒的基因工程改造主要集中于桿狀病毒，表現(xiàn)在引入（外源毒蛋白基因

）；（擾亂昆蟲正常生活周期的基因）；（

對(duì)病毒基因進(jìn)行修飾）。

20．哺乳類RNA聚合酶Ⅱ啟動(dòng)子中常見的元件TATA、GC、CAAT所對(duì)應(yīng)的反式作用蛋白因子分別是（TFIID）、（SP-1）和（CTF/NF1）。

21．RNA聚合酶Ⅱ的基本轉(zhuǎn)錄因子有、TFⅡ-A、TFⅡ-B、TFII-D、TFⅡ-E他們的結(jié)合順序是：

（D、A、B、E）。其中TFII-D的功能是（與TATA盒結(jié)合）。

22．與DNA結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子大多以二聚體形式起作用，轉(zhuǎn)錄因子與DNA結(jié)合的功能域常見有以下幾種（

螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋）、（鋅指模體）、（堿性-亮氨酸拉鏈模體）。

23．限制性內(nèi)切酶的切割方式有三種類型分別是（在對(duì)稱軸5'側(cè)切割產(chǎn)生5'粘端）、（在對(duì)稱軸3'側(cè)切割產(chǎn)生3'粘端（在對(duì)稱軸處切割產(chǎn)生平段）。

24．質(zhì)粒DNA具有三種不同的構(gòu)型分別是：（

SC構(gòu)型）、（

oc構(gòu)型）、（L構(gòu)型

）。在電泳中最前面的是（SC構(gòu)型）。

25．外源基因表達(dá)系統(tǒng)，主要有（大腸桿菌）、（酵母）、（昆蟲）和（哺乳類細(xì)胞表）。

26．轉(zhuǎn)基因動(dòng)物常用的方法有：（逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法）、（DNA顯微注射法）、（胚胎干細(xì)胞法）。

三、簡(jiǎn)

答

1．

分別說出5種以上RNA的功能？

轉(zhuǎn)運(yùn)RNA

tRNA

轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸

核蛋白體RNA

rRNA

核蛋白體組成成

信使RNA

mRNA

蛋白質(zhì)合成模板

不均一核RNA

hnRNA

成熟mRNA的前體

小核RNA

snRNA

參與hnRNA的剪接

小胞漿RNA

scRNA/7SL-RNA

蛋白質(zhì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位合成的信號(hào)識(shí)別體的組成成分

反義RNA

anRNA/micRNA

對(duì)基因的表達(dá)起調(diào)節(jié)作用

核酶

RibozymeRNA

有酶活性的RNA

2．原核生物與真核生物啟動(dòng)子的主要差別？

原核生物

TTGACA---TATAAT------起始位點(diǎn)

-35

-10

真核生物

增強(qiáng)子---GC---CAAT----TATAA—5mGpp—起始位點(diǎn)

-110

-70

-25

3．對(duì)天然質(zhì)粒的人工構(gòu)建主要表現(xiàn)在哪些方面？

天然質(zhì)粒往往存在著缺陷，因而不適合用作基因工程的載體，必須對(duì)之進(jìn)行改造構(gòu)建：

a、加入合適的選擇標(biāo)記基因，如兩個(gè)以上，易于用作選擇,通常是抗生素基因。

b、增加或減少合適的酶切位點(diǎn)，便于重組。

c、縮短長(zhǎng)度，切去不必要的片段，提高導(dǎo)入效率，增加裝載量。

d、改變復(fù)制子，變嚴(yán)緊為松弛，變少拷貝為多拷貝。

e、根據(jù)基因工程的特殊要求加裝特殊的基因元件

4．舉例說明差示篩選組織特異cDNA的方法？

制備兩種細(xì)胞群體，目的基因在其中一種細(xì)胞中表達(dá)或高表達(dá)，在另一種細(xì)胞中不表達(dá)或低表達(dá)，然后通過雜交對(duì)比找到目的基因。

例如：在腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中，腫瘤細(xì)胞會(huì)呈現(xiàn)與正常細(xì)胞表達(dá)水平不同的mRNA，因此，可以通過差示雜交篩選出與腫瘤相關(guān)的基因。也可利用誘導(dǎo)的方法，篩選出誘導(dǎo)表達(dá)的基因。

5．雜交瘤細(xì)胞系的產(chǎn)生與篩選？

脾B細(xì)胞+骨髓瘤細(xì)胞，加聚乙二醇（PEG）促進(jìn)細(xì)胞融合，HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)（內(nèi)含次黃嘌呤、氨基蝶呤、T）生長(zhǎng)出來的脾B-骨髓瘤融合細(xì)胞繼續(xù)擴(kuò)大培養(yǎng)。

細(xì)胞融合物中包含：

脾-脾融合細(xì)胞：不能生長(zhǎng)，脾細(xì)胞不能體外培養(yǎng)。

骨-骨融合細(xì)胞：不能利用次黃嘌呤，但可通過第二途徑利用葉酸還原酶合成嘌呤。氨基蝶呤對(duì)葉酸還原酶有抑制作用，因此不能生長(zhǎng)。

骨-脾融合細(xì)胞：在HAT中能生長(zhǎng)，脾細(xì)胞可以利用次黃嘌呤，骨細(xì)胞提供細(xì)胞分裂功能。

6、利用雙脫氧末端終止法（Sanger法）測(cè)定DNA一級(jí)結(jié)構(gòu)的原理與方法？

原理是采用核苷酸鏈終止劑—2，，3，-雙脫氧核苷酸終止DNA的延長(zhǎng)。由于它缺少形成3/5/磷酸二脂鍵所需要的3-OH，一旦參入到DNA鏈中，此DNA鏈就不能進(jìn)一步延長(zhǎng)。根據(jù)堿基配對(duì)原則，每當(dāng)DNA聚合酶需要dNMP參入到正常延長(zhǎng)的DNA鏈中時(shí)，就有兩種可能性，一是參入ddNTP,結(jié)果導(dǎo)致脫氧核苷酸鏈延長(zhǎng)的終止；二是參入dNTP,使DNA鏈仍可繼續(xù)延長(zhǎng)，直至參入下一個(gè)ddNTP。根據(jù)這一方法，就可得到一組以ddNTP結(jié)尾的長(zhǎng)短不一的DNA片段。

方法是分成四組分別為ddAMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP反應(yīng)后，聚丙烯酰胺凝膠電泳按泳帶可讀出DNA序列。

7、激活蛋白（CAP）對(duì)轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控作用？

環(huán)腺苷酸（cAMP）受體蛋白CRP（cAMPreceptorprotein），cAMP與CRP結(jié)合后所形成的復(fù)合物稱激活蛋白CAP（cAMPactivatedprotein）。當(dāng)大腸桿菌