實(shí)驗(yàn)二空氣微生物的檢驗(yàn)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握平板沉降法空氣采樣原理及方法；2、掌握空氣中溶血性鏈球菌培養(yǎng)鑒定方法；3、掌握空氣衛(wèi)生狀況，用細(xì)菌總數(shù)以及溶血性鏈球菌總數(shù)多少來(lái)判斷。二、實(shí)驗(yàn)原理與儀器1、空氣中溶血性鏈球菌主要是草綠色鏈球菌（甲型）和溶血性鏈球菌（乙型）數(shù)量的總和，鏈球菌在自然界分布廣泛，常寄居于人類鼻咽腔和腸道內(nèi)。鏈球菌種類很多，有能致病的，也有非致病的，根據(jù)鏈球菌在血平板培養(yǎng)基上得溶血特征，可以分為三類：甲型溶血性鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌、丙型溶血性鏈球菌。室內(nèi)大部分是草綠色和溶血性鏈球菌，寄居于正常人呼吸道，可通過(guò)飛沫播散到周圍空氣中，其數(shù)量與人群密度和空氣污濁度有關(guān)，衛(wèi)生學(xué)意義較大。因此常把草綠色溶血性鏈球菌和溶血性鏈球菌作為空氣衛(wèi)生監(jiān)測(cè)或空氣污染評(píng)價(jià)指標(biāo)。目前國(guó)家規(guī)定的方法是固體撞擊法和自然沉降法。2、自然沉降法原理：根據(jù)空氣中攜帶有微生物氣溶膠粒子在地心引力作用下，以垂直的自然方式沉降到瓊脂培養(yǎng)基上。經(jīng)37℃，24h溫箱培養(yǎng)計(jì)算出菌落數(shù)，應(yīng)以菌落形成單位cfu/皿或cfu/m3來(lái)表示。

1）顯微鏡、培養(yǎng)箱、載玻片、酒精燈、接種環(huán)、滅菌鑷子、離心機(jī)、水溶箱。

2）血瓊脂平板、匹克肉湯、滅菌生理鹽水、革蘭染色液、桿菌肽紙片。3、儀器與器材三、實(shí)驗(yàn)步驟

1、樣品的采集

5個(gè)采樣點(diǎn)，離地面高度為1.5米，東、西、南、北、中各放置一個(gè)平皿，揭開蓋子暴露15min,扣好蓋子。2、培養(yǎng)觀察

36±1℃培養(yǎng)24h。3、菌落形態(tài)觀察及鏡檢血平板：圓形突起，針尖狀，灰白色半透明/不透明，邊緣整齊，表面光滑，周圍有溶血圈（α型和β型溶血）。

鏡檢：G+,鏈狀排列，鏈長(zhǎng)短不一（4-8個(gè)細(xì)胞，20-30個(gè)細(xì)胞）。

β溶血性鏈球菌：血平板上菌落灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直徑約0.5mm~0.75mm，為圓形突起的細(xì)小菌落，周圍有2mm~4mm界限分明，無(wú)色透明的溶血圈。α型溶血（草綠色鏈球菌）：

β溶血平板觀察生化鑒定1、革蘭氏染色，陽(yáng)性，G+鏈狀排列，符合者可做生化鑒定。2、生化鑒定（1）鏈激酶試驗(yàn)（溶纖維蛋白酶試驗(yàn)）吸取草酸鉀血漿0.2mL，加0.8mL滅菌生理鹽水，混勻，再加入鏈球菌18-24h36±1℃肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.5mL及0.25%氯化鈣0.25mL，混勻，置于36±1℃水浴10min,血漿混合物自行凝固，觀察凝塊重新完全溶解的時(shí)間，完全溶解為陽(yáng)性，如24h后不溶解即為陰性。同時(shí)用肉浸液肉湯做陰性對(duì)照，用已知的鏈激酶陽(yáng)性的菌株做陽(yáng)性對(duì)照。（2）桿菌肽敏感試驗(yàn)（藥敏試驗(yàn)）將分純的乙型溶血性鏈球菌接種血平板，在劃線處貼附桿菌肽紙片，36℃，18h，出現(xiàn)抑菌帶為陽(yáng)性，（可推測(cè)為乙型溶血性鏈球菌）。四、實(shí)驗(yàn)報(bào)告根據(jù)培養(yǎng)后的形態(tài)，菌落特征及生化試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行報(bào)告。培養(yǎng)基菌落數(shù)平均菌落數(shù)東西南北中普平血平五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與報(bào)告（1）溶血性鏈球菌是鑒定球菌最常用的項(xiàng)目，也是鑒定過(guò)程中重要的一步。（2）甲型溶血性鏈球菌：血平板菌落周圍部分紅細(xì)胞被破壞，呈現(xiàn)一個(gè)草綠色溶血環(huán)。（3）乙型溶血性鏈球菌：血平板菌落周圍紅細(xì)胞被全部破壞，呈現(xiàn)一個(gè)清楚透明的溶血環(huán)；（4）丙型溶血性鏈球菌：血平板菌落周圍無(wú)紅細(xì)胞溶解，無(wú)溶血環(huán)。（5）鏡檢革蘭陽(yáng)性鏈狀排列球菌，血平板上呈現(xiàn)溶血環(huán)，鏈激酶和桿菌肽敏感試驗(yàn)陽(yáng)性可報(bào)告為溶血性鏈球菌?？諝馕⑸锏男l(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)居室內(nèi)空氣衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)評(píng)價(jià)的參考指標(biāo)（前蘇聯(lián)）夏季標(biāo)準(zhǔn)冬季標(biāo)準(zhǔn)空氣評(píng)價(jià)細(xì)菌總數(shù)（cfu/m3

）綠色和溶血性鏈球菌（cfu/m3

）細(xì)菌總數(shù)（cfu/m3

）綠色和溶血性鏈球菌（cfu/m3

）清潔空氣＜1500＜16＜4500＜36污染空氣＞2500＞36＞7000＞124空氣微生物的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)室內(nèi)空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（GB/T18883-2002