一例去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松癥模型的建立

一例去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松癥模型的建立

在之前的工作中，我們發(fā)現(xiàn)，烏鳳丸對維甲酸引起的大鼠骨質(zhì)疏松癥有顯著的抑制作用。為了進(jìn)一步確定其功能，本實(shí)驗(yàn)采用自卵巢法建立了大鼠骨質(zhì)疏松癥模型，并觀察了烏鳳丸的預(yù)防和治療效果。1材料和方法1.1號號烏雞白鳳丸(9g·丸-1),北京同仁堂制藥有限公司提供,批號990312;己烯雌酚片(1mg·片-1),承德眾生藥業(yè)有限責(zé)任公司產(chǎn)品,批號981012,使用時研磨成細(xì)粉,0.5%羧甲基纖維素鈉配成所需濃度混懸液備用。1.2動物SD大鼠(二級),♀,體重180～220g(3月齡),河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物學(xué)部提供,合格證號為醫(yī)動字第04057號。1.3免疫探析產(chǎn)品血清雌二醇放射免疫分析測試盒,北京北方生物技術(shù)研究所產(chǎn)品;血清降鈣素放射免疫分析測試盒、血清骨鈣素放射免疫分析測試盒,均為解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所產(chǎn)品;鈣液體試劑盒,北京中生生物工程高新技術(shù)公司產(chǎn)品;血清磷測試盒、血清堿性磷酸酶測試盒,均為石家莊市試劑廠產(chǎn)品。1.4儀器雙能x線骨密度儀(LUNAR-DPX,美國);γ-計數(shù)器(西安)。1.5骨密度檢測將48只大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(假手術(shù)+蒸餾水),去勢模型組(去卵巢+蒸餾水),烏雞白鳳丸小劑量組(去卵巢+烏雞白鳳丸1.0g·kg-1)、烏雞白鳳丸中劑量組(去卵巢+烏雞白鳳丸2.0g·kg-1)、烏雞白鳳丸大劑量組(去卵巢+烏雞白鳳丸4.0g·kg-1)及陽性藥己烯雌酚組(去卵巢+己烯雌酚0.03mg·kg-1),每組8只。以35mg·kg-1戊巴比妥鈉溶液ip麻醉、腹位固定,無菌條件下手術(shù)切除雙側(cè)卵巢后縫合,假手術(shù)組大鼠做同樣操作但不切除卵巢。手術(shù)2d開始ig給藥,假手術(shù)組和去勢模型組ig給予等體積的蒸餾水,7周時處死動物。摘取左側(cè)股骨,置液體石蠟中保存,使用雙能x線骨密度儀檢測骨密度;取血標(biāo)本分離血清,采用放免法測定血清雌二醇(E)、骨鈣素(BGP)、降鈣素(CT)水平。采用化學(xué)法測定血中鈣、磷含量,堿性磷酸酶(ALP)活性。1.6統(tǒng)計分析組間比較用SPSS10.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)及方差分析,所有數(shù)據(jù)均以xˉ±sxˉ±s表示。2結(jié)果2.1小鼠骨髓松茸試驗(yàn)結(jié)果見表1,從結(jié)果可見,實(shí)驗(yàn)結(jié)束時去勢模型組大鼠股骨骨密度明顯低于假手術(shù)組(P<0.01),表明切除大鼠雙側(cè)卵巢7周已引起大鼠骨質(zhì)疏松。烏雞白鳳丸治療組(1.0g·kg-1、2.0g·kg-1、4.0g·kg-1)大鼠股骨骨密度均明顯較去勢模型組高(P<0.05)。提示烏雞白鳳丸能有效預(yù)防去勢大鼠骨質(zhì)丟失,增加骨密度。2.2去勢模型與假手術(shù)組大鼠血磷值比較從結(jié)果可見,切除雙側(cè)卵巢后各組大鼠血鈣含量無明顯變化(P>0.05),但血磷含量較假手術(shù)組明顯下降(P<0.01),烏雞白鳳丸治療組(1.0g·kg-1、2.0g·kg-1、4.0g·kg-1)大鼠血磷值均明顯較去勢模型組高(P<0.05或P<0.01),接近正常水平。各組大鼠堿性磷酸酶(ALP)活性均無明顯變化(P>0.05)。2.3骨鈣素水平檢測見表2,從結(jié)果可見,去勢模型組大鼠血清雌二醇、降鈣素水平明顯較假手術(shù)組降低(P<0.01),骨鈣素水平明顯較假手術(shù)組升高(P<0.01),表明去勢后大鼠已致激素分泌紊亂。烏雞白鳳丸治療組(1.0g·kg-1、2.0g·kg-1、4.0g·kg-1)大鼠血清雌二醇、降鈣素水平明顯較去勢模型組升高(P<0.01),骨鈣素水平明顯較去勢模型組降低(P<0.01)。3去勢和血磷含量骨質(zhì)疏松以骨量減少、骨的微觀結(jié)構(gòu)退化為病理特征,用手術(shù)摘除雌性大鼠雙側(cè)卵巢的方法誘發(fā)大鼠發(fā)生骨質(zhì)疏松癥,可作為絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的實(shí)驗(yàn)研究。在本實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn),切除雙側(cè)卵巢后各組大鼠血鈣含量、堿性磷酸酶活性均無明顯變化;但血磷含量明顯下降,烏雞白鳳丸可明顯回升血磷含量,其中烏雞白鳳丸(4.0g·kg-1)組血磷含量接近正常水平。去勢后盡管血鈣含量維持正常,但因血磷值降低,致使血[Ca]·[P]乘積下降加速了大鼠骨質(zhì)疏松病變的進(jìn)展。可以認(rèn)為烏雞白鳳丸可能通過回升血磷含量調(diào)節(jié)鈣、磷代謝平衡,拮抗骨質(zhì)疏松。實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)大鼠去勢后血清雌二醇、降鈣素水平明顯降低,骨鈣素水平明顯升高。表明雌激素減少,骨對甲狀旁腺素敏感性增加導(dǎo)致骨吸收加強(qiáng),致使1,25-(OH)2-D3生成減少,腸鈣吸收減少而發(fā)