方法學驗證中各項指標的深度剖析

方法學驗證中各項指標的深度剖析謝沐風上海市藥品檢驗所xiemufeng@一、線性試驗主成分含量測定以測定濃度為100%，50%~120%之間選取5個點即可。

溶出（釋放）度測定以釋放量的10%～120%間選取5個點即可。

雜質(zhì)含量用雜質(zhì)對照品準確測定以雜質(zhì)限度為100%，50%~120%之間選取5個點即可。測定結(jié)果：

1）闡述如何看待截距和斜率、如何應用。

2）誤差在哪里，應用時的注意事項。

3）為什么沒有不成線性的？通常C、H、O、N結(jié)構(gòu)，紫外監(jiān)測器決定。

個別化學鍵所致。梯度洗脫時，有時會出現(xiàn)不成線性。

4）都成線性、為何還要做？最小二乘法的原理知曉。唑來磷酸結(jié)構(gòu)式引申使用：

1）有關(guān)物質(zhì)測定歸一化法和自身對照法的相互妙用。

2）緩釋制劑溶出度測定，對照品濃度設定為中間濃度。舉例說明。

3）回收率試驗為何做80%~120%即可？亦及樣品濃度與對照品濃度接近到何等程度的理解。

4）國內(nèi)只注重相關(guān)系數(shù)，不注重截距。二、精密度試驗重復性試驗：連續(xù)進樣6次。

中間精密度試驗和重現(xiàn)性試驗通過“耐用性試驗中的溶液穩(wěn)定性試驗”來體現(xiàn)。

濃度極低時才會不理想，加大進樣量。

色譜峰形極為重要，對稱性、柱效等參數(shù)。加大柱溫、增加流動相中有機相比例，使被測物質(zhì)峰盡快出峰。三、準確度試驗用回收率來衡量作法：在80%~120%間選擇3點或5點，原因是由外標一點法決定的。

已知雜質(zhì)、且有雜質(zhì)對照品的，可采用加入法，即加樣回收率來評價。

一般情況下，只要空白輔料無干擾，回收率均是良好的！四、專屬性有關(guān)物質(zhì)為主，其他檢測項目（含量）基本上均參照有關(guān)物質(zhì)。

有關(guān)物質(zhì)的驗證，采用中間體和降解產(chǎn)物（確認結(jié)構(gòu)后人工合成）來驗證與主成分的分離。

系統(tǒng)適用性試驗的配制方法：

在100％濃度的主成分溶液中加入1%濃度的雜質(zhì)對照品，以模擬樣品中有可能存在的狀態(tài)。

介紹配制方法

——先配制雜質(zhì)貯備液，再用供試品溶液（或濃的對照品溶液）來稀釋，簡便、易行！專屬性試驗驗證圖譜存在問題——配制相同濃度，測定樣品時，主成分峰驟然加大，將雜質(zhì)峰覆蓋。

強破壞試驗的目的：

驗證藥品在遭遇了極端的氣候環(huán)境條件下產(chǎn)生的雜質(zhì)，在所建立的色譜條件下是否能夠分離、測定?！駲z測波長的確定

涉及到各被檢測物質(zhì)在該波長下的響應因子是否相同，即所謂重量校正因子的問題。（f=A雜質(zhì)/A被測成分）

選取主成分與各雜質(zhì)具有相同紫外吸收的波長（f=1.0）。

選取各雜質(zhì)紫外吸收大于主成分紫外吸收的波長（f>1.0），這樣可更加嚴格控制雜質(zhì)的限度。

如選取各雜質(zhì)紫外吸收小于主成分紫外吸收的波長，應必須加入重量校正因子（f<1.0），否則將得到錯誤的判斷。介紹該項檢測的由來和歷史背景

要看主峰里是否有雜質(zhì)，如何判斷？但需注意DAD檢測器的局限性，介紹“土辦法”！

結(jié)果：目前從來沒有推翻現(xiàn)行色譜條件的。意義在哪里。如何應用，拿到只是“走形式”？最小峰面積的設定

●

其設定，不是絕對值，而是相對值。

●英國藥典中有明確的說明：凡有關(guān)物質(zhì)的檢測采用HPLC法測定時，均規(guī)定舍棄對照溶液主峰面積幾分之幾的峰面積。普通樣品測定時，通常為1/10~1/20（即相當于樣品測定濃度的0.1%~0.05%）。如規(guī)定雜質(zhì)限度為1.0%，對照溶液峰面積為10000，那么，最小峰面積可考慮設定為1000~500左右。新藥穩(wěn)定性考核時，可設定到0.01%的最小峰面積。

●原料藥銷售與購買的合同中，為確保雙方達成一致意見，此點應予以重視。強力破壞試驗

●水破壞取原料適量，加水溶解后，在90℃放置24小時。

●氧化破壞取原料適量，用5%過氧化氫溶液溶解后，在90℃放置24小時。

●強堿破壞取原料適量，用1mol/L氫氧化鈉溶液溶解后，在90℃放置24小時。

●強酸破壞取原料適量，加1mol/L鹽酸溶液溶解后，在90℃放置24小時。

●高溫破壞取原料適量，依據(jù)各自品種的熔點不同，在高溫下破壞至外觀性狀改變

●強光破壞取原料適量，置紫外燈下照射