動物轉移因子的研究進展

動物轉移因子的研究進展

轉移因素（t）是存在于淋巴結和白細胞中的一種小分子物質。它可以將供體中的細胞免疫功能轉移到受體，從而提高受體的免疫功能。TF屬多肽類物質,含多種氨基酸,相對分子質量低,無熱原,無抗原性,無毒副作用且無種屬差異,是一種新型而又安全的免疫制劑。1949年由Lawrence首次發(fā)現(xiàn)。Lawrence發(fā)現(xiàn)結核菌素陽性供者的活淋巴細胞能使皮試陰性者轉變?yōu)槠ぴ囮栃?。以此為依?jù),Lawrence等1953年將其對應的白細胞可透析物質(DLE)重復實驗后,發(fā)現(xiàn)DLE具備活淋巴細胞同樣的功能,并把引起這種效應的物質稱之為“轉移因子”。20世紀70、80年代以來,隨著細胞免疫學技術的發(fā)展,人們對轉移因子的研究逐步深入,對動物轉移因子的應用也進行了廣泛的探索。目前,已了解了轉移因子的基本成分、種屬差異、特異性,建立了部分體內外檢測方法,并正在積極探索將動物轉移因子用于醫(yī)學臨床試驗。美國已有部分品種的轉移因子獲準生產(chǎn)并用于動物疫病治療。目前,用人、豬、牛、羊的白細胞、脾臟和淋巴結制備轉移因子并用于臨床的報道已經(jīng)很多。本文就雞轉移因子的研制及其臨床應用進行回顧和論述。1.制備方法和材料1.1超濾、純化、分離雞轉移因子的制備方法主要采用透析-過柱法、超濾-過柱法或單純透析法。曾仕廉等報道,將細胞置于-50℃凍結,再置于37℃水浴融化,如此反復凍融6次,4000r/min低溫冷凍離心,上清液經(jīng)中空纖維超濾器超濾,截留相對分子質量5000的超濾液,再采用SephadexG-25柱層析進行洗脫純化。李富桂等報道,將組織置于組織搗碎機中粉碎勻漿后,用超聲波裂解組織細胞,再于4000r/min離心20min。棄去沉淀,將上清液裝入透析袋,攪拌透析48h,收集透析外液,蛋白質檢測為陰性,再將透析外液用SephadexG-25柱層析進行洗脫純化。江青艷等、日穆德瑪?shù)群婉R鳳龍等報道,用無菌鹽水洗凈組織,在無菌條件下攪碎、稱重,加1.5倍雙蒸餾水制成勻漿,凍融9次,3000r/min離心30min,取上清液用透析袋進行透析,溫度為4℃,磁力攪拌透析48h。1.2雞臟器的原料雞轉移因子的制備材料以脾臟為主,也有報道用雞胚細胞的。用雞脾臟為原料的有粵黃雞、烏雞、來亨雞、AA肉仔和AA成雞脾臟;雞胚細胞系采用雞胚白細胞為原料制備雞轉移因子。2.雞胚tf成分雞轉移因子透析液是呈無色或微黃的透明液體,而層析液為無色透明液體,略帶腥膻氣味。其pH值為6.7左右,用磺基水楊酸鈉檢測蛋白反應為陰性。雞轉移因子熱原質檢驗和毒性檢驗均為陰性,對紅細胞也沒有任何毒害作用。A260/A280≥2.0。聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦電泳結果雞胚白細胞TF得到5條譜帶。薄層色譜掃描雞胚白細胞TF含有5個組分。雞胚TF的紅外吸收波數(shù)為3310cm-1、2974cm-1、1656cm-1、1544cm-1、1400cm-1和1083cm-1,雞胚TF氨基酸組分為谷氨酸、天門冬氨酸、甘氨酸等16種氨基酸;醋酸纖維素薄層電泳檢測顯示雞胚TF含有RNA組分?；淈S雞脾TF經(jīng)SephadexG-25層析得到3個組分,紫外-可見光掃描光譜分析表明,透析外液及各組分的最大吸收峰值各不相同,與透析外液相比,組分Ⅰ和組分Ⅱ峰值右移,組分Ⅲ峰值左移,透析外液及各組分的A260/A280值也不相同,以組分Ⅲ最高,為10.05,組分Ⅱ次之,為5.25,透析外液為2.99,組分Ⅰ最低,為1.23,表明透析外液及各組分中核酸與多肽含量的比值:組分Ⅲ>組分Ⅱ>提取液>組分Ⅰ。氨基酸組分含有甘氨酸、谷氨酸、丙氨酸等17種氨基酸。李富桂等在研究AA肉雞TF時報道,無論在260nm或是在280nm處均出現(xiàn)2個吸收峰。第1峰低且窄,第2峰高且寬,在勻漿時使用不同的溶液對波形具有一定的影響,這主要表現(xiàn)在第2峰到達頂峰的速度或是緩慢或是急速,從而波形陡峭或平緩。通過對層析各組分的紫外分析,TF完全集中在第2峰中。根據(jù)260nm和280nm處的吸收比值,對照層析所記錄的波形分析,TF主要存在于峰值部分,且近似于正態(tài)分布曲線,即隨著波形的上升,比值增大,到達頂峰后,波形下降比值也隨之減少。勻漿時使用不同的溶液對TF在波形中的位置有影響,即偏于峰前或偏于峰后有所不同。多肽含量為0.1mg/ml。日穆德瑪?shù)葓蟮?烏雞脾轉移因子多肽含量500μg/ml,核糖16.88μg/ml;來亨雞脾轉移因子多肽含量454μg/ml,核糖16.38μg/ml。烏雞脾轉移因子最高吸收峰值在波長250.5nm處。烏雞脾轉移因子經(jīng)SepherdexG-25層析,分離得到6個組分,其中4、5峰較高,其A260/A280比值分別為2.14和2.83。用高效液相色譜進行核糖分析,在254nm處出現(xiàn)4個吸收峰,其中有2個峰值較高。3.tf對b細胞免疫作用轉移因子具有很強的生物學活性。日穆德瑪?shù)群屠钕喟驳炔捎忙?乙酸萘酯染色法觀察T、B淋巴細胞,發(fā)現(xiàn)烏雞TF可使烏雞的T淋巴細胞明顯增多(對照組和試驗組的xˉ±sxˉ±s分別為14.70±5.65和23.55±9.47)。表明正常雞體注射烏雞TF后,對其細胞免疫功能具有明顯增強作用,用3H-TdR摻入法抽測TF-H(正常人轉移因子)和TF-BC(烏雞脾細胞轉移因子)對機體細胞免疫活性的影響,發(fā)現(xiàn)對照組和試驗組差異有非常顯著意義(F=14.935,P<0.01)。馬鳳龍等在雞新城疫(ND)I系疫苗與TF聯(lián)合應用的5次檢測中,試驗組的淋巴細胞轉化率均高于對照組,差異有非常顯著意義(P<0.01)。TF與ND-Lasota疫苗和法氏囊病(IBD)疫苗聯(lián)合應用,明顯提高體液免疫的效果,試驗組的效價均高于對照組,兩者差異有顯著(P<0.05)或非常顯著意義(P<0.01)。李富桂等用淋巴細胞轉化實驗法,以雞喉氣管炎(LT)病毒為刺激原檢測雞TF對T細胞的影響,發(fā)現(xiàn)48、72和96h后試驗組的淋巴細胞轉化率均高于對照組,差異有非常顯著意義(P<0.01),說明雞TF對細胞免疫效果具有增強作用。用血凝抑制實驗法,以雞減蛋綜合征(EDS-76)病毒為刺激原檢測雞TF對B細胞的免疫效果,發(fā)現(xiàn)對照組與試驗組的平均血凝抑制效價(log2χ)相差0.7個滴度,最高時相差1個滴度,數(shù)理統(tǒng)計結果差異有顯著意義(P<0.05)。李相安等和江青艷等還證明雞TF可促進免疫器官的發(fā)育,與對照組相比,口服雞胚TF組免疫器官脾及法氏囊平均相對濕重(‰)分別高出0.114和0.046,差異有顯著意義(P<0.01);注射給藥組脾和法氏囊的相對濕重(‰)也分別高于對照組。王忠等證實雞TF對小白鼠體重增長有促進作用。王建文等報道TF試驗組與對照組相比,試驗組雞體重顯著增加(12日齡時P<0.05,16日齡時P<0.01)。江青艷等用雞TF給粵黃雞注射,表明高、中濃度的TF對粵黃雞的增重有明顯的促進作用,同時可促進粵黃雞的甲狀腺素(T4)和生長激素(GH)分泌。4.在實踐中的應用4.1tf的臨床療效和感染及對馬立克氏病的療效轉移因子已廣泛用于人及動物疾病的治療,雞TF在禽病的治療方面也有不少報道。李富桂等報道TF對法氏囊病(IBD)具有治療作用,試驗組的治愈率為60%,卵抗治療組為80%,對照組的存活率為20%;特別是當?shù)诙胃腥綢BD時,試驗組表現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢。實驗全部結束時,TF試驗組的存活率為60%,卵抗治療組為20%,對照組的存活率為20%,TF具有良好的療效。對馬立克氏病(MD)也表現(xiàn)出一定的療效,在連續(xù)使用雞轉移因子8d后,癱瘓雞全部站立,恢復行走,但第10天又重復發(fā)作。盡管還并不十分了解TF對MD的整個病理組織學的形態(tài)變化,但臨床表現(xiàn)說明雞TF對MD具有明顯的抑制作用。王建文等報道雞轉移因子在一定程度上抑制和緩解急性實驗性球蟲病的臨床癥狀,阻礙球蟲病的發(fā)生和發(fā)展。黃建文等還報道,雞TF對人工感染禽流感的雛雞,能明顯改善臨床癥狀,減少死亡,縮短病程,可用于禽流感的早期治療。4.2tf對雞凝抑制作用TF不但可以用于疾病的治療,而且可以用于疾病的預防,主要是與疫苗聯(lián)合使用,加強疫苗的免疫作用。用雞TF與雞減蛋綜合征疫苗聯(lián)合使用,可明顯提高其抗體效價,還可以使人工感染流感病毒的雛雞較早產(chǎn)生血凝抑制抗體,且能快速達到較高水平。馬鳳龍等報道,雞脾TF對新城疫IV系疫苗(ND-Lasota系)和傳染性法氏囊病(IBD)疫苗的初免試驗具有協(xié)同作用。試驗組與對照組比較,其瓊脂雙擴散實驗(AGP)的平均效價均高于對照組,差異有顯著(P<0.05)或非常顯著意義(P<0.01)。同時,試驗組新城疫血凝抑制(ND-HI)的抗體效價也均高于對照組,差異有非常顯著意義(P<0.01)。在ND-I系疫苗的加強免疫試驗中,雞脾TF無論是用作疫苗肌注,還是口服,對雞ND-I系苗的免疫均有加強作用。試驗組HI效價均高于對照組,差異有顯著(P<0.05)或非常顯著意義(P<0.01),但肌注組和口服組之間的HI效價差異無顯著意義。在EDS-76滅活疫苗免疫試驗中,雞脾TF對雞油乳劑滅活疫苗的免疫同樣具有增強作用。試驗組的HI效價均高于對照組,差異有顯著意義(P<0.05)或非常顯著意義(P<0.01)。日穆得瑪?shù)葓蟮?烏雞轉移因子與雞新城疫I系和雞傳染性支氣管炎H120二聯(lián)活疫苗聯(lián)合使用時,對艾維茵肉仔雞沒有任何毒性作用,對細胞免疫具有活化作用,對血清γ-球蛋白無明顯作用,但對艾維茵肉仔雞生長具有一定的促進作用。日穆得瑪?shù)冗€報道,用烏雞轉移因子配合雞新城疫疫苗不僅可以提高抗體效價,而且使疫苗抗體提前出現(xiàn)較高的水平,并能維持較長的時間。邵兵等的研究也得到了相同的結果。無論是預防或治療,TF的主要使用途徑有注射和口服兩種,均表現(xiàn)出較好的效果。李富桂等證明,TF口服組作用快,