RNAi抑制小鼠樹突細胞共刺激通路的體外研究的開題報告

RNAi抑制小鼠樹突細胞共刺激通路的體外研究的開題報告一、研究背景和意義：樹突狀細胞為TheodoreH.Yearger等科學家所發(fā)現(xiàn)，在20世紀70年代被正式命名。樹突狀細胞是一類具有高度表面表現(xiàn)性和極其多樣化的細胞，是機體最重要的專業(yè)抗原提呈細胞，可分化為各種形態(tài)和各種分子狀態(tài)的亞型。共刺激通路是指參與T淋巴細胞激活所必需的刺激分子路徑，主要包括的分子為B7結合蛋白家族成員（如B7-1、B7-2和B7-H2等）和其T淋巴細胞對應的受體（如CD28和CTLA-4等）。研究發(fā)現(xiàn)，樹突細胞共刺激通路在免疫應答中發(fā)揮著非常重要的作用。因此，對樹突細胞共刺激通路的研究將有助于進一步理解機體免疫調節(jié)及其發(fā)病機制，也有助于指導相關疾病的臨床治療。RNAi（RNA干擾）是由HowardHughesMedicalInstitute的NapoleonSpiner等人在1998年發(fā)現(xiàn)的一種基于RNA轉染后導致特定基因表達沉默而實現(xiàn)的技術。RNAi技術可以通過基因靶向干擾機理使目標基因的蛋白質表達減少或消失，從而實現(xiàn)疾病基因治療的目的。RNAi技術在分子生物學和基因治療等領域發(fā)揮著重要的作用，已成功應用于細胞生物學、生物醫(yī)學、植物基因工程等多個領域。二、研究目的和內容：研究目的是探究RNAi抑制樹突細胞共刺激通路的效果和相關機制，并評估其對機體的免疫功能的影響。研究內容包括：（1）構建RNAi載體（2）利用RNAi技術抑制樹突細胞共刺激通路（3）檢測共刺激通路相關分子的表達水平（4）體外評估RNAi對樹突細胞功能的影響（5）評估RNAi抑制樹突細胞共刺激通路的效果和機體免疫功能的影響三、研究方法和技術路線：根據(jù)文獻和已有研究，本研究擬采用以下方法和技術路線：（1）構建RNAi載體：選取共刺激通路相關分子靶點，設計RNAi靶向序列并進行合成，構建載有RNAi靶向序列的質粒，如pGPU6、pSilencer等。（2）制備樹突細胞：從小鼠骨髓中分離樹突細胞，經(jīng)過特定條件的誘導和分化，制備出高純度的樹突細胞。（3）利用RNAi技術抑制樹突細胞共刺激通路：將RNAi載體轉染進制備好的樹突細胞中，使用Westernblot等方法檢測共刺激通路相關分子的表達水平。（4）體外評估RNAi對樹突細胞功能的影響：測定樹突細胞的形態(tài)學和細胞活力，采用T淋巴細胞激活、漂移、增殖和分泌相關指標等方法評估RNAi對樹突細胞功能的影響。（5）評估RNAi抑制樹突細胞共刺激通路的效果和機體免疫功能的影響：采用小鼠模型評估RNAi抑制樹突細胞共刺激通路對機體免疫功能的影響，比較RNAi前后機體的免疫功能差異。四、研究預期結果和意義：預期結果：（1）構建RNAi載體成功，樹突細胞成功轉染RNAi載體。（2）RNAi抑制樹突細胞共刺激通路的效果顯著。（3）RNAi抑制樹突細胞共刺激通路后，樹突細胞的功能發(fā)生改變。（4）RNAi抑制樹突細胞共刺激通路后，機體免疫功能發(fā)生改變。研究意義：（1）本研究將探究RNAi技術抑制樹突細胞共刺激通路的效應，為研究共刺激通路的新方法提供參考。（2）本研究將