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《SDSPAGE電泳測(cè)定》PPT課件SDSPAGE電泳測(cè)定是一種用于分離和測(cè)定蛋白質(zhì)分子量的常見(jiàn)實(shí)驗(yàn)技術(shù)。本課件將介紹SDSPAGE電泳測(cè)定的原理、實(shí)驗(yàn)步驟、常見(jiàn)問(wèn)題與解決方法等。簡(jiǎn)介SDSPAGE電泳測(cè)定是一種重要的蛋白質(zhì)分析技術(shù),通過(guò)電泳分離蛋白質(zhì),并測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量。本節(jié)將介紹SDSPAGE電泳測(cè)定的特點(diǎn)與應(yīng)用。特點(diǎn)高分辨率、操作簡(jiǎn)單、結(jié)果可靠應(yīng)用蛋白質(zhì)純化、相對(duì)分子量測(cè)定、蛋白質(zhì)組學(xué)研究等原理SDS對(duì)蛋白質(zhì)的影響1分子量與電泳遷移率關(guān)系分子量越大,電泳遷移率越慢2溫度、pH值、電場(chǎng)強(qiáng)度等因素的影響影響蛋白質(zhì)的疏水性及電荷狀態(tài)實(shí)驗(yàn)步驟1SDS凝膠的制備選擇合適的凝膠濃度和孔徑2樣品處理與加載對(duì)樣品進(jìn)行還原和脫氧步驟3電泳運(yùn)行設(shè)置合適的電泳條件,運(yùn)行電泳4凝膠染色與成像使用染料染色,記錄凝膠成像結(jié)果5結(jié)果分析測(cè)量帶狀圖的相對(duì)分子量常見(jiàn)問(wèn)題與解決樣品量不足如何解決濃度更高、使用更敏感的染色方法蛋白質(zhì)分子量大小與凝膠孔徑的關(guān)系選擇合適的凝膠孔徑凝膠不均勻或卷曲的原因及解決方法凝膠制備過(guò)程中的操作技巧及調(diào)整注意事項(xiàng)1實(shí)驗(yàn)室安全注意事項(xiàng)佩戴實(shí)驗(yàn)室安全裝備,遵守實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度2試劑的正確使用方法按照說(shuō)明書要求使用試劑,注意保存條件3實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的記錄方式使用記錄本或電子表格記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),并進(jìn)行標(biāo)注參考文獻(xiàn)引用的相關(guān)文獻(xiàn)1.SmithA,etal.Jou
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