化藥復(fù)方制劑雜質(zhì)來源歸屬研究的基本思路

復(fù)方制劑雜質(zhì)研究工作中需要采用適當?shù)姆椒?，分析確定各雜質(zhì)的來源，對其進行定性研究和歸屬，因為雜質(zhì)限度的確定必須以明確的歸屬為基礎(chǔ)。比如對于毒性雜質(zhì)，需明確歸屬才能嚴格控制，制定合理的限度。即使對于微量的未知雜質(zhì)，由于來源于不同主藥，其可接受的限量可能不同，一般也應(yīng)確定其來源，除非雜質(zhì)的量小于制劑中含量最小藥物可接受的未知雜質(zhì)限量。因此，復(fù)方制劑雜質(zhì)的來源歸屬是雜質(zhì)研究首先要解決的問題之一。從目前國內(nèi)藥品注冊申請人提供的復(fù)方制劑雜質(zhì)（有關(guān)物質(zhì)）研究資料來看，一般只是采用HPLC法對雜質(zhì)進行分離后，簡單地用面積歸一化法或自身對照法（與各主藥峰面積之和或某一主藥峰面積進行對照）對雜質(zhì)總量進行考察。所進行的研究工作不夠深入，確定的雜質(zhì)限度缺乏充分依據(jù)，雜質(zhì)來源歸屬研究亦未得到應(yīng)有的重視。雜質(zhì)研究方面的問題也是復(fù)方制劑審評中要求補充資料的主要問題之一。下面簡單介紹復(fù)方制劑雜質(zhì)來源歸屬研究的基本思路，供注冊申請人進行有關(guān)研發(fā)工作時參考。復(fù)方制劑雜質(zhì)來源歸屬研究，首先需要通過對原料藥化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)、穩(wěn)定性等的分析，初步預(yù)測復(fù)方制劑中可能存在的降解產(chǎn)物（雜質(zhì)的分析預(yù)測），然后通過進一步的試驗，對雜質(zhì)來源進行歸屬。Part1、雜質(zhì)的分析預(yù)測

復(fù)方制劑中雜質(zhì)來源之一是由原料藥制備過程引入的雜質(zhì)（如殘留的反應(yīng)原料、中間體、副反應(yīng)產(chǎn)物等），這部分雜質(zhì)由于在原料藥質(zhì)量標準中已有相應(yīng)的控制方法，故不是制劑雜質(zhì)研究的重點關(guān)注對象。制劑中需重點關(guān)注的雜質(zhì)是降解產(chǎn)物。通過對組成復(fù)方制劑各原料藥化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)、穩(wěn)定性等的分析，可初步預(yù)測復(fù)方制劑中可能存在的降解產(chǎn)物。例如存在酯鍵、酰胺鍵的藥物易于水解，通過結(jié)構(gòu)分析基本可以確定因原料藥水解而產(chǎn)生的雜質(zhì)。另外，原料藥及單方制劑的穩(wěn)定性試驗結(jié)果對于復(fù)方制劑中雜質(zhì)的預(yù)測也具有重要參考意義，原料藥及單方制劑貯藏過程中容易出現(xiàn)的降解產(chǎn)物在復(fù)方制劑中一般也會存在。再如對原料藥在高濕、高溫、光照條件下穩(wěn)定性及降解情況的了解，有助于確定不同制劑工藝（如制劑過程是否接觸水分、是否經(jīng)受高溫處理、是否避光等）可能產(chǎn)生的雜質(zhì)；通過對各原料藥化學(xué)結(jié)構(gòu)的分析，可初步判斷主藥之間是否存在相互作用而產(chǎn)生雜質(zhì)的可能性。Part2通過試驗研究對雜質(zhì)的來源進行歸屬

在對雜質(zhì)分析預(yù)測的基礎(chǔ)上，采用適當?shù)脑囼灧椒?，對?fù)方制劑中雜質(zhì)做進一步的歸屬研究。試驗研究首先應(yīng)當建立雜質(zhì)分離檢測方法。采用的檢測方法應(yīng)能有效分離各雜質(zhì)，方法的靈敏度除應(yīng)符合一般要求外，還要關(guān)注對制劑中含量較小的藥物所產(chǎn)生雜質(zhì)的檢出能力。由于復(fù)方制劑雜質(zhì)數(shù)目多及來源多樣性，采用TLC法難以達到分離檢出要求，故常用HPLC法進行雜質(zhì)的分離檢查。為了有效分離檢出雜質(zhì)，必要時應(yīng)采用梯度洗脫方法，或采用不同的色譜條件對雜質(zhì)進行分離檢查。在研究建立了可行的HPLC方法，對復(fù)方制劑中各主藥、雜質(zhì)、輔料能夠有效分離檢出之后，可采用以下方法對雜質(zhì)進行歸屬研究：分別測定各原料藥、原料藥按處方比例混合物、輔料、原輔料混合物、制劑樣品在確定的雜質(zhì)檢查色譜條件下的HPLC圖譜，對上述圖譜進行對比研究，以確定制劑色譜圖中輔料峰、由各原料藥引入的雜質(zhì)峰。另外，可通過比較各原料藥的HPLC圖譜與原料藥混合物的HPLC圖譜初步確定原料藥之間是否有相互作用；通過比較原料藥混合物的HPLC圖譜、輔料的HPLC圖譜以及原輔料混合物的HPLC圖譜，可初步確定原輔料之間是否有相互作用；通過比較原輔料混合物的HPLC圖譜與制劑的HPLC圖譜，可初步確定制劑過程是否引起主藥的降解和雜質(zhì)的增加。對各原料藥、原料藥按處方比例混合物、輔料、原輔料混合物、制劑分別進行光、熱、濕影響因素試驗，測定試驗前后樣品的HPLC圖譜并進行比較分析，可明確制劑中各藥物在強光、高溫、高濕條件下的主要降解產(chǎn)物，對復(fù)方制劑中的降解產(chǎn)物進行歸屬，并可通過上述比較研究，基本確定藥物與藥物之間、藥物與輔料之間在劇烈條件下是否存在相互作用，是否產(chǎn)生新的雜質(zhì)。對各原料藥、原料藥混合物、輔料、原輔料混合物、制劑分別進行穩(wěn)定性加速試驗（試驗條件一般選擇40℃，相對濕度75％），測定不同時間樣品的HPLC圖譜并進行比較分析，并與制劑長期留樣試驗樣品的測定結(jié)果進行比較。通過這些研究工作，可進一步明確復(fù)方制劑中各雜質(zhì)的歸屬，明確各藥物在加速試驗條件下及一般貯藏條件下的主要降解產(chǎn)物，為確定貯藏條件及質(zhì)量控制重點建立基礎(chǔ)。在上述試驗研究過程中，除需重點考察各試驗樣品的雜