酶制劑發(fā)酵產(chǎn)品檢驗-蛋白酶活力測定

子情境：酶制劑發(fā)酵產(chǎn)品檢驗-

蛋白酶活力測定蛋白質(zhì)：由20多種天然氨基酸通過肽鍵（―CO―NH―）連接成為多肽，再由多肽聚合成生物大分子的物質(zhì)。外源蛋白質(zhì)—胞外蛋白酶內(nèi)源蛋白質(zhì)—溶酶體中的蛋白酶蛋白酶：催化蛋白質(zhì)類化合物中肽鍵水解，分解蛋白質(zhì)生成胨、腙、多肽、氨基酸的一類酶的總稱。蛋白酶：催化蛋白質(zhì)類化合物中肽鍵水解，分解蛋白質(zhì)生成胨、月示、多肽、氨基酸的一類酶的總稱。存在：動物內(nèi)臟、

植物莖葉、果實

微生物細胞不同種類的生物，分泌蛋白酶的種類和性質(zhì)不同，因此，利用外源蛋白質(zhì)類物質(zhì)的能力也不同。人體內(nèi)外源蛋白質(zhì)的消化過程食物中的大分子蛋白質(zhì)經(jīng)胃蛋白酶分解成

較小分子的多肽經(jīng)十二指腸分泌胰蛋白酶、糜蛋白酶、羧肽酶和氨肽酶等分解成短鏈的肽和部分游離氨基酸。

短鏈的肽經(jīng)羧肽酶和氨肽酶分解成游離氨基酸。外源蛋白質(zhì)經(jīng)上述消化器官內(nèi)各種酶的協(xié)同作用，最后全部轉(zhuǎn)變?yōu)橛坞x氨基酸。蛋白酶分類：按來源分類（1）動物蛋白酶:如胰蛋白酶、胃蛋白酶、凝乳酶（2）植物蛋白酶：木瓜蛋白酶：最適pH5-7，作用pH范圍3-9；最適溫度65℃，作用溫度范圍30-70℃，生成產(chǎn)物：氨基酸。菠蘿蛋白酶、無花果蛋白酶（3）微生物蛋白酶：霉菌蛋白酶、細菌蛋白酶蛋白酶分類：按蛋白酶作用位點分（1）內(nèi)肽酶(endopeptidase)：從蛋白質(zhì)或多肽內(nèi)部水解肽鍵產(chǎn)生各種短肽的酶。（2）外(端)肽酶(exopeptidase)：從蛋白質(zhì)或多肽一端水解肽鍵，每次水解放出一個氨基酸。又分為氨肽酶、羧肽酶。

（3）二肽酶：水解二肽中的肽鍵，生成單個氨基酸的酶。

蛋白酶活力測定方法：紫外分光光度法原理：酶蛋白在一定溫度與pH條件下，水解酪蛋白底物，然后加入三氯乙酸中止酶反應(yīng)，并使未水解的酪蛋白沉淀除去，濾液對紫外光有吸收，可用紫外分光光度計法測定。步驟一、標準曲線的制作管號1mg/mL酪氨酸標準液（mL）蒸餾水（mL）酪氨酸含量（μg、K）吸光度（A540nm）0010119

228

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446555

664773862用紫外分光光度計測定其275nm吸光度，繪制標準曲線，酪氨酸微克數(shù)（K）。并計算K值。123空白酶2ml1、2、3、空白酪蛋白預(yù)熱（5min）40℃恒溫水浴步驟二、蛋白酶活性測定過程1、2、3加入酪蛋白溶液2ml40℃恒溫水浴，計時、保溫10min加入三氯乙酸4ml搖勻、靜置15min離心分離或濾紙過濾，取上清，測吸光度1、2、31、2、3空白管處理空白酶2ml加三氯乙酸4ml再加酪蛋白溶液2ml靜置15min，離心分離或濾紙過濾，取上清，測吸光度空白空白結(jié)果計算式中x---樣品的酶活力，U/g；A---試樣溶液的平均吸光度；K---吸光常數(shù)，即為標準曲線中直線斜率的倒數(shù)；8---反應(yīng)試劑的總體積，ml；2---吸取酶液2ml；10--反應(yīng)時間10min；n---稀釋倍數(shù)；E---紫外法與福林酚法的換算系數(shù)（中性、堿性蛋白酶系數(shù)為0.50，