低聚果糖調(diào)節(jié)人體腸道菌群功能的研究

低聚果糖調(diào)節(jié)人體腸道菌群功能的研究

低聚葡萄糖（fos）作為一種益生元，可以促進(jìn)雙叉菌的生長(zhǎng)，其功能已得到廣泛認(rèn)可。但國(guó)內(nèi)對(duì)于其人體功能性的研究尚不多見(jiàn),張帆等研究了人體連續(xù)試食20mL含量為55%的低聚果糖具有顯著的促進(jìn)腸道雙歧桿菌和乳桿菌的增殖并抑制有害菌的功效。然而,低聚果糖在較低劑量時(shí)的功效作用如何尚不可知。為此,該文采用衛(wèi)生部《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》中調(diào)節(jié)腸道菌群功能的檢驗(yàn)方法,評(píng)價(jià)每日試食6mL含量為55%的低聚果糖對(duì)人體腸道菌群的影響,以期為產(chǎn)品配方設(shè)計(jì)中低聚果糖的添加量提供一定的參考依據(jù)。1材料和方法1.1試驗(yàn)對(duì)象的樣品OLIGOTM低聚果糖60L(由江門(mén)量子高科生物工程有限公司提供)。常溫、陰涼干燥處保存,保存期12個(gè)月,供試驗(yàn)用。1.2試驗(yàn)對(duì)象和組成1.2.1標(biāo)準(zhǔn)中包含的基準(zhǔn)一個(gè)月內(nèi)未患過(guò)胃腸疾病者、一個(gè)月內(nèi)未服用過(guò)抗生素者。1.2.2年齡及不良反應(yīng)合并有心腦血管、消化道、肝、腎等嚴(yán)重疾病及內(nèi)分泌疾病,精神病患者;年齡在65歲以上者,妊娠或哺乳期婦女,過(guò)敏體質(zhì)及對(duì)本保健食品過(guò)敏者;停服受試樣品或中途加服其它藥物,無(wú)法判斷功效或資料不全者;短期內(nèi)服用與受試功能有關(guān)的物品,影響到對(duì)結(jié)果的判斷者。1.2.3腸道菌群的檢測(cè)采用自身和組間兩種對(duì)照設(shè)計(jì)。120例健康試食者,隨機(jī)分為2組,每組各60例,試食組每日服用低聚果糖一袋(6mL/袋),對(duì)照組服用果葡糖漿一袋(6mL/袋),2組均停用其他益生菌制劑。不改變?cè)瓉?lái)的飲食習(xí)慣。受試樣品給予時(shí)間30h。試食組受試物前和試驗(yàn)結(jié)束24h后,無(wú)菌采取受試者糞便進(jìn)行培養(yǎng),檢驗(yàn)?zāi)c道6種菌群的變化。篩除20不合格受試對(duì)象,共有試驗(yàn)組、對(duì)照組各50人,病例脫離率16.67%。1.3儀器、試藥與儀器MEK-6318型血球計(jì)數(shù)儀(日本光電工業(yè)株式會(huì)社),MID-IRON尿十項(xiàng)分析儀(德國(guó)),H-500熒光分光光度計(jì)(日本島津公司),日立7600全自動(dòng)生化分析儀(日本日立公司),Heraeus細(xì)菌培養(yǎng)箱(德國(guó)Heraeus公司),Heraeus厭氧菌培養(yǎng)箱(德國(guó)Heraeus公司),BX61顯微鏡(日本Olympus公司);TH-CB-402超凈臺(tái)(美國(guó)LABCONCO公司),電子天平(瑞士梅特勒托利多有限公司)。1.4觀察指標(biāo)1.4.1安全指數(shù)1.4.2療效指標(biāo)1.4.2.1癥狀觀察詳細(xì)詢(xún)問(wèn)病史,觀察主要臨床癥狀:食欲不振、體倦、眩暈、心慌氣短等。1.4.2.2.療效指標(biāo)雙歧桿菌、乳酸桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、腸桿菌、腸球菌和擬桿菌。1.4.2.菌體稀釋液的稀釋和澆注培養(yǎng)收集受試者1.5h以?xún)?nèi)的新鮮糞便于便盒中,立即送檢。稱(chēng)取lg糞便標(biāo)本置于帶玻璃珠的干燥滅菌試管中,加滅菌稀釋液,10倍稀釋,震蕩1分鐘,再依次進(jìn)行10倍梯度稀釋,選擇合適的稀釋度,分別吸取0.1mL的菌體稀釋液并用各自選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行澆注并培養(yǎng),見(jiàn)表1。培養(yǎng)基組成按《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003版)中功能學(xué)評(píng)價(jià)檢驗(yàn)方法之調(diào)節(jié)腸道菌群功能檢驗(yàn)方法提供的培養(yǎng)基配方。1.5評(píng)估數(shù)據(jù)和結(jié)果1.5.1轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)時(shí)正態(tài)方差齊性檢驗(yàn)采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS12.0計(jì)算分析數(shù)據(jù)。凡自身對(duì)照資料采用配對(duì)t檢驗(yàn),兩組均數(shù)比較采用成組t檢驗(yàn),后者需進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn),對(duì)非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換,待滿(mǎn)足正態(tài)方差齊性后,用轉(zhuǎn)換的數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn);若轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)仍不能滿(mǎn)足正態(tài)方差齊性要求,改用t’檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn);但變異系數(shù)太大(如CV大于50%)的資料應(yīng)用秩和檢驗(yàn)。功效指標(biāo)用X2檢驗(yàn)。1.5.2受試樣品試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性的判定比較試驗(yàn)前后自身及組間雙歧桿菌、乳酸桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、腸球菌、腸桿菌和擬桿菌的變化情況,試驗(yàn)組試驗(yàn)前后自身比較差異有顯著性,或試驗(yàn)后試驗(yàn)組與對(duì)照組組間比較差異有顯著性、且試驗(yàn)組試驗(yàn)前后自身比較差異有顯著性,符合以下任1項(xiàng),可以判定該受試樣品試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。(1)雙歧桿菌和/或乳桿菌(或其他益生菌)明顯增加,梭菌減少或無(wú)明顯變化,腸桿菌、腸球菌、擬桿菌無(wú)明顯變化;(2)雙歧桿菌和/或乳桿菌(或其他益生菌)明顯增加,梭菌減少或無(wú)明顯變化,腸桿菌和/或腸球菌、擬桿菌明顯增加,但增加的幅度低于雙歧桿菌、乳桿菌(或其他益生菌)增加的幅度。2結(jié)果與討論2.1兩組年齡、性別、年齡分布情況共觀察100例。低聚果糖組50例,男女性分別為23例和27例,年齡20~60歲,平均年齡(42.9±8.5)歲;對(duì)照組50例,男女性分別為14例和36例,年齡20~61歲,平均年齡(40.8±9.1)歲。試驗(yàn)前后,兩組部分安全性指標(biāo)結(jié)果見(jiàn)表2和表3。試食組與對(duì)照組試驗(yàn)前后精神、睡眠、飲食、大小便正常(數(shù)據(jù)未給出);血壓、心率基本正常且無(wú)明顯變化(見(jiàn)表2);血、尿、便常規(guī)檢查及肝、腎功能檢查基本正常且無(wú)明顯變化(見(jiàn)表3);腹部B超,心電圖,X線胸部透視基本正常(數(shù)據(jù)未給出)。服用受試物后,部分受試者的排便狀況有所改善,無(wú)其他不良反應(yīng)。說(shuō)明兩組具有可比性,受試樣品對(duì)受試者無(wú)不良影響。2.2果葡糖漿對(duì)人體腸道菌群的影響由表4可見(jiàn),與試驗(yàn)前相比,試食組試驗(yàn)后自身比較糞便中雙歧桿菌明顯增加5.8%(P<0.01),乳桿菌增加0.4%(P>0.05);產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量明顯減少8.6%(P<0.01);腸桿菌和腸球菌分別增加0.4%(P<0.05)和0.8%(P<0.05),擬桿菌明顯增加1.0%(P<0.01),但腸桿菌、腸球菌和擬桿菌增加的幅度明顯低于雙歧桿菌增加的幅度。試驗(yàn)組試驗(yàn)前后自身比較差異性說(shuō)明攝食含量不小于55%的低聚果糖6mL對(duì)人體腸道菌群調(diào)節(jié)結(jié)果呈陽(yáng)性。對(duì)照組試驗(yàn)前后各菌無(wú)顯著性差異(P>0.05)。說(shuō)明果葡糖漿對(duì)人體腸道菌群調(diào)節(jié)結(jié)果呈陰性。由表5可見(jiàn),與對(duì)照組相比,試驗(yàn)前試食組各種菌均無(wú)顯著性差異(P>0.05),表明試食組與對(duì)照組具有可比性;試驗(yàn)后試食組雙歧桿菌增加4.2%,且有顯著性差異(P<0.01);產(chǎn)氣莢膜梭菌減少7.2%(P<0.01),而乳桿菌、腸桿菌、腸球菌和擬桿菌均未發(fā)生顯著變化(P>0.05)。試驗(yàn)后試驗(yàn)組與對(duì)照組組間比較的差異性,說(shuō)明攝食含量不小于55%的低聚果糖6mL對(duì)人體腸道菌群調(diào)節(jié)結(jié)果呈陽(yáng)性。3試驗(yàn)前后人體腸道菌群變化情況與對(duì)照組相比,試驗(yàn)前試食組各種菌均無(wú)顯著性差異(P>0.05),表明試食組與對(duì)照組具有可比性;試驗(yàn)后試食組雙歧桿菌增加4.2%,且有顯著性差異(P<0.01);產(chǎn)氣莢膜梭菌減少了7.2%(P<0.01),而乳桿菌腸桿菌、腸球菌和擬桿菌均未發(fā)生顯著變化(P>0.05)。與試驗(yàn)前相比,試食組試驗(yàn)后糞便中雙歧桿菌增加5.8%(P<0.01),乳桿菌增加0.4%(P>0.05);產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量減少8.6%(P<0.01);腸桿菌和腸球菌分別增加了0.4%(P<0.05)和0.80%(P<0.05),擬桿菌明顯增加了1.0%(P<0.01),但腸桿菌、腸球菌和擬桿菌增加的幅度明顯低于雙歧桿菌增加的幅度。而對(duì)照組試驗(yàn)前后各菌無(wú)顯著性差異(P>0.05)。通過(guò)試驗(yàn)組試驗(yàn)前后人體腸道菌群自身比較差異性以及試驗(yàn)后試驗(yàn)組與對(duì)照組組間比較的差異性分析,表明每日攝食3.3g的低聚果糖亦具有調(diào)節(jié)人體腸道菌群,激活人體益生菌增殖并抑制有害菌的作用。試食低聚果糖前后,未觀察到過(guò)敏及其他不良反應(yīng);人體血紅蛋白、紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、血、尿、便常規(guī)、心率及血壓等基本在正常范圍,說(shuō)明本品對(duì)試食者健康無(wú)不良影響。1.4.1.1一般狀況:包括精神、睡眠、飲食、大小便、血壓和心率等。