微生物的純種分離技術(shù)-微生物的純種分離技術(shù)

模塊七微生物的分離純化技術(shù)Isolationandpurificationofmicroorganisms任務(wù)二、微生物的純種分離技術(shù)知識(shí)目標(biāo)：掌握常用的純種分離技術(shù)掌握純培養(yǎng)概念技能目標(biāo)：能利用不同的方法進(jìn)行微生物的分離與純化任務(wù)二、微生物的純種分離技術(shù)內(nèi)容導(dǎo)入分離(isolation)：從混雜微生物群體中獲得只含有某一種微生物的過(guò)程稱為微生物分離與純化。任務(wù)內(nèi)容微生物純種分離的原理微生物純種分離的方法一、微生物純種分離的原理和方法微生物樣品多種混雜某種方法分散成單個(gè)微生物平板培養(yǎng)單菌落每個(gè)菌落為純種（純培養(yǎng)）單菌落轉(zhuǎn)接培養(yǎng)純種（純培養(yǎng)）二、微生物分離純化的方法（一）利用固體培養(yǎng)基分離原理：微生物在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)形成的單個(gè)菌落，通常是由一個(gè)細(xì)胞繁殖而成的集合體因此可通過(guò)挑取單菌落而獲得一種純培養(yǎng)二、微生物分離純化的方法（一）利用固體培養(yǎng)基分離在平板上的單個(gè)菌落并不一定保證是純培養(yǎng)因此，純培養(yǎng)的確定除觀察其菌落特征外，還要結(jié)合顯微鏡檢測(cè)個(gè)體形態(tài)特征后才能確定有些微生物的純培養(yǎng)要經(jīng)過(guò)一系列分離與純化過(guò)程和多種特征鑒定才能得到

二、微生物分離純化的方法先將待分離的材料用無(wú)菌水作一系列十倍的稀釋（如1:10、1:100、1:1000…）分別取不同稀釋液少許，與已熔化并冷卻至45℃左右的瓊脂培養(yǎng)基混合，搖勻后，傾入滅過(guò)菌的培養(yǎng)皿中，凝固后，制成可能含菌的瓊脂平板，適宜溫度培養(yǎng)一定時(shí)間即可看出菌落1、稀釋傾注平板法（pourplatemethod）二、微生物分離純化的方法如果稀釋度適宜，在平板表面或瓊脂培養(yǎng)基中就可出現(xiàn)分散的單個(gè)菌落，這個(gè)菌落可能就是由一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞繁殖形成的挑取該單個(gè)菌落，或重復(fù)以上操作數(shù)次，便可得到純培養(yǎng)特點(diǎn)：操作較麻煩，染菌幾率大，對(duì)好氧菌、熱敏感菌效果不好1、稀釋傾注平板法（pourplatemethod）二、微生物分離純化的方法傾注平板培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿二、微生物分離純化的方法將含菌的樣品加入還比較燙的瓊脂培養(yǎng)基，再倒平板，易造成某些熱敏感菌的死亡某些好氧菌會(huì)在瓊脂中間缺氧影響生長(zhǎng)2、稀釋涂布平板法（spreadplatemethod）二、微生物分離純化的方法涂布vs.傾注二、微生物分離純化的方法特點(diǎn)：快速、方便分區(qū)劃線：適用于濃度較大的樣品連續(xù)劃線：適用于濃度較小的樣品。3、平板劃線分離法（streakplatemethod）二、微生物分離純化的方法1.斜線法3.方格法2.曲線法4.放射法5.四格法平板劃線分離的方法二、微生物分離純化的方法稀釋法原理：連續(xù)稀釋，使一只試管里分配不到一個(gè)微生物如果大多數(shù)平行稀釋管里沒(méi)有微生物生長(zhǎng)，那么有微生物生長(zhǎng)的試管得到的培養(yǎng)物就是純培養(yǎng)物（二）利用液體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)二、微生物分離純化的方法梯度稀釋借助于顯微鏡利用顯微挑取器從混雜群體中直接分離單個(gè)細(xì)胞或單個(gè)個(gè)體進(jìn)行培養(yǎng)以獲得純培養(yǎng)的方法特點(diǎn)：對(duì)操作技術(shù)有比較高的要求，多限于高度專業(yè)化的科學(xué)研究中。（三）單細(xì)胞挑取分離法二、微生物分離純化的方法利用選擇培養(yǎng)基直接分離待分離的微生物生長(zhǎng)，其它微生物的生長(zhǎng)被抑制高溫下培養(yǎng)：分離特定的菌株分離固氮菌培養(yǎng)基中不含N：分離抗性菌培養(yǎng)基加抗生素：（四）利用選擇培養(yǎng)基分離二、微生物分離純化的方法特定的環(huán)境條件僅適應(yīng)于該條件的微生物旺盛生長(zhǎng)富集培養(yǎng)待分離微生物在群落中的數(shù)量大大增加從自然界中分離到所需的特定微生物（四）利用選擇培養(yǎng)基分離二、微生物分離純化的方法思考與討論、任務(wù)1、微生物純種分離的原理思考與討論：我學(xué)到什么？任務(wù)1、如何檢驗(yàn)平板