-環(huán)糊精掩味苦度的研究

-環(huán)糊精掩味苦度的研究

公交精英（cd）具有內(nèi)部稀疏水和外部親水的特殊空間結(jié)構(gòu)，可以形成各種空間規(guī)模對應(yīng)的有機(jī)小分子，形成以小為主客為骨的超分子體（包含物）。藥學(xué)研究從其α,β,γ等母體發(fā)展到衍生物修飾。藥用輔料開發(fā)品種主要有羥丙基-β-環(huán)糊精(HP-β-CD)和磺丁基醚-β-環(huán)糊精(SBE-β-CD)。β-CD具有掩蓋藥物不良?xì)馕?、增加藥物溶解度、提高藥物穩(wěn)定性等作用,已被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥領(lǐng)域,近年來在掩蓋苦味方面亦有較多應(yīng)用。目前,β-CD多用于固體制劑的掩味,本實(shí)驗(yàn)主要考察其對中藥水煎液的掩味效果及規(guī)律,選取黃柏、龍膽、穿心蓮、蓮子心、蒸槐角等水煎液和小檗堿為研究載體,對比β-CD及其衍生物SBE-β-CD對苦味藥物載體的掩味效果,考察不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)β-CD的掩味規(guī)律,為開發(fā)苦味中藥的掩味劑提供參考。1陳服巖等5加科植物人參的干燥、蒸制品的制作LXJ-ⅡB型低速大容量多管離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠),DS-671型電子天平(上海DlGI),GP225型電子天平(德國賽多利斯儀器有限公司),PHS-3C型數(shù)字酸度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。藥材飲片均購于河南中一醫(yī)藥經(jīng)營有限公司,經(jīng)河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院陳天朝主任中藥師鑒定,黃柏為蕓香科植物黃皮樹PhellodendronchinenseSchneid.的干燥樹皮,龍膽為龍膽科植物堅(jiān)龍膽GentianarigescensFranch.的干燥根和根莖,穿心蓮為爵床科植物穿心蓮Andrographispaniculata(Burm.f.)Nees的干燥地上部分,人參為五加科植物人參PanaxginsengC.A.Mey.的干燥根和根莖,蓮子心為睡蓮科植物蓮NelumbonuciferaGaertn.的成熟種子中的干燥幼葉及胚根,蒸槐角為豆科植物槐SophorajaponicaL.的干燥成熟果實(shí)的蒸制品。小檗堿(批號101002,四川省玉鑫藥業(yè)有限公司),β-環(huán)糊精(β-CD,曲阜市天利藥用輔料有限公司),磺丁基醚-β-環(huán)糊精(SBE-β-CD,淄博千匯精細(xì)化工有限公司),水為純化水,試劑均為分析純。2方法和結(jié)果2.1人參的制備稱取10倍量《中國藥典》2010年版規(guī)定用藥量范圍的平均值(如黃柏用量6~9g,則取7.5g)黃柏、龍膽、穿心蓮、人參、蓮子心、蒸槐角,分別置適宜容器中,加水2L浸泡30min,置于電磁爐上加熱(2100W),待沸騰后,功率改為600W,煎煮20min,濾出,第2次煎煮加水2L,沸騰后煎煮10min,其余操作同第1次煎煮;合并濾液,混勻,冷至室溫,4000r·min-1離心15min,取上清液,定容至4L,灌裝,壓蓋,滅菌,備用。人參第1煎60min,第2煎40min,其他步驟同上。小檗堿溶液的配制:稱取15.20g,加水2000mL溶解,加水至攪勻即得。2.2級苦度值2.5%,2級苦度2.555.5555.5555.555555.555555.555555555.555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555555將苦味分為5級,每個級別賦予一定的苦度值范圍。1級表示“無苦味或幾乎無苦味”,苦度值0.5~1.5;2級表示“略有苦味”,苦度值1.5~2.5;3級為“有苦味但可接受”,苦度值2.5~3.5;4級表示“很苦,但仍可忍受”,苦度值3.5~4.5;5級為“不能忍受的苦味”,苦度值4.5~5.5。2.3陽性參比液的確定取2.1項(xiàng)下小檗堿溶液為參比液,在預(yù)試驗(yàn)基礎(chǔ)上,確定其苦度值2.5,為陽性參比液。取純水1L置于1L燒杯中,即為陰性參比藥液,無苦味。2.4實(shí)驗(yàn)前的志愿者在經(jīng)河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院倫理委員會審查批準(zhǔn)后,課題組對招募的志愿者進(jìn)行了苦味敏感度等的嚴(yán)格篩選,最終選擇了12名健康志愿者(4男8女)作為受試者,在試驗(yàn)前簽訂知情同意書。2.5口服品嘗評估2.5.1方法1:口腔苦度測定口嘗方法主要包括評分法和排序法,綜合這2種方法的特點(diǎn),本實(shí)驗(yàn)采用優(yōu)選的“排序+評分法”。先對參比溶液進(jìn)行測試,分別取陰性參比溶液30mL于口嘗紙杯中,由志愿者含口中,計(jì)時(shí)15s,此間口腔做漱口動作,以使舌根及舌側(cè)的苦味感受區(qū)能夠感受藥物苦味,并被告知該溶液的苦度分級和具體苦度值,吐出,漱口5次,至口腔內(nèi)無苦味,1~2min后測定陽性參比溶液。樣品測定與參比溶液測定相同,每輪試驗(yàn)給6個樣品(含陽性參比液),要求先按照從不苦到苦的順序給樣品,并結(jié)合與參比溶液的對比,給所嘗樣品賦予具體的苦度值,并記錄于預(yù)先設(shè)計(jì)好的“藥物苦味排序評分表”中。每個樣品可重復(fù)評價(jià),評價(jià)下一個樣品時(shí)要漱口5次。每輪樣品間休息1h。此外,試驗(yàn)中受試人員對樣品測試時(shí),采用隨機(jī)、單盲的方法對樣品進(jìn)行測試。2.5.2異常值的提取采用Grubbs檢驗(yàn)法對數(shù)據(jù)進(jìn)行異常值的循環(huán)檢驗(yàn)和剔除。采取雙側(cè)檢驗(yàn),顯著水平0.05的方式對離群值進(jìn)行剔除,每一組每一輪僅剔除一個異常值。剔除后不再進(jìn)行插值或補(bǔ)充測試。2.5.3-cd的加入方法分別取穿心蓮、龍膽、黃柏、人參、蓮子心藥材水煎液,按照摩爾比1∶1分別加入2種CD(藥材水煎液出膏率以主要有效成分的相對分子質(zhì)量計(jì)算,比如黃柏出膏率10%,全部以小檗堿計(jì)算,人參以人參皂苷Rg1、Re相對分子質(zhì)量的平均值計(jì)算),加熱至約50℃攪拌溶解,按上述口嘗方法分別對小檗堿溶液、上述藥材水煎液及加入2種CD的溶液進(jìn)行評價(jià)。采用Grubbs檢驗(yàn),龍膽、人參加SBE-β-CD、蓮子心加β-CD、黃柏、穿心蓮5組數(shù)據(jù)按95%的置信度各剔除1個異常值,剔除異常值后用t檢驗(yàn)評價(jià)加入掩味劑后與原液的差別,結(jié)果見圖1。由圖1可知,SBE-β-CD對龍膽的掩味效果較好,對其余4味藥材β-CD效果較好。經(jīng)方差分析,β-CD和SBE-β-CD對龍膽均無顯著差異,β-CD對人參、蓮子心、黃柏、穿心蓮均有顯著性差異(P<0.05),SBE-β-CD只對穿心蓮有顯著性。對蓮子心、黃柏的掩味效果,β-CD與SBE-β-CD有顯著性差異。2.5.4-cd的用量在上述試驗(yàn)基礎(chǔ)上,選取β-CD作進(jìn)一步研究。根據(jù)β-CD溶解度(25℃時(shí)溶解度0.019g·mL-1),其用量選為1%,2%,3%;另外,β-CD本身具有一定甜味,因此選取2%蔗糖作為矯味劑進(jìn)行對比。分別量取一定量穿心蓮、蒸槐角、黃柏、人參、蓮子心水煎液及小檗堿溶液,各加入1%,2%,3%的β-CD和2%蔗糖,加熱至約50℃攪拌溶解,放冷至室溫,按上述方法口嘗評價(jià)。采用Grubbs檢驗(yàn),小檗堿、人參加2%,3%的β-CD組數(shù)據(jù)按95%的置信度各剔除1個異常值,剔除異常值后采用t檢驗(yàn)對各組數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,結(jié)果見圖2。由圖2可知,β-CD用量越大,掩味效果越好,其中,3%β-CD對各藥液的掩味效果均有顯著影響,1%β-CD對小檗堿、蒸槐角、穿心蓮、蓮子心有顯著影響。與2%蔗糖相比,1%β-CD對穿心蓮、蒸槐角有顯著影響,2%β-CD對小檗堿有顯著影響,3%β-CD對蓮子心有顯著影響;對小檗堿、蒸槐角,1%β-CD與2%β-CD無顯著差異,對穿心蓮與蓮子心,2%β-CD與3%β-CD有顯著差異,對人參,2%β-CD與3%β-CD有顯著差異。另外,除黃柏外,加入3%β-CD后藥液的苦度值均在較低范圍(0.65±0.05),均屬于幾乎無苦味。說明β-CD可用于苦味中藥的掩味,改善藥物的口感比甜味劑(蔗糖)有明顯優(yōu)勢。3cd與藥物的相互作用苦味受體本身具有疏水性,關(guān)于苦味物質(zhì)與苦味受體的關(guān)系以及當(dāng)苦味受體受到苦味物質(zhì)刺激后轉(zhuǎn)換成苦味感覺主要有空間專一學(xué)說、內(nèi)氫鍵學(xué)說和三點(diǎn)接觸理論3種學(xué)說。其中內(nèi)氫鍵學(xué)說認(rèn)為苦味物質(zhì)分子具有一定的疏水性,三點(diǎn)接觸理論認(rèn)為苦味物質(zhì)有疏水性基團(tuán)。CD是一種具有內(nèi)疏水、外親水的環(huán)狀中空化合物,因此可選擇包合疏水性的苦味基團(tuán),從而減少藥物在攝取過程中與味蕾接觸的藥物數(shù)量,在一定程度上達(dá)到降低苦味的目的。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)β-CD對不同藥物的掩味效果不同,推測可能與藥物苦味成分的分子結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)有關(guān)。CD與藥物制成包合物,對藥物也有一定的要求,藥物分子的原子數(shù)要>5;如果有稠環(huán),稠環(huán)數(shù)應(yīng)<5,藥物相對分子質(zhì)量在100~400,水中溶解度要<10g·