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浙科版選修3
《現(xiàn)代生物科技專題》
問題釋疑基因工程1.限制酶和質(zhì)粒都是只存在與細菌中嗎?不是。不但細菌中存在限制酶和質(zhì)粒,在酵母菌中也有限制酶和質(zhì)粒?;蚬こ涛⑸镏邢拗泼钢圆磺袛嘧陨鞤NA,是因為微生物在長期的進化過程中形成了一套完善的防御機制,對于外源入侵的DNA可以降解掉。微生物在長期演化過程中,含有某種限制酶的細胞,其DNA分子中或者不具備這種限制酶的識別切割序列(類似于人體的凝集原于抗凝集素的關(guān)系),或者通過甲基化酶將甲基轉(zhuǎn)移到所識別序列的堿基〔A、C〕上,使限制酶不能將其切開。這樣,盡管微生物中含有某種限制酶也不會使自身的DNA被切斷,并且可以防止外源DNA的入侵。2.為什么微生物中的限制酶不剪切自身的DNA?基因工程GAATTCCTTAAG3.限制酶所識別的序列有什么特點?限制酶所識別的序列,無論是6個堿基還是4個堿基,都可以找到一條中心軸線,中軸線兩側(cè)的雙鏈DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ重復(fù)排列(回文結(jié)構(gòu))的。EcoRI基因工程4.限制酶的組合使用〔雙酶切〕問題(2023海南生物卷)圖為某種質(zhì)粒表達載體簡圖,小箭頭所指分別為限制性內(nèi)切酶EcoRI〔G↓AATTC〕、BamHI〔G↓GATCC〕的酶切位點,ampR為青霉素抗性基因,tctR為四環(huán)素抗性基因,P為啟動因子,T為終止子,ori為復(fù)制原點。目的基因的兩端分別有包括EcoRI、BamHI在內(nèi)的多種酶的酶切位點?!?〕將含有目的基因的DNA與質(zhì)粒表達載體分別用EcoRI酶切,酶切產(chǎn)物用DNA連接酶進行連接后,其中由兩個DNA片段之間連接形成的產(chǎn)物有、、三種。假設(shè)要從這些連接產(chǎn)物中別離出重組質(zhì)粒,需要對這些連接產(chǎn)物進行別離純化。〔2〕在上述實驗中,為了防止目的基因和質(zhì)粒表達載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接,酶切時應(yīng)選用的酶時。基因工程同一種限制酶→相同限制酶〔P6〕目的基因AATTCGCTTAAG目的基因AATTCGCTTAAG目的基因AATTCGCCTAGG目的基因AATTCGCCTAGG僅用限制酶EcoRI〔G↓AATTC〕切割:限制酶EcoRI〔G↓AATTC〕和BamHI〔G↓GATCC〕聯(lián)合切割:GCTTAAGATCCG質(zhì)粒目的基因AATTCGCCTAGG5.PCR過程中退火〔復(fù)性〕溫度確實定依據(jù)PCR過程中退火〔復(fù)性〕溫度必須根據(jù)引物的堿基數(shù)量和種類來設(shè)定。表1為根據(jù)模板設(shè)計的兩對引物序列,圖2為引物對與模板結(jié)合示意圖。請判斷哪一對引物可采用較高的退火溫度?____。PCR過程包括變性→退火→延伸三個步驟,退火溫度一般低于引物本身變性溫度5℃,一般退火溫度40~60℃之間。而變性所需的加熱溫度取決于引物本身雙鏈DNA中的G+C含量。雙鏈DNA中的G+C的比率越高,那么雙鏈DNA別離變性的溫度也就越高。對表1的引物對A和B比較可知,引物對A的兩條鏈中A、T兩種堿基的比例高,引物對B的兩條鏈中G、C兩種堿基的比例高,所以退火時引物對B的溫度要求較高。基因工程6.雙標記基因問題以下圖a示基因工程中經(jīng)常選用的載體——pBR322質(zhì)粒,Ampr表示氨芐青霉素抗性基因,Tetr表示四環(huán)素抗性基因。目的基因如果插入某抗性基因中,將使該基因失活,而不再具有相應(yīng)的抗性。為了檢查載體是否導(dǎo)入原本沒有Ampr和Tetr的大腸桿菌,將大腸桿菌培養(yǎng)在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上,得到如圖b的結(jié)果〔黑點表示菌落〕。再將滅菌絨布按到圖b的培養(yǎng)基上,使絨布面沾上菌落,然后將絨布平移按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng),得到如圖c的結(jié)果〔空圈表示與b對照無菌落的位置〕。abAmprTetrc基因工程7.目的基因表達的檢測方法怎樣?①檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA②檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)〔2〕常用的技術(shù):①利用DNA-RNA分子雜交看否生成了相應(yīng)mRNA;②用抗原-抗體發(fā)生特異性結(jié)合看是否合成了相應(yīng)的蛋白質(zhì);③從個體水平看是否表現(xiàn)出特定的性狀,如用棉花葉喂蟲,看蟲食用后是否死亡判斷抗蟲基因在棉花植株上的表達。目的基因相應(yīng)的蛋白質(zhì)mRNA翻譯轉(zhuǎn)錄基因工程插入哪一條染色體、插入某一染色體的位置都是隨機的,還有可能破壞正?;虻慕Y(jié)構(gòu)和功能,使受體細胞不能完成某項生命活動甚至死亡。8.目的基因插入動植物細胞基因組的隨機性問題基因工程糖蛋白是蛋白質(zhì)肽鏈上有共價結(jié)合的糖鏈,這些糖鏈是在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上加工完成的。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)存在于真核細胞中,大腸桿菌不存在這種細胞器,因此,由大腸桿菌中生產(chǎn)糖蛋白是不可能的。9.基因工程中為生產(chǎn)糖蛋白,為什么不選大腸桿菌選酵母菌為受體細胞?這就可以解釋基因工程中為何用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素原、而用酵母菌生產(chǎn)干擾素?;蚬こ探滩幕蛑委煹睦又?,以T淋巴細胞為目標細胞導(dǎo)入正常功能的基因,經(jīng)篩選和細胞培養(yǎng)后輸入患者的骨髓組織中,以糾正或補償基因的缺陷,到達治療疾病的目的。這里有同學(xué)疑問:“T淋巴細胞能在細胞培養(yǎng)中會增殖嗎?〞答案是肯定的,T淋巴細胞能在細胞培養(yǎng)中會通過有絲分裂增殖。如在細胞免疫時,當T淋巴細胞接受抗原刺激后,能增殖分化為效應(yīng)T淋巴細胞〔大多數(shù)〕和記憶細胞〔少量〕。10.T細胞能增殖嗎?克隆技術(shù)1.有性生殖與無性生殖的區(qū)別依據(jù)類型種類實例無性生殖斷裂生殖海星、水綿、蚯蚓、渦蟲等分裂生殖細菌、變形蟲等孢子生殖霉菌、苔蘚、蕨類等出芽生殖酵母菌、水螅營養(yǎng)生殖生姜、馬鈴薯、大蒜、甘蔗等有性生殖接合生殖草履蟲單性生殖蜜蜂、蚜蟲等配子生殖生物界中普遍的生殖方式,如卵式生殖克隆技術(shù)①有無生殖細胞的問題:有性生殖不一定產(chǎn)生生殖細胞,如接合生殖;無性生殖不一定無生殖細胞,如孢子生殖中的孢子是無性生殖細胞。②有無兩性生殖細胞的結(jié)合:配子生殖必然經(jīng)歷兩性生殖細胞的結(jié)合成合子,并由合子發(fā)育成新個體;單性生殖中雌雄配子不經(jīng)結(jié)合直接發(fā)育成新個體。③區(qū)別有性生殖與無性生殖的根本依據(jù)是生殖過程中有無經(jīng)歷細胞的減數(shù)分裂。1.有性生殖與無性生殖的區(qū)別依據(jù)克隆技術(shù)2.原生質(zhì)體與原生質(zhì)層的比較出處結(jié)構(gòu)原生質(zhì)層驗證成熟的植物細胞具有滲透作用--質(zhì)壁分離和質(zhì)壁分離復(fù)原實驗細胞膜、液泡膜和夾在兩膜間的細胞質(zhì)原生質(zhì)體植物組織培養(yǎng)和植物細胞工程細胞膜、細胞核和細胞質(zhì)克隆技術(shù)植物組織培養(yǎng)是將離體的植物器官(根、莖、葉、花、果實、種子等)、組織(形成層、花藥組織、胚乳、皮層等)、細胞(體細胞、生殖細胞等)、胚(成熟和未成熟的胚)、胚乳、原生質(zhì)體等,在無菌條件下培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上,給予適宜的培養(yǎng)條件,誘發(fā)產(chǎn)生愈傷組織、胚狀體或不定芽等,再長成完整的植株,統(tǒng)稱為植物組織培養(yǎng)。根據(jù)外植體來源和培養(yǎng)對象的不同,又分為器官培養(yǎng)、組織培養(yǎng)、胚培養(yǎng)、胚乳培養(yǎng)、原生質(zhì)體培養(yǎng)等。植物細胞工程是指借助基因工程的方法,將外DNA導(dǎo)入受體細胞中,或通過細胞融合等方法將不同來源的遺傳物質(zhì)重新組合,再將這些轉(zhuǎn)基因細胞或重組細胞通過細胞培養(yǎng)獲得具有特定性狀的新植株。植物細胞工程意義在于克服了植物遠緣雜交不親和的障礙,為植物育種開辟了新的前景。所以,植物組織培養(yǎng)是植物細胞工程中的一項根本技術(shù)。3.植物組織培養(yǎng)與植物細胞工程的比較克隆技術(shù)很多作物都帶有病毒,尤其是無性繁殖植物,如馬鈴薯、甘薯、草莓、大蒜等。長期的病毒感染并在植物體內(nèi)的積累,使植物的產(chǎn)量和品質(zhì)不斷下降,比方草莓越來越小。植物莖尖或根尖的很少受病毒感染甚至無病毒。利用組織培養(yǎng)方法,取一定大小的莖尖進行培養(yǎng),再生的植株有可能不帶病毒,從而獲得脫病毒苗,再用脫毒苗進行繁殖,種植的作物就不會或極少發(fā)生病毒。目前利用莖尖脫毒技術(shù)組織培養(yǎng)在甘蔗、菠蘿、香蕉、草莓、甘薯、馬鈴薯等主要經(jīng)濟作物上已成功應(yīng)用。脫去病毒的植物不僅恢復(fù)了原來的優(yōu)良種性,而且產(chǎn)量一般比原來提高30%以上。從根本上解決了植物的退化問題。4.植物組織培養(yǎng)在植物脫毒上的應(yīng)用克隆技術(shù)培養(yǎng)細胞均處在不斷分生狀態(tài),容易受培養(yǎng)條件和外界壓力(如射線、化學(xué)物質(zhì)等)的影響而產(chǎn)生誘變,篩選出已誘發(fā)植物的突變體,然后分化成植株。目前用誘發(fā)細胞突變培育方法已篩選到抗病、抗鹽、高賴氨酸、高蛋白、矮稈高產(chǎn)的突變體,有些已用于生產(chǎn)。5.誘發(fā)細胞突變育種問題克隆技術(shù)一種篩選甘薯耐鹽突變體的方法1〕將傳代培養(yǎng)的甘薯胚性懸浮細胞,進行70-100Gy的60Coγ-射線輻照處理,劑量率為1-1.2Gy/分鐘;2〕將處理后的胚性懸浮細胞用液體MS+1.5-2.5mg/L2,4-D+2.0-3.5%NaCl培養(yǎng)3-5周,轉(zhuǎn)至液體MS+1.5-2.5mg/L2,4-D+1.0-2.0%NaCl中培養(yǎng)1-3周,再轉(zhuǎn)至液體MS+1.5-2.5mg/L2,4-D中培養(yǎng);3〕將獲得的細胞團轉(zhuǎn)移到固體MS+1.5-2.5mg/L2,4-D中培養(yǎng);4〕將具有體細胞胚的胚性愈傷組織在固體MS+0.5-2.0mg/LABA+2.0-3.5%NaCl上培養(yǎng)3-5周,轉(zhuǎn)至固體MS+0.5-2.0mg/LABA+1.0-2.0%NaCl上培養(yǎng)1-3周,再轉(zhuǎn)至固體MS+0.5-2.0mg/LABA上培養(yǎng);5〕將再生的小植株培養(yǎng)在MS根本培養(yǎng)基上,使其形成完整的再生植株;6〕將再生植株培養(yǎng)在MS+1.0%-2.0%NaCl上;7〕將成活的植株用含有0.5-1.0%NaCl的霍格蘭溶液水培3-5周,得到甘薯耐鹽突變體。克隆技術(shù)分散成單個細胞后容易培養(yǎng),細胞所需的營養(yǎng)容易供給,其代謝廢物容易排出;而用大塊組織培養(yǎng)時,內(nèi)部細胞的營養(yǎng)供給和代謝廢物的排出都較困難,因此,這些細胞在體外長時間的生存和生長就較困難。同時,分散成單個細胞培養(yǎng),可使得在細胞水平操作的其他技術(shù)得以實現(xiàn)。用酶消化的是細胞間基質(zhì),細胞間基質(zhì)主要成分有膠原蛋白、層粘連蛋白、纖粘連蛋白、彈性蛋白等成分。用胰蛋白酶可使其消化,從而使細胞相互別離。6.為什么動物細胞要分散成單個細胞培養(yǎng)?用酶消化的是什么物質(zhì)?克隆技術(shù)細胞培養(yǎng)過程添加的血清中會含有促進細胞貼壁的因子,細胞在這些貼壁因子的作用下,出現(xiàn)貼壁生長的現(xiàn)象;在動物細胞培養(yǎng)過程中,當貼壁細胞分裂分裂生長到細胞外表相互接觸時,細胞會停止分裂增殖,這種現(xiàn)象稱為細胞的接觸抑制。此時器皿壁上形成單層細胞。但是經(jīng)過無血清馴化后的細胞,會從貼壁生長轉(zhuǎn)到懸浮生長,目前在生物工程制藥領(lǐng)域,趨勢是使用無血清的懸浮培養(yǎng)法為主。細胞不貼壁一樣可以生長。6.細胞的貼壁生長、懸浮生長與接觸抑制克隆技術(shù)原代培養(yǎng):將組織從機體取出后,先用胰蛋白酶處理使組織分散為單個細胞,然后在用細胞懸浮液進行培養(yǎng)的過程。當原代培養(yǎng)到一定時期,細胞會因為密度過大和代謝消耗引起營養(yǎng)枯竭,有害代謝產(chǎn)物積累,導(dǎo)致細胞不能正常生長;貼壁生長的話還會出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象,所以需要進行傳代培養(yǎng)。傳代培養(yǎng):將原代細胞從培養(yǎng)瓶中取出,配制成細胞懸浮液,分裝到兩個或兩個以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),稱為傳代培養(yǎng)。所以,分瓶前的培養(yǎng)是原代培養(yǎng),分瓶后的培養(yǎng)為傳代培養(yǎng)。7.原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的比較克隆技術(shù)細胞系:原代培養(yǎng)物開始第一次傳代培養(yǎng)后的細胞稱之為細胞系。其中,能夠連續(xù)傳代的細胞叫做連續(xù)細胞系或無限細胞系,不能連續(xù)培養(yǎng)的細胞稱為有限細胞系。大多數(shù)二倍體細胞為有限細胞系。無限細胞本質(zhì)上已是發(fā)生轉(zhuǎn)化〔遺傳物質(zhì)改變〕的細胞系,如腫瘤細胞。細胞株:用單細胞別離法或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群,稱細胞株。細胞株的特殊性質(zhì)或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。8.細胞系和細胞株克隆技術(shù)不能。因為:①細胞質(zhì)中線粒體DNA對機體某些重要的遺傳特性起重要作用;②個體的性狀受環(huán)境條件的影響;③在胚胎發(fā)育過程中發(fā)生了基因突變。9.克隆技術(shù)能克隆出完全一樣的動物嗎?為什么?克隆技術(shù)不會。因為:①克隆前要選擇優(yōu)良的供體和受體,可以推動瀕危動物向更有利的方向變異;②克隆出來的動物同樣也可以進行有性繁殖,這樣克隆和有性繁殖交替進行,并不會阻礙遺傳多樣性的開展。10.用克隆來拯救和保護瀕危動物會不會影響遺傳多樣性?胚胎工程胚胎工程是將雌性動物的早期胚胎,或者通過其他方式得到的胚胎,移植到同種的、生理狀態(tài)相同的其他雌性動物的體內(nèi),使之發(fā)育為新個體的技術(shù)。胚胎工程中需要用到的技術(shù)手段有體外受精、胚胎體外培養(yǎng)、胚胎移植等。1.胚胎工程和相應(yīng)的技術(shù)手段胚胎工程剛排出的卵子尚未完全成熟,僅完成第一次減數(shù)分裂,需要在輸卵管內(nèi)進一步成熟,直到減數(shù)第二次分裂的中期才能與精子結(jié)合完成減數(shù)分裂。所以在胚胎工程的體外受精中有卵細胞的采集和培養(yǎng)環(huán)節(jié)。2.剛排出的卵是成熟的卵子嗎?胚胎工程體內(nèi)受精過程中精子是在雌性動物的生殖道發(fā)生相應(yīng)的生理變化后,才獲得受精能力。胚胎工程的體外受精中精子獲能的方法有培養(yǎng)法和化學(xué)誘導(dǎo)法,牛、羊的精子常用化學(xué)藥物誘導(dǎo)獲能,誘導(dǎo)獲能的藥物常用肝素和鈣離子載體。3.精子獲能問題胚胎工程受精卵→卵裂球→(桑椹胚)→囊胚→原腸胚→三胚層分化為各種組織和器官→從卵膜孵出的幼體或從母體產(chǎn)出的幼體。4.胚胎發(fā)育的過程?胚胎工程供體母本要選擇具有優(yōu)良遺傳性狀的個體;受體母本要選擇健康和正常繁殖能力的個體;受體母本與供體母本需要同一物種是為了使移植的胚胎在受體子宮中不發(fā)生免疫排斥。處理供體母本是為了超數(shù)排卵,采集卵細胞;對受體母畜進行注射促性腺激素的同期發(fā)情處理,是為了使受體和供體的生理狀態(tài)相同,這樣才能使供體的胚胎移入受體后有相同或相似的生存條件,能夠正常發(fā)育。
5.供體母本、受體母本的選擇和處理問題促性腺激素可以促進雌性激素的分泌和卵細胞的生成。如果大量注射雌性激素,就會通過負反響調(diào)節(jié)影響到下丘腦、垂體和卵巢的分泌功能,對身體健康造成了嚴重的危害。胚胎工程6.為什么對供體母牛和受體母牛同期發(fā)情處理的方法是注射促性腺激素而不是雌性激素?胚胎工程內(nèi)細胞團是囊胚階段才出現(xiàn),它是發(fā)育為胚胎本身的根底細胞,其他細胞為滋養(yǎng)細胞,只為胚胎和胎兒發(fā)育提供營養(yǎng)。假設(shè)分割時不能將內(nèi)細胞團均等分割,會出現(xiàn)含內(nèi)細胞團多的局部正常發(fā)育的能力強,少的局部發(fā)育受阻或發(fā)育不良,甚至不能發(fā)育等問題。7.對囊胚階段的胚胎進行分割時,為什么要將內(nèi)細胞團均等分割?生物技術(shù)的平安性a.外源基因插入宿主基因組的局部往往是隨機的,可能破壞正?;虻慕Y(jié)構(gòu)。如:(2023江蘇卷)如果將外源基因?qū)胄∈笫芫眩敲赐庠椿蚩赡茈S機插入到小鼠受精卵DNA中。這種受精卵有的可發(fā)育成轉(zhuǎn)基因小鼠,有的卻死亡。請分析因外源基因插入導(dǎo)致受精卵死亡的最可能原因是。b.基因間存在相互作用的關(guān)系,外源基因引入后,是否會影響其他重要的調(diào)節(jié)基因,甚至?xí)せ钤┗??c.轉(zhuǎn)基因生物可能威脅生態(tài)系統(tǒng)中其他生物的生存,使生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性發(fā)生改變。d.轉(zhuǎn)基因技術(shù)廣泛應(yīng)用是可能產(chǎn)生“超級生物〞,導(dǎo)致難以消滅的新病原體出現(xiàn)、產(chǎn)生生物入侵等造成生態(tài)學(xué)災(zāi)難。e.人類攝食大量轉(zhuǎn)基因食品可能對有些人產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因食品過敏。1.對轉(zhuǎn)基因生物平安性的擔(dān)憂生物技術(shù)的平安性〔1〕反對進行克隆人的理由:①克隆人嚴重違反了人類倫理道德;②克隆人沖擊了現(xiàn)有的婚姻家庭和兩性關(guān)系等傳統(tǒng)的倫理道德觀念;③克隆人是制造在心理上和社會地位上都不健全的人;④克隆技術(shù)尚不成熟?!?〕贊成進行克隆人的理由:①技術(shù)問題可以通過胚胎分割,基因診斷和染色體檢查等方法得到解決;②克隆人是一項科學(xué)研究,既然是科學(xué),就應(yīng)該允許研究克隆人。〔3〕中國政府的態(tài)度:禁止生殖性克隆人,支持治療性克隆。2.克隆技術(shù)引發(fā)的倫理問題生物技術(shù)的平安性基因檢測是從血液或從其他體液和細胞檢測一個人的DNA的技術(shù)。通過基因檢測能有效檢測遺傳病;早期診斷可使患者得到及時治療;也可以用于疾病風(fēng)險的預(yù)測。目前已經(jīng)有20多種疾病可以用基因檢測的方法預(yù)測。具體的方法有:特殊標記物的突變基因探針方法、酶切方法和基因序列檢測的方法等。基因檢測引發(fā)的問題有:①目前人類對基因結(jié)構(gòu)及基因間相互作用尚缺乏足夠的認識,要想通過基因檢測到達預(yù)防疾病的目的是困難的;②基因檢測結(jié)果本身會給受檢者帶來巨大的心理壓力;③個人基因資訊的泄露會造成基因歧視。3.基因檢測及其引發(fā)的問題生態(tài)工程間作:在一塊地上,同時期按一定行數(shù)的比例間隔種植兩種以上的作物,這種栽培方式叫間種。間種的兩種生物共同生長期長。間種往往是高棵作物與矮棵作物間種,其中高作物行數(shù)越少,矮作物的行數(shù)越多,間種效果越好。套作:在前季作物生長后期的株
、
行或畦間播種或栽植后季作物的種植方式。套作的兩種或兩種以上作物的共同生長期只占生育期的一小局部時間,是一種解決前后季作物間季節(jié)矛盾的復(fù)種方式
。套作的主要作用是爭取時間以提高光能和土地的利用率;提高單位面積產(chǎn)量;有利后季作物適時播種;緩和用工矛盾和防止旱澇或低溫災(zāi)害。輪作:在同一塊田地上有順序地在季節(jié)間和年度間輪換種植不同作物的種植方式。有利于均衡利用土壤養(yǎng)分和防治病、蟲、草害;能有效地改善土壤的理化性狀,調(diào)節(jié)土壤肥力。從總體上看,間作、套種和輪作的核心區(qū)別是同一塊土地上不同作物有無共同生長期及其共同生長期的長短,間作、套種和輪作是充分利用光照和土地資源等的措施。1.間作、套種和輪作的比較生態(tài)工程2.物質(zhì)的良性循環(huán)使流向分解者的能量,有一局部可以食物中化學(xué)能的形式被人類再度利用,充分利用了廢棄物中的能量,實現(xiàn)了能量的多級利用。作物蚯蚓食用菌家畜太陽輻射秸稈發(fā)酵飼料糞、屑菌床絮屑產(chǎn)品輸出排泄物雜屑產(chǎn)品輸出產(chǎn)品輸出種子果實作物秸稈的多層分級利用接種接
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