蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)Western Blot_第1頁(yè)
蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)Western Blot_第2頁(yè)
蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)Western Blot_第3頁(yè)
蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)Western Blot_第4頁(yè)
蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)Western Blot_第5頁(yè)
已閱讀5頁(yè)，還剩6頁(yè)未讀， 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)（WesternBlotting）一實(shí)驗(yàn)原理

WesternBlotting是用來(lái)檢測(cè)蛋白質(zhì)的一種技術(shù)。首先將含有待測(cè)蛋白的蛋白質(zhì)混合物進(jìn)行凝膠電泳分離，然后將已經(jīng)分離的蛋白質(zhì)通過(guò)電泳技術(shù)從凝膠轉(zhuǎn)移到固體支持物上，這一固體支持物目前常為硝酸纖維素薄膜。隨后以待測(cè)蛋白質(zhì)上抗原決定簇特異性的抗體（稱為第一抗體）為探針，與固體支持物上的蛋白質(zhì)進(jìn)行免疫反應(yīng)，最后用偶聯(lián)有辣根過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酯酶的抗第一抗體的抗體（第二抗體）與第一抗體進(jìn)行免疫反應(yīng)，只有與第一抗體特異性結(jié)合的待測(cè)蛋白才能與第二抗體發(fā)生免疫反應(yīng)。在有辣根過(guò)氧化物酶的底物用顯色劑存在時(shí)就會(huì)出現(xiàn)顏色反應(yīng)，結(jié)合有第一抗體、第二抗體的待測(cè)蛋白，通過(guò)顏色反應(yīng)即能顯現(xiàn)出來(lái)。一實(shí)驗(yàn)原理

電泳將蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到固體支持物上是通過(guò)電轉(zhuǎn)移儀器完成的。它是將固體支持物面對(duì)陽(yáng)極、凝膠面對(duì)陰極，二者結(jié)合在一起，然后將外面二側(cè)用Whatman3MM濾紙結(jié)合，形成“三明治”結(jié)構(gòu)，放入電轉(zhuǎn)移儀器上，加入電泳緩沖液，通上電源后，蛋白質(zhì)即可從凝膠上轉(zhuǎn)移到固體支持物上。一實(shí)驗(yàn)原理

其定量關(guān)系符合以下公式：Ve=Vo+KV1Ve：某一溶質(zhì)的洗脫體積Vo：層析柱的外水體積Vi：層析柱的內(nèi)水體積K：某一溶質(zhì)的分配系數(shù)1．試劑電轉(zhuǎn)移緩沖液pH8.339mM甘氨酸4.8mMTris堿0.037%SDS20%甲醇混合2.9克甘氨酸，5.8克Tris,0.37克SDS,加200ml甲醇，定容到1000ml.封

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽，若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫(kù)網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間，僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理，對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容，請(qǐng)與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論