清疣Ⅱ號洗劑對SiHa細胞HPV E7蛋白及PCNA表達影響的實驗研究

清疣Ⅱ號洗劑對SiHa細胞HPVE7蛋白及PCNA表達影響的實驗研究清疣Ⅱ號洗劑對SiHa細胞HPVE7蛋白及PCNA表達影響的實驗研究

摘要：人乳頭瘤病毒（HPV）感染是導致宮頸癌的主要原因之一，其感染帶來的主要后果是細胞增殖的異常及細胞周期調控的紊亂。本實驗旨在探究清疣Ⅱ號洗劑對HPV感染細胞株SiHa中HPVE7蛋白和細胞增殖標志物PCNA表達的影響。實驗結果顯示，清疣Ⅱ號洗劑處理能夠抑制SiHa細胞系中HPVE7蛋白和PCNA的高表達，從而有效抑制細胞的異常增殖，為臨床治療和預防HPV感染相關疾病提供了新的思路和方法。

關鍵詞：清疣Ⅱ號洗劑；SiHa細胞；HPVE7蛋白；PCNA；細胞增殖

引言

宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤之一，是由人乳頭瘤病毒（HPV）感染引起的。據統(tǒng)計，全球每年約有50萬新發(fā)宮頸癌病例，其中大多數發(fā)生在發(fā)展中國家（1）。HPV感染病毒通過DNA病毒家族感染上皮細胞，其中HPV類型16和18感染最為常見，它們的E6和E7蛋白是引起宮頸癌發(fā)展的主要原因。特別是E7蛋白的過度表達可以抑制細胞周期調控蛋白pRb，從而導致細胞逃脫DNA損傷的檢測和修復，以及異常細胞增殖（2）。

清疣Ⅱ號洗劑是一種由中草藥提取物研制的藥物，已被廣泛應用于宮頸上皮內瘤變的臨床治療。前期研究表明，清疣Ⅱ號洗劑能夠有效抑制HPV感染細胞的增殖，減少異常細胞的數量（3）。然而，清疣Ⅱ號洗劑對HPVE7蛋白和細胞增殖標志物PCNA的影響及其機制仍不清楚。

材料與方法

細胞培養(yǎng)

本實驗使用人宮頸癌細胞株SiHa，購自xx生物科技公司。SiHa細胞在DMEM培養(yǎng)基中添加10%胎牛血清（FBS），以37°C、5%CO2的條件下培養(yǎng)。

實驗設計

將SiHa細胞分為對照組和清疣Ⅱ號洗劑處理組。對照組細胞在培養(yǎng)基中添加相同體積的PBS，處理組細胞在培養(yǎng)基中添加清疣Ⅱ號洗劑，濃度為xμg/ml。細胞在孵化箱中培養(yǎng)24小時后，收集細胞進行進一步的分析。

蛋白質提取與Westernblot分析

用RIPA溶液裂解細胞，收集上清液作為蛋白提取液。通過BCA法測定蛋白的濃度，將蛋白樣品加入SDS膠，電泳分離，然后轉膜到PVDF膜上。膜上的蛋白質進行非特異性結合的阻斷，再與特異性抗體孵育，最后使用ECL系統(tǒng)檢測蛋白的表達水平。

細胞增殖分析

細胞增殖分析采用CCK-8試劑，根據試劑說明書操作。將不同時間點收集的細胞加入含有CCK-8試劑的96孔板中，孵育1小時后，使用酶標儀讀取450nm的吸光度值。

結果

清疣Ⅱ號洗劑處理后，SiHa細胞中HPVE7蛋白的表達明顯下調。Westernblot結果顯示，清疣Ⅱ號洗劑處理組中HPVE7蛋白的表達水平較對照組明顯降低。同時，清疣Ⅱ號洗劑處理組的SiHa細胞中PCNA蛋白的表達也顯著降低。

細胞增殖分析結果顯示，清疣Ⅱ號洗劑處理后，SiHa細胞的增殖能力明顯降低。處理組的細胞增殖曲線相對于對照組下移，說明清疣Ⅱ號洗劑能夠有效抑制SiHa細胞的異常增殖。

討論

本實驗結果表明，清疣Ⅱ號洗劑處理能夠降低HPV感染細胞中HPVE7蛋白的表達，抑制細胞的異常增殖。HPVE7蛋白的過度表達可以抑制細胞周期調控蛋白pRb，從而導致細胞逃脫DNA損傷的檢測和修復。清疣Ⅱ號洗劑可能通過抑制HPVE7蛋白的表達，恢復細胞周期調控，抑制細胞的異常增殖。此外，清疣Ⅱ號洗劑還能降低SiHa細胞中PCNA的表達，PCNA是細胞增殖的標志物，其下調可能是清疣Ⅱ號洗劑抑制細胞增殖的一個重要機制。

結論

本實驗結果表明清疣Ⅱ號洗劑對SiHa細胞中HPVE7蛋白及PCNA的表達具有顯著的影響，能夠有效抑制細胞的異常增殖。這為清疣Ⅱ號洗劑在臨床治療和預防HPV感染相關疾病中的應用提供了新的思路和方法。然而，清疣Ⅱ號洗劑對其他細胞株和多種HPV類型的作用還需要進一步研究，以及對其作用機制的進一步探究。通過深入研究，有望為臨床治療和預防宮頸癌等相關疾病提供有效的新藥和新方法綜合以上實驗結果，可以得出結論：清疣Ⅱ號洗劑處理能夠有效抑制HPV感染細胞的異常增殖，降低HPVE7蛋白的表達，恢復細胞周期調控，并降低PCNA的表達。這為清疣Ⅱ號洗劑在臨床治療和預防HPV感染相關