隱球菌臨床推廣課件

隱球菌病感染診斷現(xiàn)狀一

產(chǎn)品介紹二

適用科室及臨床意義三

相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)四隱球菌病感染診斷現(xiàn)狀一產(chǎn)品介紹二適用科室及臨床意義三隱球菌為圓形菌體，外周有莢膜，內(nèi)有反光孢子，但無(wú)菌絲。隱球菌屬已知有37個(gè)不同的種，但具致病性的多為新型隱球菌，其特點(diǎn)是菌體由一層很厚的多糖莢膜所包被。

新型隱球菌主要包括新生變種、格特變種等簡(jiǎn)介隱球菌為圓形菌體，外周有莢膜，內(nèi)有反光孢子，但無(wú)菌絲。簡(jiǎn)流行病學(xué)38個(gè)ICUsof27個(gè)意大利醫(yī)院384例真菌感染(318例侵襲性念珠菌感染；63例霉菌感染；3例隱球菌感染)TortoranoAMetal.Mycoses.2011,55:73–79.流行病學(xué)38個(gè)ICUsof27個(gè)意大利醫(yī)院TortorHIV感染者器官移植患者接受大劑量皮質(zhì)類固醇或單克隆抗體（如阿侖單抗、英夫利昔單抗）和/或其他免疫抑制劑治療的患者其他無(wú)基礎(chǔ)疾病的患者JohnR.Perfect,etc.ClinicalInfectiousDiseases2010;50:291–322

美國(guó)感染病學(xué)會(huì)的“隱球菌病治療臨床實(shí)踐指南（2010年更新）”中指出，隱球菌病的易感人群主要包括：宿主因素HIV感染者JohnR.Perfect,etc.Cl流行病學(xué)隨著AIDS患者的增多，各種機(jī)會(huì)性感染的發(fā)病率也隨之上升，新型隱球菌成為繼白色念珠菌之后最常見(jiàn)的機(jī)會(huì)性感染真菌，其在HIV中的感染率已達(dá)8.5%。隱球菌性腦膜炎發(fā)生率和死亡率在發(fā)達(dá)國(guó)家達(dá)到10-30%，

在發(fā)展中國(guó)家可達(dá)到50-100%。早期隱球菌感染臨床表現(xiàn)缺乏特異性，腦脊液變化不典型，但是當(dāng)發(fā)展為隱球菌性腦膜炎時(shí)，死亡率可達(dá)到20%。早期、快速、準(zhǔn)確地診斷很有必要流行病學(xué)隨著AIDS患者的增多，各種機(jī)會(huì)性感染的發(fā)病率也隨之現(xiàn)有檢測(cè)手段墨汁染色（菌體）真菌培養(yǎng)（活菌）ELISA（莢膜多糖抗原）乳膠凝集法（莢膜多糖抗原）膠體金法（莢膜多糖抗原）現(xiàn)有檢測(cè)手段墨汁染色（菌體）1.印度墨汁染色：

敏感性差，陽(yáng)性檢出率很低2.腦脊液或血液培養(yǎng)（金標(biāo)準(zhǔn)）：

陽(yáng)性檢出率低，培養(yǎng)（2-10天）及鑒定時(shí)間長(zhǎng)，易誤診3.抗原檢測(cè)試驗(yàn)：

腦脊液和血清樣本抗原檢測(cè)的敏感性可達(dá)到97%和87%*，能實(shí)現(xiàn)早期快速診斷*TylerWarkentien,MD.IntJSTDAIDS.2010October;21(10):679–684.現(xiàn)有檢測(cè)手段1.印度墨汁染色：*TylerWarkentien,隱球菌莢膜多糖抗原

由3種不同的單糖聚合而成是引起病理變化的主要毒性因子在菌體生長(zhǎng)和繁殖過(guò)程中，GXM不斷分泌到胞外通過(guò)發(fā)揮免疫抑制作用和免疫調(diào)理作用影響宿主免疫系統(tǒng)OscarZaragoza,etc..AdvApplMicrobiol.2009,68:133–216隱球菌莢膜多糖抗原GXM(Glucuronoxylomannan,GXM)：莢膜多糖抗原是隱球菌特有的分泌物，可以作為隱球菌感染的診斷依據(jù)隱球菌莢膜多糖抗原由3種不同的單糖聚合而成OscarZ

隱球菌病感染診斷現(xiàn)狀一

產(chǎn)品介紹二

臨床意義及適用科室三

相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)四隱球菌病感染診斷現(xiàn)狀一產(chǎn)品介紹二臨床意義及適用科室三隱球菌抗原檢測(cè)試劑盒（膠體金法）原理隱球菌抗原檢測(cè)試劑盒（膠體金法）原理隱球菌抗原檢測(cè)試劑盒（膠體金免疫層析法）試劑盒組成隱球菌抗原檢測(cè)試紙條50條樣本稀釋液滴定液陽(yáng)性對(duì)照穩(wěn)定性/儲(chǔ)存方法2年有效期室溫儲(chǔ)存隱球菌抗原檢測(cè)試劑盒（膠體金免疫層析法）試劑盒組成特點(diǎn)無(wú)需樣本預(yù)處理10分鐘得到結(jié)果定性或半定量測(cè)定結(jié)果客觀血清，腦脊液，血漿特點(diǎn)無(wú)需樣本預(yù)處理樣本收集及制備按照無(wú)菌操作收集腦脊液、血漿和血清樣本。樣本最多可以在2-8℃放置72小時(shí)。不反復(fù)凍融的情況下，樣本可以在-20℃以下保存更長(zhǎng)時(shí)間。樣本在運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)保持在2-8℃或者-20℃以下。樣本收集及制備按照無(wú)菌操作收集腦脊液、血漿和血清樣本。定性檢測(cè)操作步驟簡(jiǎn)單5步，10分鐘得到結(jié)果定性檢測(cè)操作步驟簡(jiǎn)單5步，10分鐘得到結(jié)果ELISA（莢膜多糖抗原）不能檢測(cè)到的真菌：隱球菌和接合菌（包括毛霉菌、 根霉菌等）2、向1號(hào)試管中加入4滴樣本稀釋液。是引起病理變化的主要毒性因子吞噬細(xì)胞將菌吞噬消化后釋放1,3-β-D-葡聚糖到血液中樞神經(jīng)系統(tǒng)隱球菌病-神經(jīng)內(nèi)科IntJSTDAIDS.血清型靈敏度(ng隱球菌抗原/ml)樣本在運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)保持在2-8℃或者-20℃以下。1、以1:5作為初始稀釋濃度，依次1:2稀釋至1:2560。是引起病理變化的主要毒性因子AdaptedfromKozelandBauman,ExpertOpin.隱球菌抗原檢測(cè)試劑盒（膠體金免疫層析法）ELISA（莢膜多糖抗原）Perfect,etc.

注意：若對(duì)照條帶未出現(xiàn)，則說(shuō)明該檢測(cè)無(wú)效，應(yīng)重新檢測(cè)。定性檢測(cè)結(jié)果ELISA（莢膜多糖抗原）注意：若對(duì)照條帶未出現(xiàn)，則半定量檢測(cè)操作步驟1、以1:5作為初始稀釋濃度，依次1:2稀釋至1:2560。分別放置于10個(gè)微離心管中并編號(hào)1-10。2、向1號(hào)試管中加入4滴樣本稀釋液。3、分別向標(biāo)號(hào)2-10的試管中加入2滴滴定液。4、將40μL樣本加入1號(hào)試管并混勻。5、從1號(hào)試管中吸取80μL樣本混合液轉(zhuǎn)移至2號(hào)試管并混勻，依次進(jìn)行稀釋直至10號(hào)試管。6、10號(hào)試管中吸取80μL樣本混合液并丟棄以保證試管內(nèi)最終體積為80μL。7、將試紙條的白端分別沒(méi)入試管中。8、等待10分鐘，讀取并記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。半定量檢測(cè)操作步驟1、以1:5作為初始稀釋濃度，依次1半定量檢測(cè)操作步驟半定量檢測(cè)操作步驟半定量檢測(cè)操作步驟-2半定量檢測(cè)操作步驟-2半定量檢測(cè)(滴度)結(jié)果對(duì)于半定量滴定檢測(cè)，患者的滴度應(yīng)報(bào)告為產(chǎn)生陽(yáng)性結(jié)果的最高稀釋度。半定量檢測(cè)(滴度)結(jié)果對(duì)于半定量滴定檢測(cè)，患者的滴度質(zhì)量控制陽(yáng)性對(duì)照：將1滴樣本稀釋液加入試管中，再加入1滴隱球菌抗原陽(yáng)性對(duì)照。陰性對(duì)照為：將2滴樣本稀釋液加入試管中。分別插入試紙條，10分鐘后讀取結(jié)果。依據(jù)本地、國(guó)家的法規(guī)及認(rèn)證機(jī)構(gòu)的指導(dǎo)方針或要求，可能需要做額外的質(zhì)控檢測(cè)。質(zhì)量控制陽(yáng)性對(duì)照：將1滴樣本稀釋液加入試管中，再加入1膠體金法和培養(yǎng)/墨汁染色對(duì)比CrAgLFApackageinsert(IMMY)靈敏度特異性膠體金法試劑盒95.83%99.84%墨汁染色86.39%100.00%真菌培養(yǎng)60.72%100.00%膠體金法和培養(yǎng)/墨汁染色對(duì)比CrAgLFApackage膠體金法和ELISA/乳膠凝集法對(duì)比血清型靈敏度(ng隱球菌抗原/ml)A

(新型隱球菌)B

(哥特隱球菌)C(哥特隱球菌)D(新型隱球菌)IMMY膠體金法1198IMMY乳膠凝集法284738062ELISA2823>2,000770其他廠家乳膠凝集法193794054TRKozel,Clin.VaccineImmunol.(2011)18:1292TRKozel,8thInternationalConferenceonCryptococcusandCryptococcosis(2011)靈敏度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他方法膠體金法和ELISA/乳膠凝集法對(duì)比血清型靈敏度(ng隱球隱球菌抗原分布時(shí)間感染血液腦脊液肺部腦膜炎肺以外無(wú)癥狀癥狀膠體金法隱球菌抗原檢測(cè)的其他方法AdaptedfromKozelandBauman,ExpertOpin.Med.Diagn.(2012)6:245隱球菌抗原分布時(shí)間感染血液腦脊液肺部腦膜炎肺以外無(wú)癥狀癥狀膠膠體金法和乳膠凝集法對(duì)比

膠體金法乳膠凝集法檢測(cè)時(shí)間10分鐘長(zhǎng)達(dá)60分鐘樣品預(yù)處理無(wú)需需要(蛋白酶處理血清)樣品類型血清,腦脊液,血漿血清和腦脊液儲(chǔ)存室溫冷藏膠體金法和乳膠凝集法對(duì)比

膠體金法乳膠凝集法檢測(cè)時(shí)間10分ELISA（莢膜多糖抗原）隱球菌病感染診斷現(xiàn)狀兒童由于免疫系統(tǒng)不健全，也容易被隱球菌感染，一般兒童的腦脊液樣本都會(huì)做隱球菌篩查隱球菌抗原檢測(cè)試劑盒（膠體金免疫層析法）隱球菌病感染診斷現(xiàn)狀CrAgLFApackageinsert(IMMY)Perfect,etc.*TylerWarkentien,MD.VaccineImmunol.陽(yáng)性檢出率低，培養(yǎng)（2-10天）及鑒定時(shí)間長(zhǎng)，易誤診隱球菌莢膜多糖抗原GXM(Glucuronoxylomannan,GXM)：3、分別向標(biāo)號(hào)2-10的試管中加入2滴滴定液。乳膠凝集法（莢膜多糖抗原）對(duì)于半定量滴定檢測(cè)，患者的滴度應(yīng)報(bào)告為產(chǎn)生陽(yáng)性結(jié)果的最高稀釋度。隱球菌莢膜多糖抗原GXM(Glucuronoxylomannan,GXM)：

隱球菌病感染診斷現(xiàn)狀一

產(chǎn)品介紹二

適用科室及臨床意義三

相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)四ELISA（莢膜多糖抗原）隱球菌病感染診斷現(xiàn)狀一產(chǎn)品介紹適用科室及臨床意義新型隱球菌感染可發(fā)生于全身多個(gè)部位，最常見(jiàn)的感染主要發(fā)生在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、肺部、皮膚等。適用科室及臨床意義新型隱球菌感染可發(fā)生于全身多個(gè)部位，最常見(jiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)隱球菌病-神經(jīng)內(nèi)科隱球菌侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見(jiàn)，包括腦膜炎或亞急性腦膜炎、散播型腦膜炎等。

臨床癥狀：首發(fā)癥狀間歇性頭痛、惡心及嘔吐，伴低熱、周身不適、精神不振等非特異性癥狀。隨病情發(fā)展，頭痛漸加重轉(zhuǎn)為持續(xù)性、精神異常、躁動(dòng)不安，嚴(yán)重者出現(xiàn)不同程度意識(shí)障礙。肺隱球菌病-呼吸科肺部是隱球菌侵入的門戶適用科室及臨床意義中樞神經(jīng)系統(tǒng)隱球菌病-神經(jīng)內(nèi)科適用科室及臨床意義皮膚黏膜隱球菌病-皮膚科

10%～15%的隱球菌病患者出現(xiàn)皮膚損害，比如出現(xiàn)丘疹、水皰、膿皰、傳染性軟疣樣丘疹、痤瘡樣膿皰等癥狀。

兒童腦膜炎-兒科

兒童由于免疫系統(tǒng)不健全，也容易被隱球菌感染，一般兒童的腦脊液樣本都會(huì)做隱球菌篩查免疫缺陷人群-感染科、器官移植科、ICU等新型隱球菌作為一種機(jī)會(huì)性感染真菌，主要侵犯免疫缺陷人群，如器官移植患者以及AIDS患者及使用免疫抑制劑人群等。

適用科室及臨床意義適用科室及臨床意義臨床意義在撒哈拉以南的非洲地區(qū)，隱球菌腦膜炎是造成艾滋患者死亡的一種重要疾病，隱球菌抗原可以在病癥發(fā)生的幾周前被檢測(cè)到。隱球菌抗原的檢測(cè)對(duì)于隱球菌腦膜炎的預(yù)防有非常積極的作用。臨床意義在撒哈拉以南的非洲地區(qū)，隱球菌腦膜炎是造成艾滋患者死血清型靈敏度(ng隱球菌抗原/ml)敏感性差，陽(yáng)性檢出率很低兒童由于免疫系統(tǒng)不健全，也容易被隱球菌感染，一般兒童的腦脊液樣本都會(huì)做隱球菌篩查中樞神經(jīng)系統(tǒng)隱球菌病-神經(jīng)內(nèi)科兒童由于免疫系統(tǒng)不健全，也容易被隱球菌感染，一般兒童的腦脊液樣本都會(huì)做隱球菌篩查兒童由于免疫系統(tǒng)不健全，也容易被隱球菌感染，一般兒童的腦脊液樣本都會(huì)做隱球菌篩查10%～15%的隱球菌病患者出現(xiàn)皮膚損害，比如出現(xiàn)丘疹、水皰、膿皰、傳染性軟疣樣丘疹、痤瘡樣膿皰等癥狀。新型隱球菌感染可發(fā)生于全身多個(gè)部位，最常見(jiàn)的感染主要發(fā)生在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、肺部、皮膚等。隱球菌抗原的檢測(cè)對(duì)于隱球菌腦膜炎的預(yù)防有非常積極的作用。膠體金法和培養(yǎng)/墨汁染色對(duì)比隱球菌莢膜多糖抗原GXM(Glucuronoxylomannan,GXM)：AdaptedfromKozelandBauman,ExpertOpin.隱球菌抗原的檢測(cè)對(duì)于隱球菌腦膜炎的預(yù)防有非常積極的作用。10%～15%的隱球菌病患者出現(xiàn)皮膚損害，比如出現(xiàn)丘疹、水皰、膿皰、傳染性軟疣樣丘疹、痤瘡樣膿皰等癥狀。樣本在運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)保持在2-8℃或者-20℃以下。臨床意義

篩查了HIV感染病人進(jìn)行隱球菌抗原預(yù)防的成本效益，使用隱球菌抗原可以顯著降低成本血清型靈敏度(ng隱球菌抗原/ml)臨床意義篩查了H臨床意義莢膜多糖抗原是隱球菌特有的分泌物，是隱球菌感染確診的依據(jù)。在感染的初期，莢膜多糖抗原就被檢測(cè)到，因此是隱球菌病早期診斷的標(biāo)志物。隨著病情的發(fā)展，莢膜多糖抗原的含量會(huì)隨之發(fā)生變化，還可作為病情監(jiān)測(cè)的指標(biāo)。臨床意義莢膜多糖抗原是隱球菌特有的分泌物，是隱球菌感染確診的G實(shí)驗(yàn)：檢測(cè)真菌細(xì)胞壁特有成分1,3-β-D-葡聚糖吞噬細(xì)胞將菌吞噬消化后釋放1,3-β-D-葡聚糖到血液不能檢測(cè)到的真菌：隱球菌和接合菌（包括毛霉菌、 根霉菌等）G實(shí)驗(yàn)檢測(cè)隱球菌為陰性結(jié)果的原因：隱球菌含1,3-β-D-葡聚糖的量少莢膜很厚，不易被吞噬細(xì)胞消化聯(lián)合檢測(cè)的意義G實(shí)驗(yàn)：聯(lián)合檢測(cè)的意義聯(lián)合檢測(cè)的意義聯(lián)合檢測(cè)的意義

隱球菌病感染診斷現(xiàn)狀一

產(chǎn)品介紹二

適用科室及臨床意義三

相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)四隱球菌病感染診斷現(xiàn)狀一產(chǎn)品介紹二適用科室及臨床意義三陰性對(duì)照為：將2滴樣本稀釋液加入試管中。按照無(wú)菌操作收集腦脊液、血漿和血清樣本。半定量檢測(cè)操作步驟-2新型隱球菌作為一種機(jī)會(huì)性感染真菌，主要侵犯免疫缺陷人群，如器官移植患者以及AIDS患者及使用免疫抑制劑人群等。ELISA（莢膜多糖抗原）10%～15%的隱球菌病患者出現(xiàn)皮膚損害，比如出現(xiàn)丘疹、水皰、膿皰、傳染性軟疣樣丘疹、痤瘡樣膿皰等癥狀。接受大劑量皮質(zhì)類固醇或單克隆抗體（如阿侖單抗、英夫利昔單抗）和/或其他免疫抑制劑治療的患者TortoranoAMetal.Perfect,etc.樣本在運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)保持在2-8℃或者-20℃以下。隱球菌侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見(jiàn)，包括腦膜炎或亞急性腦膜炎、散播型腦膜炎等。384例真菌感染(318例侵襲性念珠菌感染；10%～15%的隱球菌病患者出現(xiàn)皮膚損害，比如出現(xiàn)丘疹、水皰、膿皰、傳染性軟疣樣丘疹、痤瘡樣膿皰等癥狀。膠體金法和培養(yǎng)/墨汁染色對(duì)比血清型靈敏度(ng隱球菌抗原/ml)收錄指南共識(shí)中聲明，隱球菌莢膜多糖抗原的存在是肺侵襲性隱球菌病的的確診證據(jù)之一陰性對(duì)照為：將2滴樣本稀釋液加入試管中。收錄指南共識(shí)中資質(zhì)認(rèn)證資質(zhì)認(rèn)證物價(jià)標(biāo)準(zhǔn)（2014年版）物價(jià)標(biāo)準(zhǔn)（2014年版）物價(jià)標(biāo)準(zhǔn)（2014年版）物價(jià)標(biāo)準(zhǔn)（2014年版）謝謝大家謝謝大家HIV感染者器官移植患者接受大劑量皮質(zhì)類固醇或單克隆抗體（如阿侖單抗、英夫利昔單抗）和/或其他免疫抑制劑治療的患者其他無(wú)基礎(chǔ)疾病的患者JohnR.Perfect,etc.ClinicalInfectiousDiseases2010;50:291–322

美國(guó)感染病學(xué)會(huì)的“隱球菌病治療臨床實(shí)踐指南（2010年更新）”中指出，隱球菌病的易感人群主要包括：宿主因素HIV感染者JohnR.Perfect,etc.Cl半定量檢測(cè)操作步驟-2半定量檢測(cè)操作步驟-2聯(lián)合檢測(cè)的意義聯(lián)合檢測(cè)的意義10%～15%的隱球菌病患者出現(xiàn)皮膚損害，比如出現(xiàn)丘疹、水皰、膿皰、傳染性軟疣樣丘疹、痤瘡樣膿皰等癥狀。接受大劑量皮質(zhì)類固醇或單克隆抗體（如阿侖單抗、英夫利昔單抗）和/或其他免疫抑制劑治療的患者吞噬細(xì)胞將菌吞噬消化后釋放1,3-β-D-葡聚糖到血液血清型靈敏度(ng隱球菌抗原/ml)莢膜多糖抗原是隱球菌特有的分泌物，可以作為隱球菌感染的診斷依據(jù)對(duì)于半定量滴定檢測(cè)，患者的滴度應(yīng)報(bào)告為產(chǎn)生陽(yáng)性結(jié)果的最高稀釋度。隱球菌抗原的檢測(cè)對(duì)于隱球菌腦膜炎的預(yù)防有非常積極的作用。2011,