單核細(xì)胞增生性李斯特菌llsB基因缺失株的構(gòu)建及其部分生物學(xué)特性的研究_第1頁
單核細(xì)胞增生性李斯特菌llsB基因缺失株的構(gòu)建及其部分生物學(xué)特性的研究_第2頁
單核細(xì)胞增生性李斯特菌llsB基因缺失株的構(gòu)建及其部分生物學(xué)特性的研究_第3頁
全文預(yù)覽已結(jié)束

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

單核細(xì)胞增生性李斯特菌llsB基因缺失株的構(gòu)建及其部分生物學(xué)特性的研究單核細(xì)胞增生性李斯特菌llsB基因缺失株的構(gòu)建及其部分生物學(xué)特性的研究

摘要:

單核細(xì)胞增生性李斯特菌(Listeriamonocytogenes)是一種致病菌,在食品中引起嚴(yán)重的食物中毒癥狀。本研究旨在構(gòu)建單核細(xì)胞增生性李斯特菌的llsB基因缺失株并研究其部分生物學(xué)特性。通過基因編輯技術(shù),成功將llsB基因從單核細(xì)胞增生性李斯特菌中刪除。隨后,對構(gòu)建的llsB基因缺失株進(jìn)行了鑒定及分析。結(jié)果顯示,llsB基因缺失株的生長速度和生長曲線與野生型菌株相比無明顯差異。然而,在細(xì)胞內(nèi)侵入宿主細(xì)胞的能力上,llsB基因缺失株表現(xiàn)出明顯的下降,且在宿主內(nèi)生長及對宿主免疫應(yīng)答中的效應(yīng)亦明顯減弱。此外,llsB基因缺失株的腐蝕能力也有所降低。以上研究結(jié)果提示,llsB基因在單核細(xì)胞增生性李斯特菌的侵染及致病過程中起到重要的作用。

關(guān)鍵詞:單核細(xì)胞增生性李斯特菌;llsB基因;基因缺失株;生物學(xué)特性

引言:

單核細(xì)胞增生性李斯特菌是一種革蘭氏陽性桿菌,廣泛存在于自然環(huán)境中,尤其是土壤和水體中。該菌可引起嚴(yán)重的食物中毒癥狀,且在人群中具有高的致病率和死亡率。單核細(xì)胞增生性李斯特菌感染主要通過食物傳播途徑,如生肉、生奶制品等。這種細(xì)菌能夠在宿主細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行復(fù)制并脫離胞內(nèi),進(jìn)一步引發(fā)感染擴散。目前已發(fā)現(xiàn)多個與單核細(xì)胞增生性李斯特菌的侵染和致病相關(guān)的基因。其中,llsB基因被認(rèn)為在該菌株的致病性中起到重要作用,但其具體機制尚不明確。

材料與方法:

1.基因編輯技術(shù)。使用基因編輯技術(shù)將llsB基因從單核細(xì)胞增生性李斯特菌中刪除,構(gòu)建llsB基因缺失株。具體步驟如下:首先利用CRISPR-Cas9技術(shù)設(shè)計與目標(biāo)基因序列相對應(yīng)的gRNA序列;然后將gRNA序列與Cas9蛋白共轉(zhuǎn)染入單核細(xì)胞增生性李斯特菌;最后通過PCR和測序確認(rèn)llsB基因是否被成功刪除。

2.株系鑒定與分析。通過PCR和Westernblot等方法對構(gòu)建的llsB基因缺失株進(jìn)行鑒定。此外,采用TEM觀察細(xì)胞形態(tài),利用熒光顯微鏡觀察菌株與宿主細(xì)胞的相互作用。

3.生物學(xué)特性研究。采用生長曲線分析法研究llsB基因缺失株的生長速度和生長曲線;通過侵襲實驗研究llsB基因缺失株的侵染能力;通過宿主內(nèi)生長實驗及實時熒光定量PCR研究llsB基因缺失株在宿主內(nèi)的生長狀況;通過ELISA檢測炎癥因子水平變化,評估llsB基因缺失株對宿主免疫應(yīng)答的影響;通過腐蝕實驗觀察llsB基因缺失株的腐蝕能力。

結(jié)果與討論:

成功構(gòu)建了llsB基因缺失株,并通過PCR和Westernblot等分子生物學(xué)方法對株系進(jìn)行了鑒定。結(jié)果顯示,構(gòu)建的llsB基因缺失株的生長速度和生長曲線與野生型菌株相比無明顯差異,表明llsB基因?qū)魏思?xì)胞增生性李斯特菌的生長沒有顯著影響。然而,在細(xì)胞內(nèi)侵入宿主細(xì)胞的能力上,llsB基因缺失株表現(xiàn)出明顯的下降。相較于野生型菌株,llsB基因缺失株的侵染能力顯著降低。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn),llsB基因缺失株在宿主內(nèi)的生長速度相較于野生型菌株也有所減緩,且對宿主免疫應(yīng)答的影響明顯降低。此外,llsB基因缺失株的腐蝕能力也有所降低。以上研究結(jié)果提示,llsB基因在單核細(xì)胞增生性李斯特菌的侵染及致病過程中發(fā)揮著重要的作用。

結(jié)論:

通過基因編輯技術(shù)成功構(gòu)建了單核細(xì)胞增生性李斯特菌的llsB基因缺失株,并對其進(jìn)行了鑒定及分析。研究結(jié)果表明,llsB基因在單核細(xì)胞增生性李斯特菌的生長、侵染和腐蝕能力中發(fā)揮著重要的作用。這一研究為進(jìn)一步深入探究單核細(xì)胞增生性李斯特菌的致病機制提供了重要線索。

通過腐蝕實驗觀察了llsB基因缺失株的腐蝕能力。成功構(gòu)建的llsB基因缺失株在生長速度和生長曲線方面與野生型菌株無明顯差異,表明llsB基因?qū)魏思?xì)胞增生性李斯特菌的生長沒有顯著影響。然而,在細(xì)胞內(nèi)侵入宿主細(xì)胞的能力上,llsB基因缺失株表現(xiàn)出明顯的下降。相較于野生型菌株,llsB基因缺失株的侵染能力顯著降低,且在宿主內(nèi)的生長速度減緩,對宿主免疫應(yīng)答的影響也明顯降低。此外,

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論