紅景天復(fù)方對小鼠免疫、耐缺氧和抗疲勞作用的研究

紅景天復(fù)方對小鼠免疫、耐缺氧和抗疲勞作用的研究

紅色景天是景田科的一種珍貴藥物。在《本草綱目草部》第20卷中，紅景天被稱為“草本優(yōu)秀”，具有糾正正氣、補氣養(yǎng)血的功效。目前在抗疲勞領(lǐng)域?qū)ζ淇蛊跈C制已進行深入研究,普遍認(rèn)為紅景天能夠通過調(diào)節(jié)機體能量消耗、代謝的紊亂、中樞神經(jīng)系統(tǒng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)的功能失調(diào),起到抗疲勞的作用。有關(guān)其中藥配方制劑及單體成分促進機體恢復(fù)的作用亦有研究報道。通過測量小鼠負(fù)重游泳持續(xù)時間、爬竿時間及耐缺氧時間,觀察紅景天復(fù)方對小鼠抗疲勞作用和缺氧耐受能力的影響,通過測定胸腺、脾臟指數(shù)、吞噬細(xì)胞吞噬指數(shù)來觀察紅景天復(fù)方對小鼠免疫器官及其功能的影響,現(xiàn)將實驗方法及結(jié)果報道如下。1材料和方法1.1材料表面1.1.1驗動物中心提供健康清潔級昆明種小鼠160只(湘雅醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供,湘醫(yī)動字第01號),6周齡,體質(zhì)量(22.1±2.7)g,雌雄各半。由湖南中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供的鼠顆粒飼料。1.1.2醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院紅景天復(fù)方由紅景天、炙黃芪、鎖陽等5味藥物組成,購自湖南省中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院(煎成每毫升藥液含生藥0.75g);萬基牌西洋參膠囊由深圳萬基藥業(yè)有限公司生產(chǎn),生產(chǎn)批號20060521,規(guī)格0.6g/粒,成人每日最高劑量0.04g/kg。1.1.3試劑印度墨汁(上海長江日用粘合材料廠)、鈉石灰(上海五四化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn),批號040920)。1.2方法1.2.1紅景天復(fù)方對成人用藥的影響將小鼠隨機分為生理鹽水組(NS)、西洋參陽性對照組(PG)、紅景天復(fù)方低劑量組(LR)、紅景天復(fù)方高劑量組(HR)4組,每組10只。西洋參陽性對照組,根據(jù)人與動物用藥劑量換算標(biāo)準(zhǔn)換算后每日灌胃成人等量西洋參(0.36g/kg);紅景天復(fù)方低劑量組與成人每日用藥等效劑量(11.26g/kg);紅景天復(fù)方高劑量組為成人每日用藥等效劑量的3倍(33.79g/kg);生理鹽水組灌胃生理鹽水15mL/kg。每日灌胃1次,用藥4周。1.2.2小鼠的適應(yīng)性訓(xùn)練方案爬竿架及其規(guī)格為:直徑0.7cm,長120cm的玻璃棒,上端垂直固定于爬竿架上,下端懸空,距地面約40cm。小鼠均從第1周開始予以適應(yīng)性訓(xùn)練,每周3次,每次5min。經(jīng)4周適應(yīng)性訓(xùn)練后,無運動功能異常的小鼠進入測試實驗。各組小鼠在末次灌胃30min后,置于已設(shè)置好的爬竿下段,記錄從放置開始至小鼠因疲勞無力從上端滑落的時間,為小鼠爬竿時間。連續(xù)滑落3次后將時間累加即為最終爬竿時間。1.2.3同池游泳實驗小鼠游泳池選用大小為80cm×60cm×60cm的玻璃水槽,訓(xùn)練時注水深約40cm,水溫(22±1)℃,各實驗組小鼠置于水中同池游泳且不互相接觸,均從第1周開始予以適應(yīng)性訓(xùn)練(每周3次游泳),每次游泳20min。各組小鼠末次灌胃30min后,將小鼠放入水槽內(nèi)進行游泳實驗,每鼠尾部負(fù)重為體重的4%,記錄每只小鼠游泳持續(xù)時間。小鼠游泳時間:小鼠置于水中后立即計時,當(dāng)小鼠頭部沉入水面10s不能浮出,即刻計時為小鼠游泳時間(min)。1.2.4耐氧化時間測定各組小鼠末次灌胃30min后,將其放入容積為600mL盛有10g鈉石灰(以吸收CO2和水分)的廣口瓶中,塞緊瓶蓋,用凡士林封口,不漏氣后,立即計時,以呼吸停止為指標(biāo),觀察并記錄小鼠存活時間為小鼠耐缺氧時間。1.2.5廓清指數(shù)k、肝脾質(zhì)量算定各組小鼠末次灌胃30min后,于小鼠尾靜脈注射印度墨汁0.1mL/10g體質(zhì)量(生理鹽水按5∶1稀釋),于注射后2min、12min,分別從眼眶后靜脈叢取血,計算廓清指數(shù)k,經(jīng)體質(zhì)量及肝脾質(zhì)量換算后,求出吞噬指數(shù)。取胸腺及脾臟,稱其質(zhì)量并分別計算其與體重比值,為相應(yīng)小鼠免疫器官指數(shù)。1.2.6兩組差異比較采用SPSS12.0統(tǒng)計軟件進行分析,各組數(shù)據(jù)分別以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差“x±s”表示,組間差異比較用單因素方差分析,差異有統(tǒng)計學(xué)意義時再用最小顯著差值法(LSD)進行兩兩比較。2結(jié)果2.1一般情況下大鼠實驗期間,生理鹽水組和西洋參組小鼠飲食情況良好,紅景天復(fù)方高、低劑量組飲食好,毛發(fā)光澤,體格較強悍,動作敏捷。2.2對實踐地層長值的影響對負(fù)重游泳持續(xù)時間的影響:紅景天復(fù)方高、低劑量組負(fù)重游泳持續(xù)時間均明顯長于生理鹽水組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。對爬竿時間的影響:低劑量組與生理鹽水組和西洋參組的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。對耐缺氧時間的影響:各用藥組與生理鹽水對照組的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。2.3小鼠脾指數(shù)與鹽水組比較生理鹽水組小鼠體重略高于各用藥組,但各組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。紅景天復(fù)方高、低劑量組小鼠脾指數(shù)均高于生理鹽水組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(低劑組P<0.01,高劑量組P<0.05),西洋參組小鼠脾指數(shù)與生理鹽水組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。低劑量組小鼠胸腺指數(shù)高于生理鹽水組和西洋參組,其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。紅景天復(fù)方低劑量組、高劑量組及西洋參組小鼠吞噬指數(shù)均高于生理鹽水組,且紅景天復(fù)方低劑量組與生理鹽水組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),其他兩組與生理鹽水組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。見表2。3抗疲勞作用檢測疲勞是機體在一定環(huán)境條件下,由于長時間或過于繁重、緊張的勞動(包括腦力和體力)而引起的工作效率暫時降低的一種生理心理現(xiàn)象。游泳是全身消耗性運動,劇烈的運動消耗大量的能量和氧氣,同時產(chǎn)生大量的乳酸,抗疲勞作用的主要機制是使機體更節(jié)省地利用糖原和三磷酸腺苷,為肌肉活動提供更充分的能量。西洋參是已被證實有較強的抗疲勞作用,同時能夠提高機體的體液免疫和細(xì)胞免疫功能的藥物,本研究中以西洋參作為陽性對照,紅景天復(fù)方組小鼠負(fù)重游泳持續(xù)時間均明顯長于生理鹽水組,與西洋參組的差異無統(tǒng)計學(xué)意義,說明該方具有提高小鼠抗運動性疲勞的作用;紅景天復(fù)方組小鼠爬竿時間明顯長于生理鹽水組,說明該方具有提高小鼠靜止耐力的作用,從直接和間接兩方面說明該方能延緩疲勞的發(fā)生,從而起到抗疲勞的作用。缺氧影響機體各種代謝,特別是機體的氧化供能耐缺氧能力高說明機體的抗應(yīng)激能力強,該方對于小鼠機體耐缺氧能力影響不顯著,說明該方抗疲勞作用并不是通過增強中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能實現(xiàn)。胸腺和脾臟是人體最重要的中樞和外周免疫器官之一,胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)能反映二者的發(fā)育和功能狀況,間接反映了機體的免疫水平。淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率可直接反映細(xì)胞免疫功能狀態(tài)。因此,檢測胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率,可以了解藥物對機體免疫功能特別是細(xì)胞免疫的影響。本研究結(jié)果顯示紅景天復(fù)方低劑量組與高劑量組均可使脾臟指數(shù)及胸腺指數(shù)顯著增加,說明該方可能具有增強小鼠機體免疫功能,但其作用效果可能與其劑量不成正相關(guān)性,其對小鼠免疫器官指數(shù)指標(biāo)值的作用優(yōu)于西洋參作用。巨噬細(xì)胞參與機體的免疫應(yīng)答和免疫調(diào)節(jié)過程,在機體的特異性和非物異性免疫中均具有重要作用,巨噬細(xì)胞的激活可使機體抗感染的能力提高,從而增強機體的非特異性免疫功能。本研究中,西洋參組、紅景天復(fù)方低劑量和高劑量組均