《臨床免疫檢驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)》

《臨床免疫檢驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)》(供四年制醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)本科使用)教學(xué)大綱實(shí)驗(yàn)教學(xué)管理中心基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心病原生物學(xué)與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室2021年10月

前言一、基本信息課程名稱：臨床免疫檢驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)學(xué)時學(xué)分：臨床檢驗(yàn)方向共24學(xué)時,1.5學(xué)分；技術(shù)研發(fā)方向共16學(xué)時，1學(xué)分適用專業(yè)：四年制醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)本科先修課程：免疫學(xué)基礎(chǔ),臨床免疫檢驗(yàn)技術(shù)二、課程簡介《臨床免疫檢驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)》是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)學(xué)生的一門重要實(shí)驗(yàn)課，是關(guān)于免疫學(xué)、免疫學(xué)技術(shù)及其在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中實(shí)際應(yīng)用的一門學(xué)科。隨著免疫學(xué)理論研究的飛速進(jìn)展，在免疫學(xué)理論的基礎(chǔ)上不斷建立起新的實(shí)驗(yàn)方法，使免疫學(xué)檢測技術(shù)日新月異。臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)現(xiàn)廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)及其他相關(guān)領(lǐng)域，在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究、臨床診斷、治療及預(yù)防中起著重要作用。通過《臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)》實(shí)驗(yàn)，要求學(xué)生加深對實(shí)驗(yàn)原理的理解、了解影響實(shí)驗(yàn)的因素、學(xué)會分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果、并熟悉其檢測項(xiàng)目的臨床意義；同時培養(yǎng)學(xué)生在免疫學(xué)檢驗(yàn)方面的基本操作技能，并具備基本的建立相關(guān)檢驗(yàn)方法的能力。本實(shí)驗(yàn)教學(xué)大綱依據(jù)李金明、劉輝主編的《臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)》（人民衛(wèi)生出版社，第1版）教材制定，實(shí)驗(yàn)教材為重慶醫(yī)科大學(xué)自編教材《臨床免疫檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》(盧賢瑜主編)，適用于四年制醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)本科等學(xué)生。結(jié)合我校教學(xué)計劃和學(xué)時安排，實(shí)驗(yàn)課分為模塊A和模塊B，其中模塊A為24學(xué)時，主要適用于四年制醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)本科(臨床檢驗(yàn)方向);模塊B為16學(xué)時,適用于四年制醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)本科(技術(shù)研發(fā)方向)。實(shí)驗(yàn)教學(xué)通過講授、操作、示教、視頻等方式進(jìn)行。三、課程目標(biāo)1.思想道德與職業(yè)素質(zhì)目標(biāo)通過本課程學(xué)習(xí)，培養(yǎng)學(xué)生尊重科學(xué)、實(shí)事求是、熱愛醫(yī)學(xué)事業(yè)、不懼艱苦、求知務(wù)實(shí)的探索精神和為醫(yī)學(xué)健康服務(wù)的獻(xiàn)身精神和良好的醫(yī)學(xué)職業(yè)素養(yǎng)及高尚的思想品德。2.知識目標(biāo)通過本課程的學(xué)習(xí)，使學(xué)生掌握臨床免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)原理，熟悉免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)知識并能設(shè)計并運(yùn)用相關(guān)實(shí)驗(yàn)。3.技能目標(biāo)通過本課程的學(xué)習(xí)，掌握臨床免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)基本操作技能，最終達(dá)到培養(yǎng)學(xué)生理論聯(lián)系實(shí)際、基礎(chǔ)聯(lián)系臨床的思維能力，并具有自主學(xué)習(xí)能力，為后續(xù)的臨床課程學(xué)習(xí)打下良好的基礎(chǔ)。四、教學(xué)要求根據(jù)課程教學(xué)大綱及目標(biāo)，確保課程教學(xué)內(nèi)容、教學(xué)過程（環(huán)節(jié)）、知識與能力目標(biāo)的達(dá)成，同時，對學(xué)生自主學(xué)習(xí)能力進(jìn)行培養(yǎng)。五、考核方式參與人（排名不分先后）：張光媛、鄧西川、陳婷婷、劉全執(zhí)筆人（排名不分先后）：張光媛審定人：何永林

教材、教輔用書與參考書目一、教材選用教材為重慶醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)系臨床免疫學(xué)教研室編著的《臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)及技術(shù)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》二、教輔用書及參考書目1.李金明，劉輝.《臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)》“十二五”普通高等教育本科國家級規(guī)劃教材，第1版，人民衛(wèi)生出版社，2015年1月出版2.王蘭蘭，許化溪.《臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)》“十二五”普通高等教育本科國家級規(guī)劃教材，第5版，人民衛(wèi)生出版社，2013年12月出版3.徐順清，劉衡川.《免疫學(xué)檢驗(yàn)》國家衛(wèi)生和計劃生育委員會“十二五”規(guī)劃教材，第2版，人民衛(wèi)生出版社，2015年2月出版4.楊致幫，葉彬.《病原生物學(xué)與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)》高等醫(yī)藥院校實(shí)驗(yàn)教學(xué)系列教材，第2版，科學(xué)出版社，2013年8月出版5.朱道銀，吳玉章.《免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)》高等醫(yī)藥院校實(shí)驗(yàn)教學(xué)系列教材，第1版，科學(xué)出版社，2008年6月出版

模塊A目錄實(shí)驗(yàn)一間接免疫熒光法檢測抗核抗體（ANA）…………………7實(shí)驗(yàn)二ELISA試劑盒制備（ELISA試劑配制、包被、封閉）…7實(shí)驗(yàn)三ELISA間接法檢測抗結(jié)核抗體……………8實(shí)驗(yàn)四總補(bǔ)體活性檢測（CH50實(shí)驗(yàn)）……….…8實(shí)驗(yàn)五PEG法檢測血清循環(huán)免疫復(fù)合物（CIC）…………………9實(shí)驗(yàn)六人外周血淋巴細(xì)胞分離、計數(shù)、活細(xì)胞測定……………9模塊A教學(xué)時數(shù)分配表（臨床檢驗(yàn)方向，共24學(xué)時）實(shí)驗(yàn)序號教學(xué)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)課學(xué)時實(shí)驗(yàn)類型實(shí)驗(yàn)一間接免疫熒光法檢測抗核抗體（ANA）4綜合型實(shí)驗(yàn)二ELISA試劑盒制備（ELISA試劑配制、包被、封閉）、免疫標(biāo)記技術(shù)視頻4基本實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)三ELISA間接法檢測抗結(jié)核抗體4綜合型實(shí)驗(yàn)四總補(bǔ)體活性檢測（CH50實(shí)驗(yàn)）4綜合型實(shí)驗(yàn)五PEG法檢測血清循環(huán)免疫復(fù)合物（CIC）、凝集反應(yīng)視頻4綜合型實(shí)驗(yàn)六人外周血淋巴細(xì)胞分離、計數(shù)、活細(xì)胞測定4綜合型合計24實(shí)驗(yàn)一間接免疫熒光法檢測抗核抗體【實(shí)驗(yàn)類型】綜合型實(shí)驗(yàn)【目的要求】1.掌握免疫標(biāo)記技術(shù)的概念、特點(diǎn)及分類。2.了解熒光的基本知識及熒光顯微鏡的基本使用方法。3.掌握免疫熒光法檢測抗核抗體的基本原理，熟悉其實(shí)驗(yàn)步驟，掌握熒光免疫實(shí)驗(yàn)的影響因素?！緦?shí)驗(yàn)學(xué)時】4學(xué)時【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】1.制備小鼠肝細(xì)胞印片、固定，采用間接免疫熒光法檢測血清抗核抗體、進(jìn)行結(jié)果觀察，判斷核型；并分析可能引起的自身免疫性疾病。2.熒光顯微鏡的基本使用和維護(hù)?！緦?shí)驗(yàn)分組】1~2人/組實(shí)驗(yàn)二ELISA試劑盒制備【實(shí)驗(yàn)類型】基本實(shí)驗(yàn)方法【目的要求】1.熟悉聚苯乙烯酶標(biāo)板的特點(diǎn)及其主要性能。2.掌握ELISA包被的試驗(yàn)條件：包被濃度、包被量、包被時間。3.了解ELISA實(shí)驗(yàn)常用的封閉液及封閉過程?！緦?shí)驗(yàn)學(xué)時】4學(xué)時【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】1.ELISA實(shí)驗(yàn)基本試劑的配制(PH9.6CB、PH7.2PBS、PH5.0底物緩沖液)、包被（PPD）、封閉。2.免疫標(biāo)記技術(shù)視頻?！緦?shí)驗(yàn)分組】1~2人/組實(shí)驗(yàn)三ELISA間接法檢測抗結(jié)核抗體【實(shí)驗(yàn)類型】綜合型實(shí)驗(yàn)【目的要求】1.掌握酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)的原理、特點(diǎn)及主要方法學(xué)分類。2.掌握間接ELISA法檢測抗結(jié)核抗體的原理；熟悉其操作步驟及實(shí)驗(yàn)的影響因素。3.掌握ELISA實(shí)驗(yàn)所設(shè)各項(xiàng)對照的意義?！緦?shí)驗(yàn)學(xué)時】4學(xué)時【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】1.運(yùn)用“實(shí)驗(yàn)二”所制備的試劑盒檢測血清中抗結(jié)核抗體，記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。2.對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行判定、分析及討論?！緦?shí)驗(yàn)分組】1~2人/組實(shí)驗(yàn)四總補(bǔ)體活性檢測-CH50實(shí)驗(yàn)【實(shí)驗(yàn)類型】綜合型實(shí)驗(yàn)【目的要求】1.掌握補(bǔ)體的概念、特點(diǎn)。2.熟悉補(bǔ)體經(jīng)典激活途徑的激活過程。3.掌握50%溶血實(shí)驗(yàn)（CH50）的檢測原理、正常值及臨床意義，了解其檢測方法?！緦?shí)驗(yàn)學(xué)時】4學(xué)時【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】1.抽綿羊血，制備2%SRBC懸液，調(diào)T（透光率）為38%~42%。2.抽同學(xué)新鮮血（提供補(bǔ)體）、低速離心，采用50%溶血實(shí)驗(yàn)檢測血清總補(bǔ)體活性，并進(jìn)行結(jié)果判斷?！緦?shí)驗(yàn)分組】1~2人/組實(shí)驗(yàn)五PEG法檢測循環(huán)免疫復(fù)合物（CIC）【實(shí)驗(yàn)類型】綜合型實(shí)驗(yàn)【目的要求】1.掌握循環(huán)免疫復(fù)合物的概念及PEG法檢測循環(huán)免疫復(fù)合物的原理。2.了解PEG法檢測循環(huán)免疫復(fù)合物的實(shí)驗(yàn)步驟及結(jié)果計算方法、結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)。3.熟悉PEG法檢測循環(huán)免疫復(fù)合物的實(shí)驗(yàn)影響因素，并分析可能出現(xiàn)假陽性的原因?！緦?shí)驗(yàn)學(xué)時】4學(xué)時【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】1.PEG法檢測循環(huán)免疫復(fù)合物。2.凝集反應(yīng)視頻。【實(shí)驗(yàn)分組】1~2人/組實(shí)驗(yàn)六人外周血淋巴細(xì)胞分離、計數(shù)、活細(xì)胞測定【實(shí)驗(yàn)類型】綜合型實(shí)驗(yàn)【目的要求】1.掌握人外周血淋巴細(xì)胞分離的原理（密度梯度離心法）。2.熟悉運(yùn)用牛鮑氏計數(shù)板進(jìn)行淋巴細(xì)胞計數(shù)并進(jìn)行活力檢測。3.熟悉人外周血淋巴細(xì)胞分離、計數(shù)及活細(xì)胞測定的實(shí)驗(yàn)步驟及淋巴細(xì)胞活力判斷標(biāo)準(zhǔn)?！緦?shí)驗(yàn)學(xué)時】4學(xué)時【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】1.應(yīng)用淋巴細(xì)胞分離液（Ficoll液）進(jìn)行人外周血淋巴細(xì)胞分離。2.運(yùn)用牛鮑氏計數(shù)板進(jìn)行淋巴細(xì)胞計數(shù)。3.應(yīng)用臺盼藍(lán)染色檢測淋巴細(xì)胞活力?！緦?shí)驗(yàn)分組】1~2人/組

模塊B目錄實(shí)驗(yàn)一間接免疫熒光法檢測抗核抗體（ANA）…………………13實(shí)驗(yàn)二ELISA試劑盒制備（ELISA試劑配制、包被、封閉）…13實(shí)驗(yàn)三ELISA間接法檢測抗結(jié)核抗體…………..14實(shí)驗(yàn)四人外周血淋巴細(xì)胞分離、計數(shù)、活細(xì)胞測定…………14模塊B教學(xué)時數(shù)分配表（技術(shù)研發(fā)方向，共16學(xué)時）實(shí)驗(yàn)序號實(shí)驗(yàn)題目實(shí)驗(yàn)課學(xué)時實(shí)驗(yàn)類型實(shí)驗(yàn)一間接免疫熒光法檢測抗核抗體（ANA）4綜合型實(shí)驗(yàn)二ELISA試劑盒制備（ELISA試劑配制、包被、封閉）、免疫標(biāo)記技術(shù)視頻4基本實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)三ELISA間接法檢測抗結(jié)核抗體4綜合型實(shí)驗(yàn)四人外周血淋巴細(xì)胞分離、計數(shù)、活細(xì)胞測定4綜合型合計16

實(shí)驗(yàn)一間接免疫熒光法檢測抗核抗體【實(shí)驗(yàn)類型】綜合型實(shí)驗(yàn)【目的要求】1.掌握免疫標(biāo)記技術(shù)的概念、特點(diǎn)及分類。2.了解熒光的基本知識及熒光顯微鏡的基本使用方法。3.掌握免疫熒光法檢測抗核抗體的基本原理，熟悉其實(shí)驗(yàn)步驟，掌握熒光免疫實(shí)驗(yàn)的影響因素?！緦?shí)驗(yàn)學(xué)時】4學(xué)時【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】1.制備小鼠肝細(xì)胞印片、固定，采用間接免疫熒光法檢測血清抗核抗體、進(jìn)行結(jié)果觀察，判斷核型；并分析可能引起的自身免疫性疾病。2.熒光顯微鏡的基本使用和維護(hù)?！緦?shí)驗(yàn)分組】1~2人/組實(shí)驗(yàn)二ELISA試劑盒制備【實(shí)驗(yàn)類型】基本實(shí)驗(yàn)方法【目的要求】1.熟悉聚苯乙烯酶標(biāo)板的特點(diǎn)及其主要性能。2.掌握ELISA包被的試驗(yàn)條件：包被濃度、包被量、包被時間。3.了解ELISA實(shí)驗(yàn)常用的封閉液及封閉過程?！緦?shí)驗(yàn)學(xué)時】4學(xué)時【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】1.ELISA實(shí)驗(yàn)基本試劑的配制(PH9.6CB、PH7.2PBS、PH5.0底物緩沖液)、包被（PPD）、封閉。2.免疫標(biāo)記技術(shù)視頻?！緦?shí)驗(yàn)分組】1~2人/組實(shí)驗(yàn)三ELISA間接法檢測抗結(jié)核抗體【實(shí)驗(yàn)類型】綜合型實(shí)驗(yàn)【目的要求】1.掌握酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)的原理、特點(diǎn)及主要方法學(xué)分類。2.掌握間接ELISA法檢測抗結(jié)核抗體的原理；熟悉其操作步驟及實(shí)驗(yàn)的影響因素。3.掌握ELISA實(shí)驗(yàn)所設(shè)各項(xiàng)對照的意義?！緦?shí)驗(yàn)學(xué)時】4學(xué)時【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】1.運(yùn)用“實(shí)驗(yàn)二”所制備的試劑盒檢測血清中抗結(jié)核抗體，記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。2.對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行判定、分析及討論?！緦?shí)驗(yàn)分組】1~2人/組實(shí)驗(yàn)四人外周血淋