神秘果提取物對(duì)糖尿病大鼠的影響

神秘果提取物對(duì)糖尿病大鼠的影響

神圣的水果，也被稱為夢(mèng)想水果和奇跡水果，以其對(duì)水果的特定和破壞而聞名。在我國(guó)臺(tái)灣省以及非洲等其他熱帶地區(qū)(如西非)，神秘果可用作食品、醫(yī)藥及化妝品等行業(yè)的增甜劑、助食劑、食品色素、化妝品成分等。近年來(lái)，由于神秘果在臺(tái)灣的大量種植，對(duì)其提取物的研究也進(jìn)一步深入，初步證明了神秘果提取物(extractofmiraclefruit,MFE)具有很強(qiáng)的抗氧化能力，而且與黃酮類化合物具有相似的性質(zhì)。研究表明，神秘果素除了味覺(jué)改變功能外，還可改善糖尿病動(dòng)物對(duì)胰島素的敏感性。這一特性又增加了這種神奇水果的神秘性，其營(yíng)養(yǎng)保健作用日益受到關(guān)注。糖尿病是由于胰島素分泌缺陷、胰島素作用缺陷或二者共同導(dǎo)致的以慢性高血糖為特征的一組代謝性疾病，表現(xiàn)為糖、脂、蛋白代謝紊亂。目前我國(guó)糖尿病發(fā)病率高，西藥仍是治療糖尿病的主要藥物。由于化學(xué)藥物的毒副作用和高昂的醫(yī)療費(fèi)用，從天然產(chǎn)物中篩選和發(fā)現(xiàn)降血糖活性成分已引起了國(guó)內(nèi)外醫(yī)藥工作者的廣泛關(guān)注。基于MFE的強(qiáng)抗氧化特性，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)誘導(dǎo)雄性Wistar大鼠2型糖尿病模型來(lái)探討MFE的降糖作用，為神秘果的開(kāi)發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)藥物MFE(沈陽(yáng)藥科大學(xué)天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供);二甲雙胍(Metformin，上海信誼藥廠有限公司，批號(hào):091108)。1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：scxk軍Wistar大鼠，體質(zhì)量180～220g，雄性，由沈陽(yáng)藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(軍)2007-004。飼養(yǎng)于標(biāo)準(zhǔn)化動(dòng)物房，適應(yīng)環(huán)境1周，自由攝食(標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料)飲水。1.3血糖、糖化血紅蛋白STZ(Sigma公司，批號(hào):1000689983)，血糖(FBG/GLU)診斷試劑盒(北京北化康泰臨床試劑有限公司)，糖化血紅蛋白(GHb)測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所、南京建成科技有限公司)，其他試劑均為分析純。1.4儀器SynergyHT型多功能酶標(biāo)儀(BioTek基因有限公司);HC-3018R型高速冷凍離心機(jī)(科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司)。1.5方法1.5.1模型的成功及給藥取Wistar大鼠90只，隨機(jī)挑選10只作為正常組(即空白對(duì)照組)，其他大鼠禁食不禁水12h后，快速腹腔注射(ip)STZ的檸檬酸緩沖液55mg/kg(pH=4.2～4.5)。注射5d后取血測(cè)空腹血糖(FBG)，按照2型糖尿病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，留取FBG>11.1mmol/L(200mg/dL)的大鼠確定為模型成功，用于隨后的試驗(yàn)中。1.5.2MFE對(duì)STZ致糖尿病大鼠體質(zhì)量、血糖的影響將糖尿病大鼠按照血糖值分布(同時(shí)兼顧體質(zhì)量大小)分成5組，即模型組、陽(yáng)性藥組(二甲雙胍0.13g/kg)、MFE給藥組(MFE-H0.10g/kg,MFE-M0.05g/kg,MFE-L0.025g/kg)，每組各10只。各給藥組灌胃給藥(ig)相應(yīng)藥物，每天1次，共35d;空白組及模型組每天給予相同容積的溶媒。實(shí)驗(yàn)期間注意觀察動(dòng)物的狀態(tài)，每10d測(cè)定飲水量、飲食量、體質(zhì)量及FBG。1.5.3水合氯醛含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)前將全部大鼠禁食不禁水12h,ip10%(φ)水合氯醛(400mg/kg)麻醉，腹主動(dòng)脈采血，測(cè)定GHb含量，測(cè)定方法按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行(以A值表示GHb含量)。1.6整體性比較采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)用(x珋±s)表示，正態(tài)分布采用One-WayANOVA評(píng)價(jià)整體性差異，方差齊性用LSDt-test分析方法進(jìn)行組間比較，方差不齊用Dunnett’sT3分析方法進(jìn)行組間比較，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1mfe對(duì)大鼠一般情況的影響注射STZ誘導(dǎo)糖尿病后，大鼠逐漸出現(xiàn)多飲、多食、多尿等典型的糖尿病表現(xiàn)。模型組大鼠的毛色呈黃色、無(wú)光澤、精神萎靡、少活動(dòng)、背呈弓形;而各給藥組的大鼠毛色較白、精神狀態(tài)基本正常、較活潑。與模型組比較，各MFE給藥組大鼠的飲食量、飲水量和尿量有減少，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(數(shù)據(jù)未列出)。提示MFE對(duì)糖尿病大鼠的身體狀態(tài)有一定的調(diào)節(jié)作用。2.2mfe對(duì)大鼠體質(zhì)量的影響本實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物分組的原則是同時(shí)兼顧血糖和體質(zhì)量的大小，所以使得分組后各組動(dòng)物的體質(zhì)量稍有差別，但并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)期間，正常組大鼠的體質(zhì)量有緩慢上升的趨勢(shì)，所有經(jīng)STZ造模形成糖尿病的大鼠體質(zhì)量均有不同程度的降低，其中模型組大鼠的體質(zhì)量下降最多，與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);各給藥組相對(duì)于模型組大鼠體質(zhì)量下降程度有所減輕，其中MFE-L劑量組(0.025g/kg)在第11天和第31天表現(xiàn)出顯著性影響(P<0.05)，說(shuō)明MFE可緩解糖尿病大鼠體質(zhì)量減輕的程度。結(jié)果見(jiàn)表1。2.3mfe-m0.0.0g/ml對(duì)大鼠降血糖作用的影響與模型組比較，MFE-H0.10g/kg劑量組在第15、25、35天均表現(xiàn)出顯著的降血糖作用(P<0.05或P<0.01)，同時(shí)MFE-M0.05g/kg劑量組在第25、35天也表現(xiàn)出有效的降糖作用(P<0.01)，MFE-L0.025g/kg劑量組也有一定的降糖作用，但影響不顯著。結(jié)果見(jiàn)表2。2.4mfe對(duì)大鼠ghb的影響與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠的GHb含量顯著增加，MFE各劑量組均可以減少糖尿病大鼠GHb的含量，其中MFE0.10、0.05g/kg2個(gè)劑量組對(duì)此指標(biāo)有顯著性影響(P<0.05或P<0.01)。見(jiàn)表3。3改善血糖水平的意義鏈脲佐菌素對(duì)胰島β細(xì)胞有選擇性破壞作用，能誘發(fā)產(chǎn)生持續(xù)性的高血糖，造成糖尿病模型，并伴有多飲、多食、多尿和消瘦的癥狀。因其對(duì)組織毒性小，動(dòng)物存活率高，成為目前國(guó)內(nèi)外使用較多的制備糖尿病動(dòng)物模型的方法之一。實(shí)驗(yàn)表明，MFE對(duì)糖尿病大鼠的“三多”癥狀有一定改善作用，同時(shí)對(duì)模型大鼠體質(zhì)量的減輕也有一定的延緩作用。FBG是糖尿病監(jiān)測(cè)的常規(guī)指標(biāo)，代表胰島β細(xì)胞基礎(chǔ)胰島素分泌能力和藥物的遠(yuǎn)程療效。因此，定時(shí)測(cè)定空腹血糖可以幫助了解藥物對(duì)血糖的控制情況。然而單測(cè)血糖值不能夠完全說(shuō)明之前一段時(shí)間內(nèi)的病情的概況。GHb指的是紅細(xì)胞的血紅蛋白與血中葡萄糖相結(jié)合，也就是血紅蛋白中糖基化部分，其水平的升高與糖尿病大血管及微血管并發(fā)癥的出現(xiàn)有密切關(guān)系。GHb水平的測(cè)定已成為公認(rèn)的評(píng)價(jià)長(zhǎng)期血糖控制水平的檢測(cè)手段。根據(jù)白蛋白的半衰期(2周)和紅細(xì)胞的壽命(2～3月)，GHb含量可反映近1～3月的血糖水平，其含量測(cè)定不受血糖暫時(shí)波動(dòng)的影響。從實(shí)驗(yàn)可以看出，MFE能減小血糖的波動(dòng)，穩(wěn)定地發(fā)揮降低血糖的作用，對(duì)防止各種慢性并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展有一定的意義。2型糖尿病主要為胰島素抵抗(insulinresisitance,IR)引起機(jī)體胰島素敏感性降低導(dǎo)致高血糖。研究報(bào)道，IR的產(chǎn)生涉及氧化應(yīng)激途徑。神秘果是一種富含維生素C的高堿性的保健水果，其中維生素C含量達(dá)到40.38mg/100g。神秘果提取物對(duì)DPPH·自由基具有極強(qiáng)的清除力，對(duì)亞油酸氧化產(chǎn)生的過(guò)氧化物的清除作用