微生物的生長(zhǎng)測(cè)定技術(shù)-微生物的生長(zhǎng)測(cè)定技術(shù)

模塊八微生物的生長(zhǎng)測(cè)定技術(shù)Microbialgrowthdeterminationtechniques任務(wù)一微生物的生長(zhǎng)測(cè)定技術(shù)知識(shí)目標(biāo)：掌握微生物細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定方法熟悉生長(zhǎng)量的測(cè)定方法技能目標(biāo)：能夠通過(guò)微生物的生長(zhǎng)狀況客觀的評(píng)價(jià)培養(yǎng)條件、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響能夠通過(guò)微生物的生長(zhǎng)狀況評(píng)價(jià)不同的抗菌物質(zhì)對(duì)微生物產(chǎn)生抑制或殺死作用的效果內(nèi)容導(dǎo)入單細(xì)胞微生物也有個(gè)體生長(zhǎng)和細(xì)胞分裂繁殖這兩個(gè)過(guò)程。絲狀微生物（霉菌、放線菌）的生長(zhǎng)表現(xiàn)為菌絲體的分枝和延長(zhǎng)；繁殖則產(chǎn)生孢子。微生物的生長(zhǎng)是指微生物個(gè)體或群體細(xì)胞各組成成分按比例、有規(guī)律地不可逆增加的過(guò)程。微生物的生長(zhǎng)從外部表現(xiàn)為個(gè)體數(shù)量的增加和群體生物量的增長(zhǎng)。任務(wù)內(nèi)容一、細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定二、細(xì)胞生物量的測(cè)定一、細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定---計(jì)數(shù)法個(gè)體生長(zhǎng)

個(gè)體繁殖

群體生長(zhǎng)群體生長(zhǎng)=

個(gè)體生長(zhǎng)

+

個(gè)體繁殖

由于微生物的個(gè)體極小，所以常用群體生長(zhǎng)來(lái)反映個(gè)體生長(zhǎng)的狀況所以，微生物的生長(zhǎng)通常是指微生物的群體生長(zhǎng)！！一、細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定---計(jì)數(shù)法在實(shí)際工作中，測(cè)定微生物細(xì)胞生長(zhǎng)的方法可以分為兩類。生長(zhǎng)的

測(cè)定方法

細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定

細(xì)胞生物量的測(cè)定

細(xì)胞總

數(shù)測(cè)定

活菌數(shù)

測(cè)定

鏡檢直接計(jì)數(shù)法比濁法

染色涂片計(jì)數(shù)法

稀釋平板菌落計(jì)數(shù)法液體稀釋培養(yǎng)計(jì)數(shù)法

濃縮法

細(xì)胞干重法

總氮量測(cè)定法

DNA含量測(cè)定法

代謝活性法

一、細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定---計(jì)數(shù)法鏡檢計(jì)數(shù)法適用于單細(xì)胞微生物數(shù)量的測(cè)定。使用細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)。利用直接計(jì)數(shù)法測(cè)定微生物細(xì)胞數(shù)量時(shí)，菌懸液濃度不宜太低或太高（常大于106個(gè)/ml）。優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便，計(jì)數(shù)直觀。1、鏡檢直接計(jì)數(shù)法一、細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定---計(jì)數(shù)法血球計(jì)數(shù)板的構(gòu)造a.平面圖(中間平臺(tái)分為兩半，各刻有一個(gè)方格網(wǎng))b.側(cè)面圖(中間平臺(tái)與蓋玻片之間有高度為0.1mm的間隙)1、鏡檢直接計(jì)數(shù)法一、細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定---計(jì)數(shù)法血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)室的分區(qū)和分格1、鏡檢直接計(jì)數(shù)法一、細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定---計(jì)數(shù)法先要測(cè)定每個(gè)小方格(或中方格)中微生物的數(shù)量，再換算成每毫升菌液中微生物細(xì)胞的數(shù)量。每毫升菌液含菌數(shù)＝每小格酵母細(xì)胞數(shù)×400×10000×稀釋倍數(shù)一、細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定---計(jì)數(shù)法一種快速測(cè)定菌懸液中微生物細(xì)胞數(shù)量的方法。在一定的濃度范圍內(nèi)，微生物細(xì)胞濃度與菌懸液的光密度值成正比，與透光度成反比。因此，可使用分光光度計(jì)來(lái)進(jìn)行測(cè)定。2、比濁法-間接計(jì)數(shù)一、細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定---計(jì)數(shù)法目前廣泛應(yīng)用的活菌計(jì)數(shù)方法。菌液稀釋→接種平板→培養(yǎng)→計(jì)數(shù)3、稀釋平板菌落計(jì)數(shù)法優(yōu)點(diǎn)：傳統(tǒng)計(jì)數(shù)方法。對(duì)設(shè)備要求不高。缺點(diǎn)：操作煩瑣，時(shí)間長(zhǎng)N=每套平板的平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)÷取樣體積數(shù)一、細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定---計(jì)數(shù)法涂布vs.傾注一、細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定---計(jì)數(shù)法適用于測(cè)定在一個(gè)混雜的微生物群中雖不占優(yōu)勢(shì)，但具有特殊生理功能的微生物類群。如水和食品中腸道細(xì)菌數(shù)量的測(cè)定。液體稀釋培養(yǎng)計(jì)數(shù)法的缺點(diǎn)是只能進(jìn)行特殊生理群的測(cè)定，結(jié)果比較粗糙。4、液體稀釋培養(yǎng)計(jì)數(shù)法一、細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定---計(jì)數(shù)法稀釋法原理：連續(xù)稀釋，使一只試管里分配不到一個(gè)微生物如果大多數(shù)平行稀釋管里沒(méi)有微生物生長(zhǎng)，那么有微生物生長(zhǎng)的試管得到的培養(yǎng)物就是純培養(yǎng)物一、細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定---計(jì)數(shù)法步驟：膜過(guò)濾→膜平板培養(yǎng)→計(jì)數(shù)4、薄膜過(guò)濾計(jì)數(shù)法適用范圍：含菌量少的流體樣品二、細(xì)胞生物量的測(cè)定適用于含菌量高或絲狀體的微生物，如絲狀真菌。（單細(xì)胞細(xì)菌，一般1mg干重相當(dāng)于4—5mg濕菌鮮重，或相當(dāng)于4—5×109個(gè)細(xì)胞。）1、細(xì)胞干重法二、細(xì)胞生物量的測(cè)定根據(jù)樣品中菌體蛋白質(zhì)含量計(jì)算微生物重量的方法。原理：2、總氮量測(cè)定法（1）微生物蛋白質(zhì)含量穩(wěn)定（2）氮是蛋白質(zhì)的穩(wěn)定成分(蛋白質(zhì)量=6.25×總含N量)二、細(xì)胞生物量的測(cè)定微生物細(xì)胞的DNA含量比較穩(wěn)定，采用適當(dāng)?shù)臒晒庵甘緞┡c菌體DNA作用，熒光比色或分光光度計(jì)法測(cè)DNA含量。3、DNA含量測(cè)定法二、細(xì)胞生物量的測(cè)定微生物的生理指標(biāo)，如呼吸強(qiáng)度，耗氧量、酶活性、生物熱等與其群體的生長(zhǎng)成正相關(guān)。4、代謝活性法樣品中微生物數(shù)量多或生長(zhǎng)旺盛，這些指標(biāo)愈明顯，因此的可借助特定儀器如瓦勃氏呼吸儀等設(shè)備來(lái)測(cè)定相應(yīng)的指標(biāo)。思考與討論、任務(wù)1、細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定：鏡檢直接計(jì)數(shù)法、比濁法-間接計(jì)數(shù)、稀釋平板