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情景:法醫(yī)在某重大命案的嫌疑人K的牛仔褲和襯衣上發(fā)現(xiàn)了極少量可疑血跡,但需進(jìn)一步確認(rèn)該血跡是否來(lái)自本案的被害者。。。方案1:分析可疑血跡的血型是否與被害者血型吻合方案2:提取可疑血跡中的DNA,分析DNA是否與被害者的DNA吻合。方案3:嚴(yán)刑拷打!??血液的組成成分血漿(55%)血細(xì)胞(45%)人體白細(xì)胞有細(xì)胞核,能夠提取DNA。人體血細(xì)胞的組成人體成熟紅細(xì)胞無(wú)核故無(wú)法提取DNA血小板沒(méi)有完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu)無(wú)法提取DNA結(jié)論:從凝血中提取DNA理論上可行需要靈敏度較高的提取方法本節(jié)課題:能否利用較為簡(jiǎn)單的提取方法和設(shè)備嘗試對(duì)細(xì)胞中DNA進(jìn)行初步的粗提取?相對(duì)易于獲取DNA含量相對(duì)較高實(shí)驗(yàn)材料選取原則:普通洋蔥體細(xì)胞染色體2N=16四倍體洋蔥體細(xì)胞染色體4N=32多倍體植物DNA含量更高,有利于提取。染色體數(shù)目加倍多倍體草莓野生草莓相對(duì)易于獲取DNA含量相對(duì)較高實(shí)驗(yàn)材料的選取原則:下一步應(yīng)該怎樣對(duì)實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行處理?思考:DNA在細(xì)胞內(nèi)的存在部位?主要在細(xì)胞核少量位于線粒體及葉綠體
要提取DNA,應(yīng)當(dāng)怎樣處理細(xì)胞?破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性(破壞細(xì)胞膜及核膜)洗滌劑的主要成分是具有去垢作用的表面活性劑。這類化學(xué)成分可通過(guò)破壞脂雙層和膜蛋白使生物膜瓦解,將DNA從細(xì)胞核內(nèi)釋放出來(lái)。洗滌劑瓦解細(xì)胞膜的示意圖向雞血中加入一定量的檸檬酸鈉以及蒸餾水,同時(shí)用玻璃棒攪拌,使雞血細(xì)胞吸水漲破。過(guò)濾,并收集濾液思考:DNA在細(xì)胞內(nèi)的存在部位?主要在細(xì)胞核少量位于線粒體及葉綠體
要提取DNA,應(yīng)當(dāng)怎樣處理細(xì)胞?破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性過(guò)濾后的濾液中是否即含有較為純凈的DNA?(破壞細(xì)胞膜及核膜)DNA和蛋白質(zhì)是染色體的主要成分思考:DNA在細(xì)胞內(nèi)的存在部位?主要在細(xì)胞核少量位于線粒體及葉綠體
要提取DNA,應(yīng)當(dāng)怎樣處理細(xì)胞?破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性過(guò)濾后的濾液中是否即含有較為純凈的DNA?否大部分DNA和蛋白質(zhì)結(jié)合形成染色體(破壞細(xì)胞膜及核膜)分析:如何將與DNA結(jié)合的蛋白質(zhì)去除就成為粗提取DNA的關(guān)鍵所在!資料一:酶的專一性:一種酶只能作用于一種或一類底物有效成分:蛋白酶功能:催化肉類中的膠原蛋白等蛋白質(zhì)水解,使肉口感柔嫩、味道鮮美。木瓜、菠蘿等水果中也含有豐富的蛋白酶。
資料二:DNA是極性分子,不溶于酒精等非極性溶劑,但是部分蛋白質(zhì)則可溶于酒精。加入95%冷酒精1.向溶解有DNA的溶液中加入等體積的、冷卻的95%酒精溶液,靜置。2.靜置后溶液中出現(xiàn)白色絲狀物,即粗提取獲得的DNA。使用冷酒精作用:充分降低分子熱運(yùn)動(dòng)速率,有利于DNA分子凝集析出。抑制核酸水解酶的活性,盡可能多的提取DNA。DNA在NaCl溶液中的溶解度曲線資料三:DNA和蛋白質(zhì)在NaCl溶液中的溶解度不同注意:此時(shí)提取的DNA中仍然存有一定量的雜質(zhì),還需進(jìn)一步提純。DNA+二苯胺
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