大孔樹脂分離純化三苦滴丸中三七總皂苷的研究

大孔樹脂分離純化三苦滴丸中三七總皂苷的研究

三苦滴丸是三七和苦麥堿的提取物。它具有活血化瘀、通脈痛的功效。用于冠狀動脈粥樣硬化、心絞痛和心血郁結。本文主要對三苦滴丸中的三七總皂苷的純化工藝進行研究,為三苦滴丸的開發(fā)利用提供科學的工藝參數(shù)。1天津農(nóng)藥有限公司三七藥材(長春市宏檢藥店)、D101(天津農(nóng)藥股份有限公司樹脂分公司)、AB-8(南開大學化工廠)、NKA(南開大學化工廠)。2實驗方法2.1乙醇的制備新樹脂加等量乙醇浸泡24h,濕法裝柱,再用乙醇浸泡4h,加乙醇洗至流出液加水不呈白色渾濁為止,再用蒸餾水洗凈乙醇。加入5%鹽酸溶液,浸泡6h,洗脫,再用水洗至中性。加2%氫氧化鈉溶液浸泡6h,洗脫,再用水洗至中性,即得。2.2用熱法提取準品溶液精密稱取三七總皂苷標準品(批號870-200001中國藥品生物制品檢定所)8.26mg置5mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得標準品溶液。精密量取上述標準品溶液20,40,60,80,100μL,分別置10mL具塞試管中,水浴蒸干,另取一支10mL具塞試管做空白,分別精密加入新配置的5%香草醛冰醋酸溶液0.2mL,高氯酸溶液0.8mL,搖勻,置60℃水浴中加熱15min,冰水冷卻,加冰醋酸5mL,搖勻,即得。按分光光度法,在552nm測量上述溶液的吸收度,以濃度為橫坐標,吸光度為縱坐標繪制標準曲線,Y=0.0288X-0.0052,r=0.9998,結果表明,濃度5.5～27.5μg/mL與吸收度線性關系良好。2.3提取乙醇制備組取三七藥材,粉碎成10mm以下顆粒,加4倍量60%乙醇提取3次,每次2h,濾過,合并濾液,回收乙醇,濃縮至1g藥材/mL藥液,備用。2.4測定了三七總羥基糖的含量精密吸取上述供試品溶液40μL,分別置10mL具塞試管中,按“2.2”項操作,測定并計算總皂苷含量。2.5不同樹脂對三公總皂苷的等溫吸附取上述經(jīng)過預處理后的3種樹脂各2份,每份10g,取其中一份干燥至恒重,另一份分別加三七提取液40mL,浸泡24h,前6h每隔1h攪拌1次,濾過,用適量蒸餾水沖洗,與濾液合并定容至50mL量瓶中,測定其中總皂苷的量,計算各種樹脂對三七總皂苷的吸附量和吸附率。2.6皂苷提取液上柱的制備將預處理好的樹脂裝入玻璃層析柱中,將皂苷提取液上柱,控制一定流速,分步收集,當流出液吸光度達上樣液的1/10時,認為皂苷已透過,停止上樣,計算吸附量。3結果3.1孔樹脂的選擇由上述試驗結果可知,D101型樹脂靜態(tài)吸附量明顯高于AB-8、NKA型樹脂,所以我們選擇D101型樹脂為三七提取物純化用樹脂。3.2對樹脂總羥基的動態(tài)吸附過程參數(shù)的研究3.2.1樹高比的確定分別稱取D101濕樹脂40g,裝入不同內(nèi)徑的樹脂柱中,量取高度,計算“徑高比”,取已知含量的三七提取液60mL3份,分別上柱,先用6BV蒸餾水洗脫,再用6BV60%乙醇溶液洗脫,收集300mL洗脫液,測定其中三七總皂苷的量,結果選擇裝樹脂柱的“徑高比”為大約1∶8。3.2.2提取液的上柱分別稱取D101濕樹脂3份,每份40g,濕法裝柱,徑高比“1∶8”,取不同濃度的三七提取液分別上柱(1號:0.5g藥材/mL;2號:1.0g藥材/mL;3號:1.5g藥材/mL),上柱生藥量均為30g,上柱速度2BV/h,用6BV水洗脫雜質(zhì),再用6BV60%乙醇溶液洗脫,收集300mL洗脫液,結果選擇0.5g藥材/mL藥液濃度上樣。3.2.3上柱流速bv/h分別取經(jīng)預處理過的D101大孔濕樹脂40g,共4份,濕法裝柱,精密吸取三七提取液60mL上柱,上柱流速2BV/h。先用6BV蒸餾水洗脫,再用6BV不同濃度乙醇溶液洗脫,分段收集洗脫液,每段50mL,測定其中三七總皂苷的量,結果從洗脫液中總皂苷的總量來看,60%乙醇與70%乙醇洗脫總皂苷的量相差不多,且60%乙醇對生產(chǎn)成本有利,所以我們選擇以60%濃度乙醇為洗脫劑。3.2.4上樣速度的確定取經(jīng)預處理的D101大孔濕樹脂共3份,每份40g,裝樹脂柱,“徑高比”1∶8,吸取三七藥材提取液3份,每份60mL,以不同速度分別上樣,先用6BV蒸餾水洗脫,再用6BV60%乙醇溶液洗脫,洗脫速度6BV/h,收集300mL乙醇洗脫液,測定洗脫液中總皂苷的量,結果選擇上樣速度為2BV/h。3.2.5洗脫時間的確定取經(jīng)預處理的D101大孔濕樹脂共3份,每份40g,裝樹脂柱,“徑高比”1∶8,吸取三七藥材提取液3份,每份60mL,上樣速度2BV/h,分別吸附不同的時間后,先用6BV蒸餾水洗脫,再用6BV60%乙醇溶液洗脫,收集乙醇洗脫液300mL,測定洗脫液中總皂苷的量,結果吸附時間為2h與3h洗脫總皂苷的量相差不大,所以選擇吸附2h。3.2.6洗脫速度對總皂苷量的影響取經(jīng)預處理的D101大孔濕樹脂共3份,每份40g,裝樹脂柱,“徑高比”1∶8,吸取三七藥材提取液3份,每份60mL,上樣速度2BV/h,吸附2h后,先用6BV蒸餾水洗脫,再用6BV60%乙醇溶液分別以不同速度洗脫,收集乙醇洗脫液300mL,測定洗脫液中總皂苷的量,結果4BV/h與6BV/h洗脫總皂苷的量較8BV/h洗脫的量高,但考慮到4BV/h與6BV/h洗脫的量相差不大,為提高生產(chǎn)周期選擇洗脫速度為6BV/h。3.2.7洗脫溶劑用量取經(jīng)預處理過的D101大孔濕樹脂40g,濕法裝柱,精密吸取三七提取液61.5mL上柱,提取液上柱濃度為0.5g藥材/mL,上柱流速2BV/h,吸附2h,用蒸餾水洗脫,連續(xù)收集洗脫液,每50mL為1份,當洗脫液收集到第6份時已接近無色,將洗脫液濃縮、干燥至恒重,結果當連續(xù)收集洗脫液至第6份時,干燥物重量極少,說明已經(jīng)基本洗脫完全,所以洗脫用蒸餾水用量為250mL。即每40g濕樹脂吸附藥材提取液后用5BV水洗脫。4脂質(zhì)樹純化