hplc法測(cè)定參芪五味子分散片中五味子醇甲的方法研究

hplc法測(cè)定參芪五味子分散片中五味子醇甲的方法研究

參蘇子分散劑是參蘇子分散劑的改良配方。它由南五味子180克、黨參60克、黃原120克和酸棗核（炒）30克組成。其中五味子味酸,甘,溫,歸肺、心腎經(jīng),可收斂固澀,益氣生津,補(bǔ)腎寧心;黨參是常用的補(bǔ)氣中藥,其性平、味甘,入脾、肺經(jīng),具補(bǔ)中益氣、和胃養(yǎng)血等功效;黃芪味甘,性微溫,歸脾、肺經(jīng),有補(bǔ)中益氣之效,現(xiàn)代研究表明黃芪有增強(qiáng)免疫力,改善心功能,促進(jìn)機(jī)體代謝等多方面的作用;酸棗仁味甘、酸,平,歸肝、膽、心經(jīng),可補(bǔ)肝、寧心、斂汗、生津。幾味藥合用對(duì)治療心脾氣虛而導(dǎo)致的失眠、神經(jīng)衰弱有很好的效果。本實(shí)驗(yàn)建立HPLC法測(cè)定參芪五味子分散片中五味子醇甲的方法,為有效控制該制劑質(zhì)量提供依據(jù)。1藥品、試劑和儀器Agilent1100高效液相色譜儀;SartoriusBP211D電子天平(感量0.1mg/0.01mg);USC—502超聲波清洗器,TU—11901紫外分光光度計(jì)。五味子醇甲對(duì)照品(批號(hào)110857-200709)由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。甲醇為色譜純,水為重蒸餾水(自制),其余試劑為分析純。參芪五味子分散片(批號(hào)100501、100502、100503、100504、100505、100506,規(guī)格:0.3g/片)由浙江維康藥業(yè)有限公司提供。2方法和結(jié)果2.1流動(dòng)相35,流動(dòng)相2.Inertex-C18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm),流動(dòng)相為甲醇-水(65∶35),體積流量1mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)250nm,柱溫35℃,進(jìn)樣量10μL。分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液進(jìn)樣分析,結(jié)果陰性無(wú)干擾,見(jiàn)圖1。2.2溶液的制備2.2.1對(duì)照溶液的制備精密稱取五味子醇甲對(duì)照品適量,加甲醇制成80μg/mL的溶液,即得。2.2.3陰性樣品溶液的制備按處方組成取除五味子藥材外藥材和輔料適量,按參芪五味子分散片的制備工藝和供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍精密吸取五味子醇甲對(duì)照品儲(chǔ)備液適量,分別加甲醇制成19.6、39.2、78.4、156.8、235.2、313.6μg/mL不同質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液,搖勻,作為對(duì)照品溶液,分別精密進(jìn)樣10μL,按上述色譜條件進(jìn)行分析,測(cè)定峰面積,以峰面積為縱坐標(biāo),質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸,得回歸方程Y=1×105X+3539.6,r=0.9999,表明五味子醇甲在0.196~3.136μg與峰面積成良好的線性關(guān)系。2.4方法研究2.4.1精密度測(cè)試取批號(hào)100501的樣品制備供試品溶液,按上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次,測(cè)定,計(jì)算五味子醇甲峰面積的RSD為1.49%。2.4.2穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品(批號(hào)100501)溶液,分別于0、2、4、8、16h進(jìn)樣10μL,測(cè)定,計(jì)算五味子醇甲峰面積的RSD為1.37%,表明供試品溶液在16h內(nèi)穩(wěn)定。2.4.3味子醇甲質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定取供試樣品(批號(hào)100501)6份,制備供試品溶液,在上述色譜條件下測(cè)定,計(jì)算五味子醇甲質(zhì)量分?jǐn)?shù)。結(jié)果表明,樣品中五味子醇甲質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD為0.32%。2.4.4加樣回收率試驗(yàn)取樣品(批號(hào)100501)適量,研細(xì),精密稱取粉末6份,每份約0.5g,分別精密加入五味子醇甲對(duì)照品0.9608、0.9608、1.2010、1.2010、1.4412、1.4412mg,制備供試品溶液,按上述色譜條件測(cè)定五味子醇甲峰的量,計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為99.5%,RSD為0.49%。2.5味子醇甲檢測(cè)取6批樣品(批號(hào)100501、100502、100503、100504、100505、100506)制備供試品溶液,按上述色譜條件測(cè)定,計(jì)算得樣品中的五味子醇甲分別為0.663、0.610、0.634、0.595、0.597、0.680mg/片。3提取方法的的影響取五味子醇甲對(duì)照品溶液,以甲醇為空白,于200~400nm波長(zhǎng)處進(jìn)行光譜掃描,可見(jiàn)五味子醇甲在250nm波長(zhǎng)處有一特征吸收波長(zhǎng),因此選擇250nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。分別考察Inertex-C18(250mm×4.6mm,5μm)、Kromasil-C18(250mm×4.6mm,5μm)柱,以甲醇-水(65∶35)為流動(dòng)相,二者均達(dá)到滿意的分離效果,五味子醇甲與相鄰峰分離度大于2.0,色譜柱對(duì)該方法基本無(wú)影響。選用甲醇-水(65∶35)與甲醇-水(60∶40)為流動(dòng)相,均達(dá)到滿意的分離效果,五味子醇甲峰已達(dá)基線分離,峰形對(duì)稱;選取甲醇-水(65∶35)作為流動(dòng)相五味子醇甲峰保留時(shí)間相對(duì)較短,分離效果較佳。考察了回流提取法和超聲提取法對(duì)參芪五味子分散片中五味子醇甲定量測(cè)定的影響,采用回流制備樣品,其五味子醇甲提取量與超聲相當(dāng),但方法相對(duì)較繁瑣,所以選擇以超聲提取法制備供試品。分別考察超聲處理(功率250W,頻率25kHz)20、30、45min對(duì)參芪五味子分散片中五味子醇甲定量測(cè)定的影響,30min五味子醇甲基本被提取出來(lái),所以超聲提取30min即可。2.2.2供試品溶液的制備取本品20片,研細(xì);取約1.0g,精密稱定,